微小核糖核酸miR-766通过靶向调控环腺苷酸活化交换蛋白1促进高糖培养下心肌细胞凋亡

目的探讨微小核糖核酸miR-766在不同葡萄糖浓度培养的心肌细胞中的表达水平，明确其对心肌细胞凋亡的影响及相关分子机制。方法在不同葡萄糖浓度条件下（正常糖5mmol／L、高糖15、25及35mmol／L）培养的心肌细胞中，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测miR-766的表达差异，以流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡情况，Western blot法检测各组环腺苷酸活化交换蛋白l（Epac-1）、Bax蛋白、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3（caspase-3）活化片段蛋白表达水平。采用生物信息学预测miR-766的靶基因，并进一步采用双荧光素酶报告基因法进行验证。组间数据比较采用t检验。结果与5mmol／L相比，miR-766在15、25及35mmol／L组的心肌细胞中表达上调（3．40±0．38，4．61±0．34，6．17±0．42比0．97±0．04，t=11．13l-21．493，P〈0．05），而转染miR-766抑制剂后，细胞的凋亡率明显降低[（16．43±0．31）％比（26．45±0-31）％，t=39．566，P〈0．05]；Western blot结果表明，在人心肌细胞中miR-766高表达者Epac-1的蛋白表达减少（0．48±0．07比1．00±O．12，t=6．695，P〈0．05），而抑制miR-766的表达后Epac-1的表达增加（1．23±0．12比0．70±0．10，t=5．884，P〈0．05）；荧光素酶报告基因结果表明，miR-766模拟物或抑制剂与Epae-1基因3＇-非翻译区野生型报告基因共转染时，报告基因荧光素酶活性明显变化（3．22±0．07比5．01±0．96，6．98±0．61比5．01±O．96，t=-3．239～-3．008，P〈0．05）；在高糖培养条件下抑制miR-766表达能够部分拮抗高糖对Epac-1蛋白表达的抑制作用（0．80±0．05比0．53±0．05，t=6．810，P〈0．05）；在miR-766模拟物处理的H9e2细胞中回补Epae-1，easpase-3活化片段蛋白的表达则明显降低（O．67±0．07比1．07±0．12，t=-5．050，P〈0．05）。结论在高糖培养的心肌细胞中高表达的miR-766通过靶向调控Epac-l基因的表达，进而促进细胞的凋亡。