纤连蛋白及其额外结构域A和B在瘢痕疙瘩中的表达

目的研究瘢痕疙瘩及其成纤维细胞中的纤连蛋白(FN)及额外结构域A(EDA)、额外结构域B(EDB)的表达,探讨其在瘢痕疙瘩中的作用。方法使用蛋白质印迹分析及免疫组织化学等方法检测瘢痕疙瘩组织内及成纤维细胞中FN、FN-EDA、FN-EDB的含量。结果蛋白质印迹分析及免疫组织化学染色方法均证明FN、FN-EDA、FN-EDB在瘢痕疙瘩组织中增高明显,且FN-EDA、FN-EDB表达位置与FN差异有统计学意义(P<0.05)。结论瘢痕疙瘩中过表达的FN、FN-EDA、FN-EDB在瘢痕疙瘩形成过程中可能具有不同的促进作用。

抗TNF-α/抗ED-B双特异抗体在酵母中的分泌表达与活性分析

赋予抗TNF-α单链抗体片段(TNF-sc Fv)对炎症组织的特异性,用一段来自人清蛋白(HSA)的柔性连接肽在基因水平上连接TNF-sc Fv和抗B型纤维连接蛋白(B-FN)的额外域B(ED-B)的sc Fv L19,构建了抗TNF-α/抗ED-B单链双特异抗体Bs Db,其中B-FN为炎症组织中特异表达的抗原。Bs Db在毕赤酵母中获得了分泌表达,表达产物经鉴定和纯化制备后,进行了功能分析。结果表明,Bs Db保留了其亲本抗体TNF-sc Fv和L19对抗原的免疫反应性,能够同时结合TNF-α和ED-B,并中和TNF-α的生理作用。而且,Bs Db对抗原的亲和力及中和能力与大肠杆菌包涵体来源的亲本抗体相比显著增强。在小鼠佐剂型关节炎(AIA)模型中,Bs Db能选择性地积累和保留于小鼠的炎症关节,并快速从血浆中清除。说明Bs Db兼备炎症组织的特异性和正常组织的低毒性,在类风湿关节炎及其他慢性炎症性疾病的治疗上具有较大潜力。