通关藤提取物诱导BGC-823细胞凋亡及对MTDH基因表达的作用研究

目的:通过观察不同浓度通关藤提取物对人胃腺癌BGC-823细胞增殖、凋亡及MTDH基因表达的影响,为胃癌的临床治疗提供实验基础及潜在治疗靶点。方法:(1)MTT法检测通关藤提取物对BGC-823细胞增殖影响。(2)Annexin V/PI双染法检测通关藤提取物对BGC-823细胞凋亡影响。(3)反转录多聚酶链反应(RTPCR)检测通关藤提取物对BGC-823细胞MTDH mRNA表达影响。(4)Western Blot法检测通关藤提取物对BGC-823细胞凋亡相关蛋白表达影响。结果:(1)通关藤提取物作用于BGC-823细胞,细胞生长抑制率随药物浓度增大而升高,加药各组与对照组相比,差异有统计学意义。(2)通关藤提取物0 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L、2mmol/L诱导BGC-823细胞凋亡率为(2.98±1.01)%、(6.79±0.68)、(12.512±1.27)%、(16.97±1.09),与对照组相比差异有统计学意义。(3)通关藤提取物可下调BGC-823细胞MTDH mRNA表达,这种作用具有浓度依赖性。(4)通关藤提取物能够下调Bcl-2家族中的抑凋亡因子Bcl-2、Bcl-xl的表达尤其是Bcl-xl的表达,上调凋亡执行者Caspase-3的表达。结论:通关藤提取物可下调BGC-823细胞MTDH mRNA表达,并通过下调Bcl-2、Bcl-xl,上调Caspase-3的表达而诱导BGC-823细胞凋亡,从而抑制了BGC-823细胞的生长增殖。

通关藤总皂苷提取工艺及抗肿瘤活性研究

目的:优化通关藤总皂苷的提取纯化工艺,测定通关藤总皂苷的抗肿瘤活性。方法:采用正交试验,以总皂苷收率作为指标优化通关藤总皂苷的最佳提取工艺;采用动态吸附实验,分别考察了5种不同型号的大孔树脂(D101,AB-8,ZTC-1,NKA-9,D3520)对通关藤总皂苷的吸附和解吸性能,并以吸附量、洗脱量为考察指标,对通关藤总皂苷的纯化工艺进行了筛选,以通关藤苷A为对照,采用紫外分光光度法测定通关藤总皂苷的含量;采用MTT法检测通关藤总皂苷的抗肿瘤活性。结果:通关藤总皂苷的最佳提取工艺为:加入10倍量70%乙醇,加热回流提取3次,每次2 h。ZTC-1具有最佳吸附与解析参数,最佳纯化工艺为:取通关藤粗提取物,加相当于生药量15倍的蒸馏水溶解,离心,取上清液,通过ZTC-1树脂柱,依次用水、50%乙醇洗脱至无色,弃去,再用70%乙醇洗脱1.5 BV,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,冷冻干燥,即得通关藤总皂苷。通关藤总皂苷对人肝癌细胞Hepg2具有抑制作用,高浓度组与空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。当提取物浓度大于0.312 mg/mL时,人肝癌细胞Hepg2的增殖即受到抑制,且随着药物剂量的增大其差异更为显著。结论:所得提取纯化工艺简单可行,具有很好的应用前景,为通关藤总皂苷的深度开发提供依据。