Simultaneous determination of berberine,matrine and oxymatrine in traditional Chinese medicines by using nonaqueous capillary electrophoresis

A rapid method for the simultaneous determination of berberine(BBR),matrine(MT)and oxymatrine(OMT)by nonaqueous capillary electrophoresis(NACE)was developed.Optimum separation of the analytes was obtained on a 50cm×50μm i.d.fused-silica capillary using a non-aqueous buffer system of 70mM ammonium acetate,7.0% acetic acid and 10% acetonitrile at 25kV and 20℃.The relative standard deviations(R.S.D.)of the migration times and peak areas of the three active components were 0.06%-0.20% and 0.12%-3.41% for berberine,0.11%-0.60% and 0.74%-1.63% for matrine,0.15% and 0.45% for oxymatrine,respectively.Detection limits of berberine,matrine and oxymtrine were 0.18μg/mL,4.08μg/mL and 4.16μg/mL,respectively.In the tested concentration range,good linear relationships(0.9992 for berberine,0.9988 for matrine and 0.9988 for oxymatrine)were observed.The linear calibration ranges were 0.45-360.0μg/mL for berberine,8.16-408.0μg/mL for matrine and 20.8-416.0μg/mL for oxymatrine.This method has been successfully applied to the phytochemical analysis of alkaloids extracts from two commonly used traditional Chinese herbal drugs:Sophora flavescens Ait.(Kushen)and Cortex phellodendri chinensis(Huangbai)and their medicinal preparations.

基于网络药理学和分子对接探讨黄芪苦参配伍治疗结肠癌的作用机制

目的基于网络药理学及分子对接技术探讨黄芪苦参药对配伍治疗结肠癌的作用机制。方法根据中药系统药理学据库分析平台(TCMSP)筛选黄芪、苦参的所有活性成分;通过TCGA、GeneCards、OMIM得到结肠癌靶点基因;然后利用Cytoscape3.8.2等软件,建立“药-效物质-靶标”模型。利用PPI进行蛋白质交互作用的网络图谱;使用ClusterProfiler对靶点基因进行进一步GO、KEGG分析。对筛选出的黄芪和苦参的关键活性成分和主要靶点利用AutoDock Vina(1.1.2)进行分子对接验证。结果通过网络药理学、分子对接和生信分析,共筛选获得37个活性成分,167个药物治疗结肠癌的交互靶点基因,2616条GO条目;将涉及的排位前20的主要信号通路作图。分子对接结果显示核心成分与IL6、TNF、TP53、AKT1、IL1B靶点之间有较好的结合力。结论初步揭示了黄芪、苦参药对的物质基础及作用机制,为其治疗结肠癌的临床应用提供了理论基础。

苦参-黄柏药对的提取工艺研究

目的研究苦参-黄柏药对的提取工艺,为治疗肛肠疾病的新药开发提供参考依据。方法以苦参总碱(苦参碱+氧化苦参碱)含量、盐酸小檗碱含量、总黄酮含量及浸膏得率为评价指标,采用层次分析法-熵权法计算各指标权重系数,结合Box-Behnken设计-响应面法研究苦参-黄柏药对的最佳提取工艺并进行验证。结果苦参-黄柏药对的最优提取工艺为以12倍量58%乙醇浸泡30 min后提取2次,每次120 min。验证实验结果与预测值的相对误差为1.88%。结论所得提取工艺稳定、可行,可为苦参-黄柏药对的进一步应用与新药开发提供参考。

基于靶点网络与分子对接探讨苦参介导NF-κB通路抗肝癌的作用机制

目的:运用网络药理学及分子对接的方法,探讨苦参Sophora flavescen Ait.中有效活性成分抗肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的作用机制,并通过体内、体外实验对苦参抗肝癌的作用机制进行探究。方法:通过TCMSP、Swiss Target Prediction数据库和Genecards数据库和OMIM数据库等搜集苦参的有效活性成分和治疗HCC的潜在靶点;通过STRING数据平台构建靶点基因PPI网络,将degree值排序后筛选关键靶点;通过DAVID数据平台选取关键靶点的基因进行GO和KEGG通路富集分析;通过Discovery Studio筛选后选取CASP3、STAT3作为关键靶点与前5个活性成分进行分子对接;并运用体内、体外对应性实验对网络药理学所预测的结果进行苦参抗肝癌的药效学验证。结果:网络药理学结果筛选得到39个活性成分,涉及46个关键靶点,根据度值筛选,发现前20个基因主要富集在“癌症通路”等相关通路上,分子对接试验证明关键靶点NF-κBp65、CASP3、STAT3与有效活性成分之间存在较好的亲和力。苦参抗肝癌的实验结果显示,通过抑制NF-κBp65及其相关因子TNF-α、IL-6促进肝癌细胞凋亡。结论:该研究表明苦参可通过多种成分、不同靶点激活多条通路来发挥对肝癌细胞的拮抗机制,为阐明苦参抗肝癌的分子机制提供药理学数据参考。

苦参多糖的提取工艺优化及体外抗氧化、降血脂活性分析

目的:为提高苦参多糖的得率,明确多糖的抗氧化和降血脂活性,通过正交试验优化多糖的提取工艺,并评价其体外抗氧化和降血脂活性。方法:以多糖得率为评价指标,在单因素实验研究提取温度、提取次数、料液比和提取时间对苦参多糖得率影响的基础上,通过正交试验优化多糖的提取工艺。通过对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用评价多糖的体外抗氧化活性,通过与胆酸钠(SC)、牛磺胆酸钠(STC)、甘氨胆酸钠(SGC)和混合胆酸盐(MBS)的结合作用评价多糖的体外降血脂活性。结果:苦参多糖的最佳提取条件为:温度85℃,料液比1:35 (g:mL),提取时间3.5 h,在此条件下多糖平均得率为3.07%±0.07%。苦参多糖在浓度为5 mg/mL时对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别为60.1%±3.6%、39.6%±3.1%和45.1%±4.1%;在浓度为10 mg/mL时与胆酸钠(SC)、牛磺胆酸钠(STC)、甘氨胆酸钠(SGC)和混合胆酸盐(MBS)的结合率分别为34.4%±0.75%、45.4%±0.15%、19.7%±0.94%和37.7%±0.64%。结论:苦参多糖具有较好的体外抗氧化和降血脂活性。本研究为苦参多糖的开发利用提供了一定的理论依据。

四种中草药提取物抗过敏和抗炎症效果研究

目的:本研究旨在证明由马齿苋、苦参、獐芽菜和玉兰花四种中草药提取物组合而成的复合物(Portulaca oleracea,sophora flavescens ait,swertia and magnolia complex,PSSM)以及含有PSSM基础配方产品具有抗过敏和抗炎活性。方法:本研究采用CCK-8法测定PSSM对RBL-2H3细胞增殖速率的影响,并结合紫外吸收法和酶联免疫吸附法测定PSSM对RBL-2H3细胞中β-HEX释放率、细胞组胺水平和TNF-α水平的影响;采用小鼠耳肿胀试验和背部炎症试验验证含PSSM的基础配方产品对迟发性过敏和接触性皮炎的缓解作用。结果:一定体积浓度范围内的PSSM对RBL-2H3细胞的增殖没有影响,PSSM和PSSM基础配方产品在抗敏和抗炎上均有显著效果,其中2%PSSM和2%PSSM基础配方产品效果最佳,2%PSSM对RBL-2H3细胞中β-HEX释放的抑制率可达47.1%。结论:一定浓度的PSSM及其基础配方产品在抗敏和抗炎症上有显著效果,可为纯天然化妆品原料开发提供参考。

探究苦参中苦参碱和氧化苦参碱相互转化的综合实验教学设计

培养技能型创新人才是高校培养学生的重要方向,如何结合教学目标在实验教学中培养学生专业技能和创新思维是现代教育的重要途径。仪器分析是学生理论与实践相结合、深入探究实验现象的重要手段,针对仪器分析的课程特点,本文以培养学生专业技能和开拓创新思维为导向,设置合理的教学目标对仪器分析实验教学课程进行改革,探索全面提高学生专业技能和创新能力。本文以普适性较广的高效液相色谱(HPLC)技术着手,探究苦参中苦参碱和氧化苦参碱之间的相互转化现象。实验设置文献查阅、方案制定、数据分析等教学环节,通过本实验学生可掌握HPLC仪器用于多成分含量测定的实验技能,提升学生实验设计统筹能力以及对结果深入的探析能力。本研究丰富了HPLC仪器分析实验内容,增强了学生在实验教学中的参与度,构建了良好的学习氛围;通过训练有助于培养学生在实际工作中知识的应用能力,可以为学生今后的工作打下基础。

苦参总碱提取条件的优化研究

采用酸水回流提取和乙醇回流提取两种方法对苦参总碱的提取效果进行了综合研究。结果表明,乙醇回流提取效果较好,其最佳提取条件为:采用筛分目数20～60目的苦参粉,以60%的乙醇溶液,液料比为12,回流提取2次,可以得到最佳的提取效果。

AB-8树脂对苦参总黄酮的吸附性能研究

目的 研究大孔吸附树脂 AB- 8对苦参总黄酮的吸附性能及原液浓度、p H值、流速、洗脱剂的种类对树脂吸附性能的影响。方法 采用紫外分光光度法测定苦参中总黄酮的含量。结果 AB- 8树脂对苦参总黄酮的适宜吸附条件为 :原液浓度为 0 .2 85 m g/m L,p H值为 4,流速为 3BV/h;洗脱剂用 5 0 %乙醇时 ,解吸效果较好。结论

苦参生物活性研究进展

苦参的活性成分主要是生物碱和黄酮类化合物。许多研究发现,苦参在医疗方面具有抗肿瘤活性及抗肝损伤、抗溃疡、抗生育、抗炎抑菌、抗心率失常、抗病毒和治疗慢性肝炎等作用;在农业上,苦参对多种病虫害具有毒杀和抑制作用,并具有杀鼠活性。文章对以上研究进行了综述,并指出了苦参今后的研究方向。

苦参杀鼠活性成分研究

对苦参杀鼠的生物碱活性成分及其毒性作用进行了系统的研究．采用80％的酸性乙醇提取、氯仿萃取、硅胶柱层析分离等方法从苦参中分离得到5种苦参生物碱单体,经与标准品对照测定mp,IR, MS等方法鉴定分别是槐果碱、苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱和氧化槐果碱．以小鼠为实验动物分别进行毒性测定,试鼠的死亡均集中在48 h内,48 h后无试鼠的死亡现象．在试验剂量范围内,槐果碱和槐定碱引起试鼠死亡的时间最短,均为11 min,而苦参碱、氧化苦参碱和氧化槐果碱引起试鼠死亡的时间较长,分别为2,4,5 h．这5种生物碱及苦参生物总碱对小鼠的致死中量LD50(经口)分别为123．65, 64．01,93．56,85．95,81．00,339．26 mg／kg．苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱和氧化槐果碱的毒性较低,致死中量适宜,可以作为杀鼠剂使用;而槐果碱的致死中量较大,毒性小,不宜作为杀鼠剂使用．苦参生物总碱及5种苦参生物碱单体对试鼠的毒杀表现为胃毒作用,主要作用于试鼠的神经系统．

RP-HPLC法测定苦参中苦参碱的含量

目的建立测定苦参中苦参碱含量的RP HPLC法。方法采用反相高效液相色谱法 ,Kro masilC18柱 (2 5 0mm× 4 6mm ,5 μm) ,流动相为甲醇 水 三乙胺 (V∶V∶V =10 5 0 0∶95 0 0∶0 0 4 ) ,检测波长为 2 2 5nm ,柱温为室温。结果苦参碱质量浓度在 3 92～ 78 4mg·L-1内与峰面积呈良好线性关系 ,r =0 9998(n =6 ) ;平均回收率为 97 2 % ,RSD为 2 1% (n =9)。结论测定方法准确、可靠 。

苦参杀虫抑菌活性成分研究

Two compounds with strongly insecticidal and fungicidal activity, Kurarinone and Sophoraflavanone G , were isolated from Sophora flavescens Ait under the direction of bioassay, and comfirmed by UV, IR, MS and NMR. The insecticidal activity of flavonoids from Sophora flavescens Ait was first reported here. The study of structure-activity relationship indicated that the methylation of 5-hydroxy on the phenyl ring would decrease the insecticidal and fungicidal activity of flavonoids.

苦参生物碱的高速逆流色谱法制备研究——色谱参数和仪器参数的最佳化

应用新型的液液分配技术——高速逆流色谱法 (High Speed Counter- current Chromatography,HSCCC)对苦参生物碱类成分的分离制备进行探讨。选用氯仿 -磷酸 -磷酸钠缓冲液 (p H6 .2 0 )溶剂系统 ,经正交试验确定了HSCCC的最佳运行参数 ,将苦参粗提物分离得到 6个固态收集物 ,经 TL C4种不同展开系统证实其中有一个为单一组分。实验表明 ,HSCCC法是一种高效、简便的分离制备中草药有效成分纯品的新方法。

苦参碱对肿瘤细胞恶性表型及免疫功能的调控作用

采用苦参提取液对TAⅡ小鼠MA737乳腺癌及Hela细胞、λDNA进行了体内外抗癌作用及免疫效应的实验观察。结果表明:1)Hela细胞对苦参碱的药物敏感性高于正常细胞,ID50比值为1.25。2)苦参碱可以明显减弱Hela细胞的电泳迁移速度,减慢率为16.85%。3)苦参碱可与溴化乙锭竞争结合DNA,表明细胞核是药物作用敏感靶位。4)苦参碱改变了DNA的分子构象,从而改变了限制酶对其固有识别顺序的限制性切割。5)荷MA737乳腺癌小鼠经苦参碱治疗TH/TS比值明显提高。6)具生物反应调节作用的苦参碱,不但加强了LAK细胞的免疫效应,尚提高了肿瘤细胞对LAK细胞的敏感性。因此,与苦参碱联合应用,可促进LAK细胞的体内治疗效果。

苦参提取物体外抗菌实验研究

目的:探讨苦参总生物碱、总黄酮提取物及其混合物的体外抗菌效果。方法:采用液体二倍稀释法分析苦参总生物碱、苦参总黄酮提取物及其混合物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、福氏志贺菌、乙型副伤寒杆菌、铜绿假单胞菌、白色葡萄球菌、痢疾杆菌和柠檬色葡萄球菌的抗菌作用,并测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果:苦参总生物碱对以上菌株的MIC分别为:9.00、3.38、8.25、9.00、4.50、13.50、6.75、7.13mg.mL-1,MBC分别为:13.50、14.25、8.25、9.00、14.25、14.25、13.13、14.25mg.mL-1;苦参总黄酮对以上菌株的MIC分别为3.00、2.63、3.56、3.38、1.50、2.44、3.56、2.35mg.mL-1,MBC分别为14.25、12.75、7.13、13.50、13.50、12.75、12.75、13.13mg.mL-1;苦参总生物碱与总黄酮混合物对以上菌株的MIC分别为:2.25、2.07、3.28、3.94、1.22、2.44、2.07、1.97mg.mL-1,MBC分别为9.00、13.13、6.75、6.38、13.88、7.50、6.38、7.13mg.mL-1。结论:苦参总生物碱和总黄酮提取物对上述菌株存在体外抑菌和杀菌活性,混合物呈现一定协同作用。

HPLC法鉴别测定苦参药材中多种生物碱成分

目的:建立同时鉴别苦参药材8种生物碱并测定5种生物碱含量的高效液相色谱法。方法:采用 Diamonsil^(TM) C_(18)柱(5μm,250 mm×4.6 mm),以0.05 mol·L^(-1)磷酸二氢钠水溶液-乙腈-甲醇-高氯酸钠(940 mL:50 mL:10 mL:10 g,磷酸调节 pH 4.4)为流动相,流速1 mL·min^(-1),检测波长210 nm,柱温0～29 min,40 ℃;30～39 min,50℃;40～45 min,40℃。结果:不同药材市场的苦参所含生物碱成分的种类和含量均有差异。结论:本法灵敏、准确、专属性好,适用于苦参药材中生物碱成分的鉴别和含量测定。

苦参药材提取方法的LC/MS研究

目的 :苦参药材不同提取方法的化学成分分析。方法 :采用高效液相色谱 /电喷雾离子化质谱联用技术对苦参药材不同的提取方法进行研究。结果 :氯仿 浓氨溶液提取法 ,火溶液提取法 ,水 甲醇溶液提取法获取生物碱和黄酮依次为9,8和 12种。结论 :首次采用LC/ESI/MS联用技术对苦参药材的提取方法进行了研究 ,为中药苦参指纹图谱的建立提供了依据。

苦参杀鼠活性研究

通过对苦参不同部位杀鼠活性的测定,结果表明,在20％浓度时,苦参根、茎叶对小白鼠个体的毒杀率分别为100％和50％;在15％浓度时分别为100％和20％。饵料中苦参根、茎叶的含量为20％时,试鼠的摄食系数分别为0.59和0.72。说明苦参对试鼠有较好的毒杀活性以及较好的适口性。以家鸡进行安全性试验,无二次中毒现象。