冲击波对肺血管内皮细胞通透性影响的机制

采用不同压力梯度爆炸冲击波对培养单层肺微血管内皮细胞滤膜作用的模型 ,观察了不同压力梯度爆炸冲击波对培养的肺微血管内皮细胞单层通透性的影响 ,并从一般病理学与细胞骨架结构角度探讨了冲击波作用下内皮通透性变化的可能机制。结果表明 ,电导法测定时 ,10 0kPa左右的爆炸冲击波压力作用即可见到单层内皮通透性的显著增加 ;35 0kPa以下的爆炸冲击波损伤主要以内皮细胞间隙的增加为主要类型 ,而 60 0kPa以上的爆炸冲击波损伤 ,则主要以内皮细胞的脱落性损伤为主。爆炸冲击波作用下内皮通透性变化的发生机制与细胞骨架肌球蛋白结构的变化有关。

晚期糖化终产物诱导内皮细胞通透性增高

本文探讨了晚期糖化终产物(advanrced glycation end products,AGEs)修饰蛋白对内皮细胞通透性及细胞骨架肌动蛋白的形态学影响,以及特异的AGEs受体(receptors for AGEs,RAGE)、氧化应激和p38 MAPK通路在此病理过程中的作用。用不同浓度的AGEs修饰人血清白蛋白(AGE-HSA)与人脐静脉内皮细胞株ECV304在体外共同培养不同时间,并设立对照组进行比较,采用TRITC荧光标记白蛋白漏出法测定单层内皮细胞的通透系数Pa值,荧光染色法示细胞骨架的形态学改变。与对照组相比,AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式引起单层内皮细胞通透性的升高及细胞骨架肌动蛋白F-actin形态的改变;可溶性RAGE的抗体(anti-RAGE IgG)、NADPH氧化酶抑制剂(apocynin)及p38抑制剂SB203580均可减轻AGEs对内皮细胞屏障功能和形态的影响。结果提示,AGEs修饰蛋白对单层内皮细胞通透性及骨架重排的作用可能通过与内皮细胞上的RAGE结合,引起细胞内的氧化应激,并激活p38 MAPK通路所介导。

对氧磷对血管内皮细胞的损伤作用及机制探讨

目的为探讨有机磷酸酯对血管内皮细胞和血管内皮功能是否有直接的损伤作用。方法用不同浓度的对氧磷分别与大鼠离体血管环和培养的人脐静脉单层内皮细胞共孵不同的时间,以乙酰胆碱引起的血管内皮依赖性舒张反应和单层内皮细胞通透性等为观察指标,检测对氧磷对血管内皮的损伤作用。结果对氧磷(36.3nmol/L^36.3μmol/L)与血管环共孵,呈浓度和时间依赖性地显著抑制乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应,而对硝普钠引起的非内皮依赖性舒张反应没有明显的影响。对氧磷与内皮细胞共孵不同的时间,呈浓度和时间依赖性地显著增加单层内皮细胞的通透性。对氧磷在损伤血管内皮的同时也导致了血管组织及细胞培养液中一氧化氮浓度和超氧化物歧化酶活性的降低、脂质过氧化代谢产物丙二醛浓度的升高。加入左旋精氨酸能部分拮抗对氧磷对血管内皮功能的损伤作用,用阿托品预处理则不影响对氧磷的作用。结论该研究提示对氧磷对血管内皮细胞有直接损伤作用,其机制可能与对氧磷诱发氧化应激,进而导致脂质过氧化反应发生和增加内皮细胞的通透性有关。

灯盏花素对血小板活化因子致肺微血管内皮细胞损伤的影响

目的 探讨血小板活化因子 (PAF)诱导肺微血管内皮细胞损伤的机制及灯盏花素的干预作用。方法 观察PAF对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞 (RPMVEC)的形态、单层通透性、F 肌动蛋白 (F actin)的影响和灯盏花素干预后的变化 ,F actin用流式细胞仪测定。结果 PAF浓度大于 0 1mg·L-1作用 4 8h内观察到细胞脱落和破裂。 10mg·L-1PAF 12 0min内可使RPMVEC单层通透性增高、F actin解聚 ,灯盏花素可抑制上述变化。结论 ①PAF引起RPMVEC脱落和破裂呈时间和剂量依赖性。②PAF引起内皮单层通透性的增高的机制与F actin解聚密切相关。③灯盏花素可抑制PAF引起RPMVEC单层通透性的增高和F actin下降 ,对PAF引起的RPMVEC损伤有一定保护作用。

爆炸冲击波对单层肺微血管内皮细胞通透性的影响

采用不同压力梯度爆炸冲击波对培养单层肺微血管内皮细胞滤膜作用的模型,观察了不同压力梯度爆炸冲击波对培养的肺微血管内皮细胞单层通透性的影响。结果表明,电导法测定时,100kPa左右的爆炸冲击波压力作用即可见到单层内皮通透性的显著增加;轻度爆炸冲击波的损伤主要以内皮细胞间隙的增加为主要类型,而中强度以上的爆炸冲击波损伤,则主要以内皮细胞的脱落性损伤为主。

血管紧张素Ⅱ对肾小球内皮细胞骨架和单层通透性的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养肾小球内皮细胞(GENC)形态、单层通透性、肌动蛋白骨架的影响,探讨AngⅡ对GENC炎性损伤的机制。方法倒置显微镜观察AngⅡ对体外培养大鼠GENC的形态影响;用二室弥散系统检测AngⅡ对GENC单层通透性的影响;用免疫细胞化学的方法观察AngⅡ对GENCF-肌动蛋白(F-actin)分布的影响。结果AngⅡ浓度大于0.1mg·L-1作用48h内观察到细胞脱落和破裂。10mg·L-1AngⅡ6、12h可使GENC单层通透性增高、F-actin解聚。结论AngⅡ引起GENC脱落和破裂呈时间和剂量依赖性;AngⅡ引起内皮单层通透性的增高的机制可能与F-actin解聚相关;

爆炸冲击波对肺微血管内皮细胞损伤作用的病理学观察

目的 :通过观察爆炸冲击波对肺微血管内皮细胞的损伤 ,了解伤后微循环功能变化的病理学基础。方法 :采用爆炸冲击波对兔损伤动物模型以及对培养肺微血管内皮细胞损伤体外模型 ,从光镜、电镜水平上观察内皮细胞病理学变化。结果 :光镜下的主要表现为肺泡出血、肺泡隔断裂、肺大泡形成以及肺间质水肿 ,电镜下可见肺微血管内皮细胞肿胀致使血管腔狭窄 ,内皮细胞间裂隙增宽 ,核肿胀、异染色质增多 ,以及线粒体肿胀、嵴排列混乱等病理变化。体外实验主要表现为爆炸冲击波对培养的肺微血管内皮细胞的剥脱性损伤。结论 :爆炸性冲击伤后肺微内皮细胞的损伤严重且广泛 ,是伤后肺微血管通透性变化与肺微循环功能障碍发生的重要病理基础。

内毒素诱导急性肺损伤大鼠血清对内皮细胞通透性的影响及乌司他丁的保护作用研究

目的:研究乌司他丁对大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法:将15只SD大鼠分成3组:A组为健康对照组,B组为内毒素(LPS)诱导ALI组,C组为LPS诱导ALI应用乌司他丁治疗组。收集3组大鼠的血清分别作用于大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC),观察血清刺激后RPMVEC通透性的改变及F-肌动蛋白的变化。结果:B组大鼠的血清使RPMVEC通透性明显增加,C组大鼠的血清明显减小RPMVEC的通透性。3组的通透系数与未加血清对照组通透系数的百分比依次为(7.31±0.27)%、(30.13±1.24)%、(18.94±0.59)%,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。B组大鼠的血清可使RPMVEC F-肌动蛋白的荧光强度明显降低、F-肌动蛋白解聚,C组大鼠血清则明显减低F-肌动蛋白的解聚程度,3组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LPS诱导ALI大鼠的血清可引起RPMVEC单层通透性增高与F-肌动蛋白解聚;乌司他丁可减轻ALI过程中炎症介质对内皮细胞骨架的影响,改善内皮细胞的通透性。

Ang-1对高糖环境中RF/6A单层的保护作用

目的探讨高浓度葡萄糖及血管生成素-1(Ang-1)对内皮细胞(EC)单层通透性的影响。方法将猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)接种于0.8μm聚碳酸酯微孔滤膜,形成致密单层后分3个组培养。正常对照组:含葡萄糖25mmol/L;高糖组:含葡萄糖40mmol/L;Ang-高糖组:含葡萄糖40mmol/L+Ang-1(250ng/mL)。于1、3、5、7d,4个时间点建立EC单层通透性模型,检测蛋白质渗透压反射系数(δ)及滤过系数(Kf),以监测EC单层通透性的变化;利用Westernblot(NBT/BCIP显色法)检测5d时survivin的表达。结果3、5、7d时,高糖组EC单层通透性增高(P<0.01),Ang-高糖组在5d及7d时,EC单层通透性升高(P<0.01),但仍低于高糖组;Westernblot结果显示,Ang-高糖组survivin表达明显高于其他各组(P<0.01)。结论高糖能够增加EC单层通透性,Ang-1能对抗高糖的这种生物学作用。可能是通过上调凋亡抑制基因survivin的表达,抑制RF/6A的凋亡而发挥生物学作用的。

己酮可可碱对脂多糖诱导的内皮细胞单层通透性的保护作用

目的:探讨己酮可可碱(PTX)对脂多糖(LPS)诱导的内皮细胞单层通透性的保护作用。方法:建立内皮细胞单层损伤模型,随机分为LPS组、PTX组、LPS+PTX组、对照组,测定内皮单层滤过系数、蛋白质渗透压反射系数及进行内皮细胞单层形态学检查。结果:LPS组内皮单层滤过系数显著升高、蛋白质渗透压反射系数显著降低;与正常对照组比较,PTX组的滤过系数和蛋白质渗透压反射系数无明显变化;与LPS组比较,LPS+PTX组两系数及内皮细胞单层形态学检查无明显变化,近似于正常对照组。结论:PTX无降低正常内皮细胞单层通透性的作用;PTX对LPS诱导的内皮细胞单层通透性有保护作用,其机制可能与PTX拮抗LPS导致内皮细胞单层通透性增加的某些环节有关。

烧伤后PMN粘附对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响

目的：观察烧伤后中性粒细胞（ＰＭＮ）对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响，分析ＰＭＮ粘附及其粘附分子ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８在该影响中的介导作用。方法：建立培养肺微血管内皮细胞（ＰＭＥＣ）单层通透性测定的方法，根据处理内皮细胞单层的不同成分，将实验分为７组，用含ＦＩＴＣ－清蛋白的灌流液灌流后，测定液体滤过系数（Ｋｆ）和渗透压反射系数（δ）。结果：烧伤后ＰＭＮ能使反映小分子物质通透性的Ｋｆ值明显增加，使δ显著下降。用单抗封闭ＰＭＮ膜上ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８能使δ值的变化得到纠正；用孔径０．２μｍ的滤膜阻断ＰＭＮ与内皮细胞单层的粘附则使Ｋｆ值和δ值均接近正常水平。结论：白细胞与内皮细胞的粘附是介质类物质发生作用的前提条件，这些物质主要影响肺血管对小分子物质的通透性。粘附分子ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８本身可能具有生物学信号调控的作用。

Ang1-7对AngⅡ诱导肾小球内皮细胞单层通透性变化的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小球内皮细胞(GENCs)损伤时细胞单层通透性的变化,以及血管紧张素1-7(Ang1-7)的干预对上述变化的影响,探讨血管紧张素1-7在肾小球内皮细胞损伤中的作用。方法体外培养大鼠GENCs,随机分组并给予相应处理:正常对照组、AngⅡ组、AngⅡ+Ang1-7组,流式细胞仪检测F-actin的变化,Transwell小室法检测GENCs单层通透性。结果与正常对照组相比,AngⅡ组F-actin显著降低(P <0.01)、单层通透性显著增加(P <0.01);与AngⅡ组相比,AngⅡ+Ang1-7组F-actin显著升高(P <0.01)、单层通透性显著降低(P <0.01)。结论 AngⅡ可导致细胞骨架肌动蛋白F-actin解聚,GENCs单层通透性增高,Ang1-7可抑制AngⅡ对GENCs的损伤,Ang1-7在AngⅡ诱导的GENCs损伤过程中起到一定的调节作用。

G蛋白偶联受体激酶2参与血小板活化因子致肺微血管内皮细胞损伤的机制

目的 探讨G蛋白偶联受体激酶 2 (GRK2 )参与血小板活化因子 (PAF)诱导大鼠肺微血管内皮细胞 (PMVEC)损伤的机制。方法 在体外分离、培养PMVEC的基础上 ,采用微滤器检测PAF作用于PMVEC前后单层通透性的变化 ;用流式细胞仪检测F 肌动蛋白 (F actin)的变化 ;并用Westernblot方法检测PMVEC的GRK2表达 ,用佛波酯刺激PMVEC以观察GRK2的变化及其对单层通透性和F actin的影响。结果 10mg·L- 1 剂量的PAF在 12 0min内可使PMVEC单层通透性增高、F actin解聚 ,GRK2表达明显高于正常对照组 ,佛波酯刺激PMVEC可使GRK2表达进一步增高并可抑制PMVEC单层通透性增高和F actin解聚。结论 PAF作用后可引起PMVEC单层通透性增高和GRK2表达增加 ,且PMVECF actin解聚与单层通透性增高密切相关 ,GRK2表达增加可抑制PMVEC单层通透性增高和F actin解聚 ,减轻PAF对PMVEC的损伤。

尿毒症患者血清对大鼠肺微血管内皮细胞单层通透性和骨架蛋白的影响

目的观察尿毒症患者血清对培养大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVEC）单层通透性、肌动蛋白骨架（F-肌动蛋白）的影响，探讨尿毒症患者血清对肺微血管内皮细胞损伤的机制。方法体外培养大鼠RPMVEC并鉴定；用针头式滤器观察尿毒症患者血清对RPMVEC单层通透性的影响；F．actin用流式细胞仪测定。结果健康对照组6、12h单层通透性系数分别为（0．0382±0．0022）、（0．0393±0．0016）ml·min^-1·cm^-1·kPa^-1；尿毒症患者血清6、12h单层通透性系数分别为（0．0687±0．0014）、（0．0772±0．0031）ml·min^-1·cm^-1·kPa^-1；流式细胞仪测定F-肌动蛋白的值分别为：阴性对照组10．60±3．3、正常健康对照组1233．34±13．92、尿毒症血清组（6h）712±51、尿毒症血清组（12h）613．31±42．81；实验发现尿毒症患者血清100μl作用于RPMVEC6、12h可使RPMVEC的单层通透性增高（P〈0．01）；F-肌动蛋白解聚（P〈0．01），且二者呈负相关（r==0．927，P〈0．01）。结论尿毒症患者血清作用于RPMVEC一定时间，可引起RPMVEC单层通透性的增高与F-肌动蛋白解聚。尿毒症患者血清引起内皮单层通透性的增高的机制与F-肌动蛋白解聚密切相关。