伊文思蓝脂质体的制备及其在小鼠体内的分布

目的 :研究伊文思蓝脂质体在小鼠体内的组织分布状况 ,为研究脑靶向脂质体奠定基础。方法 :用反相蒸发法制备伊文思蓝脂质体 ,用凝胶柱分离的方法测得脂质体的包封率为 2 5 .0 7% ,比较了伊文思蓝脂质体和伊文思蓝水溶液在小鼠体内的组织分布状况。结果 :磷脂与胆固醇的比例对伊文思蓝脂质体的包封率有较大的影响 ;尾静脉注射后 2～ 4h时脂质体组在脑中伊文思蓝的浓度高于水溶液组。结论 :伊文思蓝可作为检测脂质体跨血脑屏障的模型药物 。

聚氧乙烯蓖麻油微乳对血脑屏障通透性的影响

目的 :以伊文思蓝为指示剂 ,研究聚氧乙烯蓖麻油 (cremophor)微乳对血脑屏障通透性的影响。方法 :采用甲酰胺提取 紫外分光光度法测定小鼠各脏器中伊文思蓝的浓度 ,比较不同微乳体系中伊文思蓝在小鼠体内的组织分布情况。结果 :伊文思蓝在脑组织中的浓度依次为 :聚氧乙烯蓖麻油微乳、陈皮油微乳、(cre mophor/Tween 80为 1∶1)微乳、Tween 80微乳、胶束、伊文思蓝水溶液。其中聚氧乙烯蓖麻油微乳、陈皮油微乳组脑中伊文思蓝的浓度分别为水溶液组的 5 . 0倍、3 2倍 (P <0 . 0 1) ,胶束组的 3 0倍、1 9倍 (P <0 . 0 5 ) ,脑靶向效果显著。结论 :微乳对血脑屏障通透性有一定的促进作用 ,且聚氧乙烯蓖麻油开放血脑屏障的作用较Tween 80强。

大鼠急性脑缺血后血脑屏障通透性变化的实验研究

目的:探讨大鼠脑缺血后血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的变化。方法:制做永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型,之后在缺血后的不同时间点,从大鼠股静脉注射2%的伊文思蓝(Evens Blue,EB),通过荧光显微镜及甲酰胺提取两种方法来评估BBB对EB的通透性。结果:随着缺血时间的增加,脑组织EB蓝染的范围逐渐增大,荧光光斑数量增加,强度增强。甲酰胺法显示,EB的渗出量在3h时即有增加,12h达到高峰以后逐渐降低,其测定结果与荧光显微镜下的观察结果较为一致。结论:脑缺血后BBB的通透性增高,并在48h内呈单相变化。另外还发现,EB法不宜用来比较缺血区与非缺血区间BBB通透性的差异。

灯盏花素对脑缺血再灌注损伤的保护作用和治疗时间窗

目的 :研究灯盏花素对脑缺血再灌注损伤的保护作用和治疗时间窗。方法 :线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断 (MCAO)局灶性脑缺血模型 ,缺血前给予灯盏花素 5 0、75mg·kg- 1 ,ig,qd× 7d。末次给药 1h制备MCAO模型 ,缺血 2h ,再灌注 3h ,评价神经功能状态、脑水肿和脑梗死范围 ;放免法测定血清IL 8的含量和分光光度法测定脑组织中伊文思蓝 (EB)的含量 ;灯盏花素的治疗时间窗研究 ,采用MCAO局灶性脑缺血 2h,再灌注 2 4h模型 ,分别在缺血开始 3、4.5、6h腹腔注射灯盏花素 75mg·kg- 1 ,再灌注 2 2h,重复给药 1次 ,再灌注 2 4h ,评价神经功能状态、脑水肿和脑梗死范围。结果 :灯盏花素75mg·kg- 1 ,ig,qd× 7d能改善大鼠脑缺血再灌注后神经功能评分 ,减轻脑水肿和减少脑梗死范围 ,降低血清IL 8的含量和降低大鼠脑组织中EB的含量 ;在缺血后 3h治疗用药 ,能有效改善大鼠脑缺血再灌注后神经功能评分 ,减轻脑水肿和减少脑梗死范围 ,4.5h开始用药 ,疗效下降 ,6h开始用药 ,上述各指标有下降趋势 ,但无统计学差异。结论 :灯盏花素对脑缺血再灌注损伤有保护作用 ,有效治疗时机在缺血 4.

黄芪与红芪对脑缺血动物保护作用的研究

用尼龙线插入法造成大鼠大脑中动脉栓塞模型，黄芪水煎剂（４．２６，７．１ｇ／ｋｇ）与红芪水煎剂（７．１ｇ／ｋｇ）均可明显改善大鼠大脑中动脉栓塞所致的运动障碍和脑毛细血管通透性增加。黄芪水煎醇沉剂（１２．５ｇ／ｋｇ）可明显改善双侧结扎颈总动脉大鼠脑含水量的增加，红芪水煎醇沉剂有改善趋势。

大分子葡萄糖酐所致血瘀模型小鼠中偶氮蓝渗出量与血瘀程度的相关性

目的探讨大分子葡萄糖酐血瘀模型小鼠偶氮蓝渗出量和血瘀程度的相关性。方法用0.5%偶氮蓝将大分子葡萄糖酐配制成10%、5%、2.5%的浓度,尾静脉注射,0.1mL/10g,分别在注入后0.5、1、2h对造模小鼠耳、舌的颜色进行观察,并用丙酮无水硫酸钠溶液将耳组织中的偶氮蓝提出,在590μm测定各实验组小鼠耳廓偶氮蓝含量。结果实验结果表明,不同浓度的大分子葡萄糖酐所致血瘀模型的血瘀程度明显不同,同单用偶氮蓝组小鼠相比,大分子葡萄糖酐10%、5%、2.5%的浓度造模小鼠的耳、舌的颜色明显呈现蓝色,随着剂量的增加偶氮蓝渗出量明显增加(P<0.05或0.01),在尾静脉注射后0.5h,造模小鼠耳、舌的颜色呈现点状或片状蓝色,在尾静脉注射后1h,造模小鼠耳、舌的颜色明显呈现蓝色,在尾静脉注射后2h,造模小鼠耳、舌的颜色明显消退。结论表明大分子葡萄糖酐所致血瘀模型的血瘀程度和偶氮蓝渗出量明显相关,呈现明显的量效和时效关系。

不同表面活性剂对伊文思蓝脂质体体内外性质的影响

目的 寻找与二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 聚乙二醇 (DSPE PEG)功能相似的表面活性剂 ,以增加脂质体的稳定性 ,改善其体内分布 ,提高靶向性。方法 制备伊文思蓝 (EB)脂质体 ,考察胆固醇与磷脂的比例对伊文思蓝脂质体包封率的影响 ;比较用DSPE PEG、吐温 80 (Tween 80 )和苄泽 3 5 (Brij 3 5 )修饰后的EB脂质体的包封率和在大鼠体内组织分布状况的变化。结果 EB脂质体的包封率最高为 2 5 3 0 %。用DSPE PEG、Tween 80和Brij 3 5修饰后使EB脂质体的包封率略有下降 ,但差别不显著 ;体内分布实验结果显示 :修饰后的脂质体在肝、脾和肾中EB的浓度均有不同程度的降低 ,脑中EB的浓度有所提高 ,而且以Tween 80修饰组最显著。结论 DSPE PEG、Tween 80和Brij 3 5对EB脂质体的包封率影响较小。Brij 3 5对EB脂质体的作用与DSPE PEG相似 ,能提高脂质体逃避网状内皮系统吞噬的能力 ;Tween 80主要能增加EB脂质体在大鼠脑组织中的分布 。

激光间质热治疗开放血脑屏障的研究

目的 :激光间质热治疗 (Interstitial L aser Therm otherapy,IL TT)是一种侵袭性小的脑肿瘤治疗新方法 ,为查明激光间质热治疗对血脑屏障的影响。方法 :本实验利用伊文思蓝作为示踪剂 ,观察激光间质热治疗后血脑屏障开放范围和程度。结果 :激光间质热治疗后效应灶脑组织伊文思蓝含量立即增加 ,并随 IL TT后时间的延长而增加 ,至 48小时达到高峰 ,其后下降 ,可维持一周。结论 :激光间质热治疗开放血脑屏障效果可靠 。

急性和慢性帕金森病大鼠血脑屏障通透性变化的研究

目的通过观察帕金森病(PD)大鼠在不同时间点脑组织中伊文斯蓝(EB)含量变化来探讨急性和慢性PD大鼠血脑屏障(BBB)通透性的变化。方法脑立体定向将6-羟基多巴胺(6-OHDA)注入大鼠右侧纹状体建立PD模型。将大鼠随机分成对照组和模型组,后者又分为6 h,12 h,24 h,4周组,最后一组为慢性PD组。按BELAYEV法使用EB测定BBB通透性。结果急性PD大鼠BBB通透性在6 h达到高峰(P<0.01),12 h逐渐下降(P<0.05),持续至24 h(P<0.05),慢性PD大鼠(4周)与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论急性PD时伴有BBB的通透性增加,而慢性PD时BBB的通透性未见改变。

高频诊断超声联合微泡对肝血管通透性影响的实验研究

目的探讨高频诊断级超声联合微泡对肝血管通透性的影响。方法选择机械指数(mechanical index,MI)为1.2的高频诊断超声,并经实验大鼠尾静脉注射0.2ml/kg微泡造影剂,超声辐照大鼠肝脏时间分为1、3、5、7min。用伊文氏蓝(Evens Blue,EB)观察超声辐照后肝血管通透性的改变,透射电镜观察肝血管内皮细胞及肝细胞结构改变。结果高频诊断超声联合微泡辐照肝脏后,肝组织EB含量与对照组相比差异有统计学意义,透射电镜证实肝血管内皮细胞肿胀,连接中断明显。结论高频诊断超声联合微泡辐照肝脏时可增加肝脏血管通透性。

大鼠急性脊髓完全性损伤后血脊膜屏障通透性的变化

目的:探讨大鼠急性脊髓完全性损伤后血脊膜屏障(blood-spinal cord barrier,BSCB)通透性的变化。方法:本研究选用wistar大鼠48只,制作Allen氏脊髓打击模型(打击当量300gcf),随机分为对照组(n=6)和脊髓损伤组(n=42),后者又根据伤后不同时间点分为2、8、24、48、72h以及1、2周组,每组6只,再分为A组和B组,每组各3只。A组从大鼠股静脉注射2%的伊文思蓝(Evens blue,EB),通过荧光显微镜下观察;B组用干湿重法测定脊髓水肿变化情况。结果:随着脊髓损伤时间的延长,脊髓组织EB蓝染的范围逐渐增大,荧光光斑数量增加,强度增强,24～48h达高峰,与脊髓组织内水肿时间一致,72h后水肿逐渐减轻,其内开始出现坏死灶,1～2周可见明显大小不等的囊腔形成,未见EB蓝染。结论:脊髓损伤后BSCB的通透性增高,并在24～48h达高峰,72h后逐渐下降,1周后BSCB通透性明显减小。

诊断超声联合微泡对大鼠移植瘤血管通透性影响的实验研究

目的研究诊断超声联合微泡对大鼠移植瘤血管通透性的影响。方法将48只已建立Walker-256皮下移植瘤模型的SD大鼠随机分为4组：空白对照（A）组、单纯微泡剂（B）组、单纯超声（C）组和超声联合微泡（D）组。以伊文思蓝（Evensblue，EB）为指示剂，选择频率为1．75MHz、机械指数为1．4的诊断超声持续照射肿瘤区5rain，经大鼠尾静脉注射／不注射微泡造影剂。使用分光光度计和标准曲线法测量大鼠肿瘤组织内EB含量变化，激光共聚焦显微镜观察EB外溢情况。结果超声联合微泡可增加肿瘤组织微血管通透性。D组瘤内EB含量较A、B、C组明显增加（P〈0．05），血管周围EB外溢明显。A、B、C组EB含量比较差异无统计学意义（P〉0．05），血管周围均未见明显EB渗出。结论在一定条件下，诊断超声联合微泡可明显提高辐照肿瘤组织血管通透性，这对临床肿瘤化疗患者具有潜在的应用意义。

弓形虫速殖子死活快速鉴别的实验研究

目的寻求快速鉴别弓形虫速殖子死活的染色方法。方法用0.1%伊文思蓝、0.4%台朌蓝和0.5%溴酚蓝三种染液分别对死、活弓形虫速殖子进行染色。结果前二种染液均能使死亡弓形虫速殖子在1min内着色,活虫则不着色;后一种染液能使活动弓形虫速殖子在1min内着色,死虫则不着色。结论3种染液染色均可快速鉴别弓形虫速殖子死活。

n-3脂肪酸对高胆固醇血症内皮通透性影响的实验研究

为研究n-3脂肪酸对内皮的保护功能,以内皮通透性作指标,采用伊文氏蓝为示踪剂,使用荧光显微镜研究通透深度,使用丙酮-生理盐水抽提分光光度计测定通透量。结果表明高胆固醇血症大鼠模型内皮通透性明显增加(P<0.001),n-3脂肪酸可显著拮抗通透性增加(P<0.01)。说明n-3脂肪酸对动脉粥样硬化的有益作用机制之一是保护内皮功能。