阿托伐他汀和卡托普利对系膜细胞增殖及转化生长因子β_1的影响

目的观察阿托伐他汀和卡托普利干预对连续周期性波动的高静水压下大鼠系膜细胞(RMC)增殖及其产生血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和转化生长因子β1(TGF-β1)的影响,并探讨其可能的作用机制。方法RMC分别在生理压力(40mm Hg,PP)、中压(60mm Hg,MP)、高压(80mm Hg,HP)环境下,不同药物(阿托伐他汀10μmol/L、卡托普利10μmol/L)中培养1、3、5、7d。4-甲基偶氮四唑蓝(MTT)法测定各时段细胞增殖量。放射免疫法测定细胞裂解液中AngⅡ浓度。Western Blotting法测定细胞裂解液中TGF-β1含量。结果与PP组1d相比,PP组3、5、7d MC增殖,但AngⅡ浓度、TGF-β1含量无明显变化;MP和HP组从1d开始可见明显细胞增殖(0·79±0·07,0·93±0·10vs0·58±0·05;P<0·05或P<0·01),并随时间延长而进一步升高,AngⅡ和TGF-β1水平在MP和HP组也呈压力依赖性升高[(AngⅡ:130·6±24·3,261·5±51·2vs73·1±10·1)pg/mLP<0·05或P<0·01;TGF-β1:(1·61±0·16,1·86±0·21vs1·00±0·08P<0·01)],7d达到最高。阿托伐他汀和卡托普利均能抑制中、高压力对RMC的上述影响,抑制细胞增殖,并使AngⅡ和TGF-β1水平下降。二者共同作用可进一步抑制细胞增殖,并使AngⅡ和TGF-β1水平进一步下降。结论高静水压能刺激RMC增殖,并引起AngⅡ及TGF-β1水平上升。阿托伐他汀和卡托普利均能部分抑制高静水压引起的AngⅡ增加,继而部分抑制TGF-β1产生。阿托伐他汀与卡托普利存在协同作用。

二甲双胍对TGF-β1诱导的人子宫内膜间质细胞纤维化的影响

目的探讨二甲双胍对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人子宫内膜间质细胞纤维化的影响。方法采用10 ng/ml TGF-β1作用于人子宫内膜间质细胞株(HESCs)诱导其发生纤维化,建立纤维化细胞模型,并给予不同浓度二甲双胍干预。实验分为5组:正常对照组、模型组、10μmol/L二甲双胍干预组、50μmol/L二甲双胍干预组、200μmol/L二甲双胍干预组。qPCR、Westernblotting检测各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原蛋白(Col1α1)及纤维连接蛋白的mRNA及蛋白表达水平;CCK-8、EdU染色检测HESCs细胞增殖情况。结果 5组细胞α-SMA的mRNA表达水平依次为1.003±0.108、4.329±0.342、3.383±0.342、2.310±0.263、1.566±0.205,Col1α1的mRNA表达水平依次为1.002±0.299、3.462±0.695、2.342±0.531、1.970±0.336、1.450±0.233,纤维连接蛋白的mRNA表达水平依次为1.000±0.225、4.455±0.524、3.164±0.317、2.728±0.311、2.145±0.218,组间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。与正常对照组相比,模型组α-SMA、Col1α1、纤维连接蛋白的mRNA表达水平升高(P<0.01);与模型组相比,10、50、200μmol/L二甲双胍干预组α-SMA、Col1α1、纤维连接蛋白的mRNA表达水平均下降(P<0.01)。5组细胞α-SMA的蛋白表达水平依次为0.807±0.198、3.422±0.464、2.770±0.429、2.560±0.430、1.342±0.328,Col1α1的蛋白表达水平依次为0.600±0.124、2.545±0.429、2.035±0.320、1.342±0.312、0.890±0.215,纤维连接蛋白的蛋白表达水平依次为0.780±0.150、3.810±0.417、3.6675±0.326、2.453±0.333、1.080±0.215,组间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。与正常对照组相比,模型组α-SMA、Col1α1、纤维连接蛋白的蛋白表达水平升高(P<0.01);与模型组相比,10、50、200μmol/L二甲双胍干预组α-SMA、Col1α1及50、200μmol/L二甲双胍干预组纤维连接蛋白的蛋白表达水平下降,但10μmol/L二甲双胍干预组纤维连接蛋白的蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。5组细胞OD值分别为0.313±0.091、1.497±0.081、1.095±0.059、0.895±0.046、0.560±0.082,EdU阳性细胞率分别为12.665%±3.146%、47.650%±4.656%、37.568%±2.549%、32.050%±3.652%、26.050%±3.453%,组间比较差异有统计学意义(P<0.001)。与正常对照组相比,模型组细胞增殖能力显著增强;与模型组相比,10、50、200μmol/L二甲双胍干预组细胞增殖能力下降(P<0.01)。结论二甲双胍能抑制TGF-β1诱导的HESCs转分化、ECM合成及增殖,发挥抗纤维化的作用。

野百合碱诱导大鼠肺高压时韧粘素mRNA表达水平的动态变化

目的 观察野百合碱 (MCT)所致肺高压大鼠肺组织和肺动脉中韧粘素 (TN)mRNA的动态表达水平 ,探讨其与肺高压肺血管重建的关系。方法 SD大鼠随机分为MCT组和正常对照组 (CON) ,采用野百合碱皮下注射法诱导建立大鼠肺高压模型 ,并通过快速竞争性RT PCR技术检测不同时间点 (给药后第 7,14,2 1,2 8天 )大鼠肺组织和肺动脉中TNmRNA的表达水平。结果 TNmRNA水平在给药后第 7天即有上调 ,CON组肺组织TNmRNA为 0 .2 9± 0 .0 4,MCT组为 0 .5 6± 0 .0 8,两组间差异有显著性 (P <0 .0 1) ;CON组肺动脉TNmRNA为0 .30± 0 .0 4,MCT组为 0 .5 7± 0 .0 5 ,两组间差异有显著性 (P <0 .0 5 )。TNmRNA水平上调早于肺动脉压的升高 ,随压力上升和时间延长TNmRNA继续增高。结论 TN参与了肺高压肺血管重建过程 ,在肺高压发病中可能具有重要作用。

基质金属蛋白酶在牙髓病中作用的研究进展

基质金属蛋白酶在牙髓组织细胞外基质代谢过程中发挥着关键性作用 ,是牙髓病过程中组织损伤机制中的重要因子 ,其基因表达、蛋白质合成以及活性的表达受到多种因素的调节 。

ADAMTS-1的基础研究与临床意义

ADAMTS-1(a d isintegrin and m etalloprotease w ith thrombospond in type 1 motifs)是一种新发现的金属蛋白酶,来源于肿瘤细胞,因其蛋白质分子-C末端的特殊结构可以结合细胞外基质,通过介导细胞与细胞以及细胞与细胞外基质的相互作用,从而在个体生长发育、泌尿生殖器官形态改变以及炎症、肿瘤生长转移、动脉粥样硬化等生理和病理过程中发挥重要作用。

房水外流途径的研究进展

房水是眼内循环流动的液体,在前房角区有两条房水排出途径,即小梁房水外流途径和葡萄膜巩膜排出途径。近年来,围绕着分子生物学和细胞培养等技术的发展以及动物实验模型的建立,人们对房水流出途径有了更深入的了解。本文对近年来有关房水外流途径的研究进展作一综述。

骨髓单个核细胞构建细胞化生物组织工程血管支架的研究

目的研究鼠骨髓来源平滑肌祖细胞(SPCs)和内皮祖细胞(EPCs)在细胞外基质支架上的生长特性,为生物组织工程血管寻找更新的种子细胞和支架。方法将鼠骨髓来源单个核细胞(BMCs)分别用不同的培养基进行诱导分化,于培养10 d后用免疫荧光双标技术(CD34/VWF)鉴定EPCs,用-αSMA/CD14鉴定SPC。将纤维蛋白原、层粘连蛋白和纤粘连蛋白按一定比例混合后,在新鲜大鼠血浆促凝作用下,构建毯状细胞外基质(ECM)支架,在支架表面种植诱导培养骨髓来源的第2代SPCs和EPCs。用扫描电镜和透射电镜观察和分析的支架表面结构以及细胞在支架上生长情况。结果单个核细胞经EBM-2培养基诱导,培养至10 d双荧光染色结果表明,培养贴壁细胞中约90%的EPCs呈VWF/CD34双阳性;经bFGF的M-199培养基诱导阳性率逐渐增加,培养至10 d双荧光染色结果表明,培养贴壁细胞中SPCs呈-αSMA/CD14双标阳性100%。将诱导培养的第2代SPCs,种植在支架上,4 d时倒置显微镜示SPCs在支架表面细胞融合呈现典型的"峰"、"谷"样形态,当EPCs被种植10 d时扫描电镜显示在支架表面形成一个完整的较平整的细胞平面。透射电镜发现在多层平滑肌祖细胞表面有单层内皮祖细胞,呈三维立体结构,具有天然血管的内膜和中膜,更接近天然血管的结构。结论BMCs将是组织工程血管最理想的细胞来源,细胞外基质支架能显著促进SPCs和EPCs粘附、增殖和分化,可作为SPCs和EPCs生长的载体,可作为一种新颖的合成人造血管的生物组织工程支架。

生长分化因子-5对大鼠关节软骨细胞生长代谢的影响

目的:观察生长分化因子-5对成熟软骨细胞生长代谢的影响。方法:分离和培养大鼠关节软骨细胞成功后,将细胞分为5组,在各组培养液中分别添加浓度为0 ng.mL-1、1 ng.mL-1、10 ng.mL-1、100 ng.mL-1、1 000 ng.mL-1的生长分化因子-5,采用倒置显微镜观察、MTT比色、阿辛蓝染色、逆转录聚合酶链式反应、胶原免疫荧光染色检测软骨细胞增殖、蛋白多糖合成、Ⅱ型胶原合成及胶原表型变化。结果:①倒置显微镜下观察:经生长分化因子-5培养的软骨细胞生长活跃,细胞数量增加,对数生长期提前。②MTT比色和阿辛蓝染色:吸光度值比较,各组间差异有统计学意义(F=368.032,P=0.001;F=240.048,P=0.008);生长分化因子-5浓度越高,MTT比色和阿辛蓝染色的吸光度值越大。③逆转录聚合酶链式反应电泳:随GDF-5浓度的增加,各组443 bp带亮度变化不大,而268 bp带亮度变化越来越明显。④免疫荧光染色:软骨细胞在含100 ng.mL-1GDF-5的培养液中培养21 d后,只表达Ⅱ型胶原,而不表达Ⅰ、Ⅹ型胶原。结论:生长分化因子-5可刺激成熟软骨细胞的增殖,促进蛋白多糖和Ⅱ型胶原的合成,并能维持软骨细胞的生物学特性。

骨架蛋白、肌力与骨骼肌微损伤的关系研究

综述了近年来细胞外基质蛋白、膜骨架蛋白和肌肉微损伤相关联的研究。对骨架蛋白在运动中的变化进行了由内而外的探讨,重点探讨了细胞外基质蛋白在力的传递和组织结构的保持中可能发挥着的重要作用,阐明了肌细胞骨架蛋白在力的传导过程中存在的可能机理,揭示了细胞外基质蛋白对维持骨骼肌细胞结构稳定方面所起的重要作用。

阿托伐他汀和卡托普利对高压培养下大鼠系膜细胞外基质的影响

目的观察阿托伐他汀和卡托普利干预对连续周期性波动的高静水压下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)细胞外基质(ECM)的影响。方法RMC分别在生理压力(40mmHg,PP)、中压(60mmHg,MP)、高压(80mmHg,HP)环境下,不同药物(阿托伐他汀、卡托普利)中培养1、3、5、7d。采用Western Blotting法测定细胞裂解液中胶原Ⅰ和Ⅳ、纤维连结生长因子(FN)的含量。结果与PP组第1天相比,PP组第3、5、7天胶原Ⅰ/Ⅳ、FN浓度无明显变化;MP和HP组从第1天开始可见胶原Ⅰ/Ⅳ、FN水平呈时间依赖性升高,7d达到最高。阿托伐他汀和卡托普利均能抑制MP、HP组胶原Ⅰ/Ⅳ和FN水平上升,胶原Ⅰ在1d时,阿托伐他汀吸光度(A)值为1.06±0.12,1.16±0.14vs0.78±0.05;卡托普利A值为0.96±0.09,1.02±0.13vs0.71±0.06(P<0.05)。二者合用可使胶原Ⅰ/Ⅳ和FN水平进一步下降。结论周期性波动的高静水压可使ECM积聚。阿托伐他汀和卡托普利能减轻高静水压引起的ECM积聚。二者合用存在协同作用。

细胞外基质对表皮干细胞缝隙连接介导的细胞间通讯的影响

目的:探讨细胞外基质对表皮干细胞间通讯的调节机制,为理解皮肤创伤愈合的信号传递提供实验依据。方法:体外分离和培养人表皮干细胞(n=8),流式细胞仪检测抗原表达。细胞模型是2×106表皮干细胞接种在胶原包被的培养皿表面,实验组为表皮干细胞+Ⅳ型胶原基质组(n=8),对照组为表皮干细胞+I型胶原/层粘连蛋白基质组(n=8),和表皮干细胞培养于无胶原包被的60mm平皿组(n=8)。Epilife无血清培养基培养7天后,用激光共聚焦显微镜观察培养表皮干细胞缝隙连接蛋白(connexin)表达、单细胞显微注射荧光示踪剂检测在培养表皮干细胞之间缝隙连接细胞间通讯。结果:培养的人表皮干细胞抗C-Kit、CK14、CK19、β1-整合素、P63染色阳性,流式细胞学检查示C-Kit、CK14、CK19、β1-整合素、P63阳性率分别是(91.50±4.72)%、(88.54±6.28)%、(90.38±7.10%、(89.54±5.61)%和(87.38±4.64)%。培养7天后,在Ⅳ型胶原组,(90±4.11)%的细胞表达表皮干细胞表型;在无胶原基质组,细胞生长数量少,(50±6.20)%的细胞表达表皮干细胞表型;在I型胶原/层粘连蛋白基质组,只有少于(10±3.54)%的细胞表达表皮干细胞表型,(90±4.83)%的细胞表达表皮细胞表型;此外,保持特异性标志的表皮干细胞Connexin表达图不同于有表皮细胞特征的细胞。因为皮肤的创伤愈合过程伴随着细胞外基质和生长因子的改变,随之是广泛的表皮干细胞的细胞分裂,分化,和迁移,而相似的改变对于体内皮肤创伤的修复过程极为重要。结论:细胞外基质通过Connexin调节表皮干细胞间通讯,不同Connexin表达模式允许第二信使分子和细胞代谢产物的不同通透性,因此协调细胞和组织功能。

缺血预处理对大鼠移植小肠细胞外基质的保护作用

目的 研究缺血预处理 (IP )对大鼠移植小肠细胞外基质的早期保护作用。方法 SD大鼠随机分为假手术组 (S组 ,n =6) ,小肠移植组 (SBT组 ,n =12 ) ,缺血预处理加小肠移植组 (IPSBT ,n =12 )。建立大鼠异位节段小肠移植模型。各组移植肠冷保存 /再灌注 1h取材。检测层粘连蛋白(LN)的表达。电镜观察小肠上皮细胞基底膜结构的变化。结果 S组、SBT组和IPSBT组LN表达灰度值分别为 3 9.5 2± 2 .60 ,13 .5 3± 0 .44和 2 5 .40± 1.79,SBT组明显低于S组 (P <0 .0 5 ) ,而IPSBT组明显高于SBT组 (P <0 .0 5 )。电镜显示 ,S组小肠上皮基底膜呈线性均匀连续完整的结构 ;SBT组上皮基底膜断裂、甚至缺失 ;IPSBT组上皮基底膜破坏程度比SBT组为轻。结论 移植小肠细胞外基质是冷保存 /再灌注损伤靶点 ;IP对细胞外基质冷保存 /再灌注损伤有明显的保护作用。

结直肠腺癌EMMPRIN蛋白的表达及其临床病理学意义

目的:研究结直肠腺癌细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellularmatrixmetalloproteinaseinducer,EMMPRIN)蛋白表达的临床病理意义。方法:免疫组织化学(SP)法检测89例结直肠腺癌组织中EMMPRIN的表达,分析EMMPRIN与组织学类型、分化程度、肿瘤神经组织浸润、浸润肠壁深度、淋巴结转移和Dukes分期等生物学行为的关系。结果:全组结直肠腺癌EMMPRIN的阳性率为43%(38/89)。53例癌旁腺上皮的阳性率为17%(9/53),明显低于同组腺癌组织的58%(31/53)(P=0.016)。EMMPRIN表达与组织学类型、分化程度、肿瘤神经组织浸润、浸润肠壁深度、淋巴结转移和Dukes分期均无关(P>0.05)。结论:EMMPRIN在结直肠腺癌中的表达明显较癌旁腺上皮增多,但与癌的生物学行为关系不大。

韧粘素反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的探讨韧粘素 (TN)反义寡核苷酸 (ODN)对培养大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的抑制作用。方法采用细胞计数及快速竞争性逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)等方法 ,观察不同剂量 ( 5、10、2 0 μg/ml)TN反义ODN和正义ODN对体外培养大鼠VSMC的增殖以及TNmRNA表达水平的影响。 结果TN反义ODN可有效抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖 ,作用呈剂量依赖性 (反义组 5、10、2 0 μg/ml剂量细胞计数分别为 10 5/ml× ( 4 .99± 0 .2 1)、( 4 .0 8± 0 .14 )、( 2 .85± 0 .39) ,对照组为 10 5/ml× ( 5 .95± 0 .41) ,(P <0 .0 5 ) ;TN反义ODN亦可下调TNmRNA表达水平 (反义组 0 .32± 0 .0 5 ,对照组为 0 .5 2± 0 .0 8;P <0 .0 1) ;而TN正义ODN则无上述作用。 结论TN反义ODN可能通过下调TNmRNA表达水平而抑制血管平滑肌细胞的增殖。

平肝胶囊对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的探讨平肝胶囊对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞外基质(ECM)内胶原蛋白的影响及其意义。方法 50只14周龄雄性SHR随机分为5组,每组各10只,分别予以平肝胶囊高剂量、中剂量、低剂量、苯磺酸左旋氨氯地平片和生理盐水灌胃,同时选同周龄的雄性Wistar-Kyoto大鼠(WKY)各10只作为对照。给药10周后采用Masson染色法观察大鼠心肌细胞大小及心肌胶原分布情况。结果 SHR空白组心肌胶原大量沉积;平肝胶囊高剂量组的胶原沉积情况与苯磺酸左旋氨氯地平片组较为接近,且与WKY组相似。结论平肝胶囊具有改善高血压大鼠心肌组织内胶原沉积的作用,对防止高血压病心室结构的改变有重要意义。

高糖对人肝星状细胞的激活作用及机制

目的探讨高糖是否可以激活人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)及其机制。方法实验分为正常对照组(NG组)、高糖组(HG组)和渗透压对照组(OC组);体外培养的人HSCs高糖处理后,应用westernblot方法检测TGF-β1、α-SMA、I型胶原和MMP-2的蛋白表达量;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定TGF-β1的分泌水平。结果应用30μmol/L D-葡萄糖处理人HSCs细胞48h,可以激活HSCs,表现为:α-SMA、I型胶原和MMP-2的蛋白表达增加,TGF-β1的分泌水平升高。结论高糖可以激活人HSCs,进而促进肝纤维化的发生,此激活过程可能是通过TGF-β1通路。

罗格列酮对OX-LDL诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的观察罗格列酮对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的肾小球系膜细胞（RMC）增殖和细胞外基质（ECM）分泌的影响。方法采用RT-PCR法检测正常对照组、ox-LDL组、罗格列酮组、罗格列酮＋ox-LDL组RMC内的转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA表达；同时采用MTT法检测各组RMC增殖水平，并予ELISA技术检测上清液中TGFβ1、层粘连蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）蛋白的含量。结果罗格列酮＋ox-LDL组RMC增殖水平较ox-LDL组降低，且RMC表达的TGFβ1 mRNA水平和分泌的TGFβ1、FN、ColⅣ蛋白水平均较ox-LDL组降低（均P〈0.05或0.01）。结论罗格列酮可通过抑制ox-LDL诱导的RMC增殖和ECM及TGFβ1的分泌，从而发挥抗肾纤维化作用。

糖基化终产物对人单核细胞EMMPRIN基因表达的影响

目的:探讨糖基化终产物(AGEs)对人单核细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)表达的影响。方法:在培养的人单核细胞株中分别加入不同浓度AGEs干预24h和同一浓度AGEs干预不同的时间点,以1640培养基和相应浓度的牛血清白蛋白为对照组。用逆转录聚合酶链反应检测EMMPRIN mRNA的表达水平。结果:AGEs干预人单核细胞的EMMPRIN mRNA水平与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);且其表达呈时间和浓度依赖性降低(P<0.05)。结论:AGEs以时间及浓度依赖的方式减少人单核细胞EMMPRIN mRNA的表达。

缬沙坦对自发性高血压大鼠心肌细胞外基质重塑和氧化应激态的影响

目的研究缬沙坦对高血压诱发的心肌细胞外基质重塑和氧化应激态的影响。方法选用16w龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)12只,随机分为2组,缬沙坦组和阴性对照组(SHR组),每组6只。另选同周龄雄性Wistar-Kyoto大鼠(WKY)6只作为正常对照组(WKY组),给药6w后测定血清Ⅲ型前胶原(PIIIP)、Ⅳ型前胶原(PIVP)、透明质酸透射(HA)、心肌羟脯氨酸和胶原蛋白含量,电镜观察心肌超微结构,同时检测血清和心肌组织活性氧(ROS)水平、超氧化酶歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量。结果给药6w后,缬沙坦组血清PIIIP、PIVP、HA含量、心肌羟脯氨酸和胶原蛋白含量明显低于SHR组(P<0.01);电镜显示缬沙坦组心肌与SHR组比较,肌原纤维较清晰,排列整齐,横纹清楚,间质胶原纤维无明显增生;缬沙坦组血清和心肌组织SOD活力明显高于SHR组,而ROS水平、MDA含量明显低于SHR组(P<0.01)。结论缬沙坦可改善高血压诱发的心肌细胞外基质重塑,其机制与其抗氧化应激作用有关。

结膜细胞外基质移植的实验研究

目的:观察结膜细胞外基质(extracellular matrix,ECM)作为结膜组织的替代材料用于结膜成形的特点及效果。方法:饲养42只大白兔,将其中6只大白兔的球结膜制作结膜缺损模型,并将剩余的大白兔随机分为3组,每组12只。实验组兔结膜采用组织工程技术制备的结膜ECM行结膜移植修补术,对照Ⅰ组采用新鲜异体结膜移植,对照Ⅱ组采用低温冷冻保存的羊膜移植,以观察移植修补术后结膜成形的情况,并行肉眼、镜下、免疫组化及淋巴细胞毒检查。结果:动物实验组,结膜ECM移植后1周可见新生血管自移植边缘长入,8周外观已接近正常结膜,无免疫排斥反应;光镜下可见移植后4周的移植区上皮已接近正常结膜上皮。对照Ⅰ组术后2周,移植片可见大量炎性细胞浸润。对照Ⅱ组术后4周,移植区仍有部分上皮未覆盖。结论:结膜ECM为目前比较理想的结膜替代材料,并可有效地用于角、结膜表面重建。