茶毛虫核型多角体病毒(EpNPV)多角体蛋白基因的定位及克隆

The polyhedrin gene of EpNPV was located on Hin d III E, Xba I B, Eco RI J, Kpn I A, Pst I F, Bam H I G fragments under stringent condition(68℃,in water),by using the DIG labeled Bam H I F fragment of AcMNPV DNA as the probe.In order to sequence the EpNPV polyhedrin gene,the Bam H I G fragment was cloned into pTZ19R vector.Then the fragment was digested by Xba I? Hin d III,and subcloned into pTZ19R.

茶毛虫核型多角体病毒对茶毛虫的致病性研究

研究了茶毛虫核型多角体病毒（Euproctis pseudoconspersa nuclear polyhedrosis virus，简称EpNPV）的室内外增殖、分离粗提，以及对茶毛虫（Euproctis pseudoconspersa Strand）室内毒力测定、田间防治效果和病毒电镜检测。采用室内离体茶树嫩枝水培，10^6 PIB／ml EpNPV喷雾接种2～3龄茶毛虫，或大田直接喷雾处理2-3龄茶毛虫，在罹病幼虫液化前及时收集虫尸，完成病毒增殖。10^6 PIB／ml、10^7 PIB／ml、10^8 PIB／ml EpNPV室内处理第12天致病率分别为43．60％、76．13％和64．68％；第14天致病率分别为59．17％、95．71％和95．70％。大田试验10^7 PIB／ml喷雾处理第15天防治效果达78．11％。经透射电镜观察田间防治大量感病茶毛虫虫尸，证实为EpNPV致病死亡。

茶毛虫核型多角体病毒基因组酶切分析及质粒文库的构建

应用限制性内切酶图谱分析法，估算茶毛虫核型多角体病毒（ＥｐＮＰＶ） 基因组大小为１３１．０９ ｋｂ；通过随机克隆，将ＥｐＮＰＶ 基因组８ 条ＢａｍＨ Ⅰ酶切片段中的６ 条、１３ 条Ｐｓｔ Ⅰ酶切片段中的７ 条、２６ 条ＥｃｏＲ Ⅰ酶切片段中的７ 条、２１ 条Ｈｉｎｄ Ⅲ酶切片段中的７ 条、１４ 条Ｘｂａ Ⅰ酶切片段中的９ 条分别克隆至载体ＰＴＺ１９Ｒ，构建了ＥｐＮＰＶ基因组的部分质粒文库。

茶毛虫核型多角体病毒防治茶毛虫的效果及持效性

应用茶毛虫核型多角体病毒对茶园第1代茶毛虫进行了防治试验。结果表明,浓度为3×106、5×106、7×106和9×106PIB·mL-1的茶毛虫核型多角体病毒对茶毛虫的防治效果分别达85.6%、92.3%、94.8%和97.0%,对第2代茶毛虫的持续防治效果分别达78.7%、83.6%、91.3%和94.9%;茶毛虫核型多角体病毒浓度与茶毛虫发病死亡率之间呈显著正相关,与茶毛虫发病死亡时间呈显著负相关。

茶毛虫核型多角体病毒不同分离株的毒力水平与遗传结构关系分析

4个茶毛虫核型多角体病毒(EpNPV)分离株对茶毛虫的毒力测定结果表明,浙江分离株的毒力最强,其LC50为2.5×106 PIB/mL;湖南分离株的毒力最弱,其LC50为13.36×106 PIB/mL。不同分离株的毒力强弱依次为浙江分离株>贵州分离株>湖北分离株>湖南分离株,但贵州分离株与湖北分离株的毒力相差不大,LC50分别为9.5×106 PIB/mL和7.31×106 PIB/mL。测定了EpNPV 4个分离株的5个与病毒复制、病毒—宿主关系、毒力水平相关的功能基因序列,分析其不同株系间的遗传结构,发现湖北分离株和贵州、湖南两分离株的相似度最高(99.7%);浙江分离株和湖南分离株间的相似度最低(99.4%)。基于5个基因拼接序列构建的系统进化树显示,湖南(HN)和湖北(HB)两个株系最先聚类并为一支,再与贵州(GZ)分离株聚类,最后才与浙江分离株(ZJ)聚合,说明浙江分离株与其他3个分离株的遗传距离均较远。试验结果初步表明,EpNPV不同株系间的毒力水平差异与其遗传结构差异明显相关。

用ELISA检测人血清中茶毛虫核型多角体病毒

用间接ELISA法,以109份人血清作为抗原及抗体,与茶毛虫核型多角体病毒及其抗血清进行检测,以确定茶毛虫核型多角体病毒对人群的安全性,结果均呈阴性反应。试验说明,茶园应用茶毛虫核型多角体病毒杀虫剂对人群无害。

乌桕毒蛾核型多角体病毒江苏株的研究

本文报道了乌桕毒蛾ＮＰＶ江苏株（ＪＳＥｂＮＰＶ）的形态特征、组织病理、核酸性质和生物活性等方面的研究。该毒株的包含体为三角、四角或不规则形，大小平均１．８５μｍ，病毒粒子为杆状，大小平均为２９５×５４ｎｍ，属多粒包埋型（ＭＥＶ）。主要侵染寄生昆虫的脂肪体、气管基质细胞、血细胞和体壁真皮细胞。对乌桕毒蛾３龄幼虫的ＬＣ５０为９．７２×１０４ＰＩＢ·ｍＬ－１。

茶毛虫核多角体病毒侵染后宿主细胞学的病变

本文应用超薄切片、冰冻断裂、扫描电镜等技术,对茶毛虫核多角体病毒侵染后宿主细胞病理超微结构的变化等进行了研究。结果表明:病毒侵染72—120小时后,宿主中肠细胞器,如线粒体、内质网、核糖体、板层小体、溶酶体等均有明显的病变。同时,在中肠细胞表面有病毒粒子吸附外,细胞表面的微绒毛亦有倒塌肿胀等病症表现。

茶毛虫核型多角体病毒Bt混剂的作用特性

用生物测定的方法,研究了茶毛虫核型多角体病毒(EpNPV)与苏云金杆菌(Bt)配制而成的茶毛虫核型多角体病毒Bt混剂(EpNPV-Bt)的增效作用、速效作用、拒食作用和兼治作用。结果表明,在16～28℃温度范围内,EpNPV-Bt对茶毛虫的作用在整个死亡周期表现为相加作用,协同毒力指数主要分布在-20%～20%之间,其中16、19、28℃的死亡前期表现为增效作用,协同毒力指数大于20%,22℃的死亡中期表现为拮抗作用,协同毒力指数小于-20%。EpNPV-Bt对茶毛虫LT30为5.6天,比EpNPV减少3.8天,幼虫的死亡速度提高了1.8倍。EpNPV-Bt对茶毛虫的拒食效果明显,取食量比EpNPV减少66.2%。EpNPV-Bt对茶刺蛾、用克尺蠖和茶尺蠖等茶树害虫具有兼治作用,其中对茶刺蛾的死亡率达85.8%。