Alkaline Protease Production by a Strain of Marine Yeasts

Yeast strain 10 with high yield of protease was isolated from sediments of saltern near Qingdao, China. The protease had the highest activity at pH 9.0 and 45 ℃. The optimal medium for the maximum alkaline protease production of strain 10 was 2.5 g soluble starch and 2.0 g NaNO3 in 100 mL seawater with initial pH 6.0. The optimal cultivation conditions for the maximum protease production were temperature 24.5 ℃, aeration rate 8.0 L min -1 and agitation speed 150 r min -1. Under the optimal conditions, 623.1 U mg -1 protein of alkaline protease was reached in the culture within 30 h of fermentation.

一株产低温碱性淀粉酶蕈状芽孢杆菌的分离筛选和发酵优化

本研究的目的是从生态环境独特而复杂的西藏林芝地区的土壤样品中挖掘所蕴藏的特殊淀粉酶微生物资源.采用淀粉酶功能筛选的方法获得一株低温碱性淀粉酶生产菌株,编号为3F1.其酶活最适条件为10℃、pH 10.2.通过16S rDNA序列分析法鉴定该菌株为蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides),并将其命名为Bm3F1.通过发酵条件的逐步优化,最终确定其最佳发酵条件为:发酵培养基中添加1.5%可溶性淀粉,培养基初始pH 7.2,装液量10 mL/250 mL,菌体接种量9.0%,发酵温度30℃,发酵时间18 h,经优化后可将菌株的酶活提升至13.58 U/mL.表明从西藏林芝地区分离的Bm3F1具有在低温和碱性条件下产较高酶活淀粉酶的特性.

南极产低温蛋白酶菌株Marinobacter sp.R2的发酵条件及酶学性质研究

从南极海域沉积物中筛选到一产蛋白酶的菌株R2,经细菌学形态特征鉴定及16SrDNA序列分析鉴定,该菌株属于海杆菌属(Marinobacter).生长特性研究表明该菌株属于兼性嗜冷菌,其最适生长温度为10～15℃.R2菌株能利用多种碳源产酶,最适产酶温度为20℃.粗酶液经硫酸铵盐析、DEAEcellulose 52柱层析进行初步分离纯化后进行酶学性质的研究.该菌株所分泌蛋白酶的最适作用温度为20℃,最适pH值为9～10,对热敏感,是典型的低温碱性蛋白酶.Ca2+、Mn2+、Cu2+对该蛋白酶有较为明显的激活作用,而Cd2+、Co2+则能抑制酶活.高浓度的变性剂、PMSF、AEBSF和EDTA都能抑制该蛋白酶,表明该酶属于丝氨酸蛋白酶,且金属离子对酶活性中心构象有关键性的影响.

极端微生物产碱性蛋白酶菌株的筛选及发酵条件研究

从深海的 3 8份水样和泥样中筛选到一株产蛋白酶的菌株DY A ,其最适生长温度为1 0℃ ,能适应较大范围的pH值和盐度。此菌株只在酵母膏存在的情况下产酶 ,不利用单一氮源 ,最适产酶条件为 :pH1 0 0 ,1 0℃ ,接种量 0 5 % ,2 0 0r/min摇床培养 48～ 72h。粗酶液的最适作用温度为 40℃ ,最适pH值为 1 0 ,在pH9～ 1 2内稳定 ,是一碱性蛋白酶。

碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究

在 5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP0 71高产碱性蛋白酶的条件进行了研究 ,通过提高通气量和改变搅拌转速 ,BP0 71可在发酵 40h内达到产酶高峰 ,酶活力最高可达 2 44 80u mL。利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76 .2倍。SDS -PAGE显示重组碱性蛋白酶分子量为 2 8kD。酶学性质研究表明 ,酶的最适作用pH为 11,最适作用温度为 6 0℃ ,具有良好的pH稳定性和热稳定性。Ca2 +、Mg2 +对酶的稳定性有促进作用 ,Hg2 +、Ag+、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力。

高温芽孢杆菌碱性蛋白酶发酵条件及酶性质研究

从西藏尼木卡如林温泉附近土样中分离到一个碱性蛋白酶产生菌株SD 1 42 该菌株经初步鉴定为芽孢杆菌 在 5 0℃条件下 ,以 1 0 %的接种量接种于发酵培养基中振荡培养 48h后 ,发酵液中碱性蛋白酶活可达 5 1 6U/mL 发酵培养基的组成成分为麦芽糖 6%、豆饼粉3%、麸皮 3%、Na2 HPO40 4 %、MgSO40 0 2 %、CaCl2 0 0 2 %,pH自然 对该酶的性质研究表明 ,其最适作用 pH为 9 5 ,最适反应温度为 60℃ ,具有良好的 pH稳定性和热稳定性 ,并且显示了与去污剂良好的相容性 .

海洋细菌Pseudomonas sp.7-11产碱性蛋白酶的研究

本文研究了海洋细菌Pseudomonassp .7 11产碱性蛋白酶的发酵条件及调控机制 ,并对该蛋白酶进行了分离纯化 .实验结果显示 ,7- 11为好氧菌 ,具有某些嗜低温的特性 ,而且适宜在偏碱性的条件下生长并产酶 ;酪蛋白培养基适合该菌株产酶 ;K+对产酶起关键作用 ;复合氨基酸对产酶有抑制作用 .发酵液经盐析和离子交换层析等得到了两个活性峰 ,其中一个峰达到电泳纯 。

响应面优化产碱性蛋白酶菌株的产酶条件

利用Minitab15数据处理软件用响应面法优化了产碱性蛋白酶菌株I13的产酶条件。运用Plackett-Burman设计筛选出3个对酶活力影响极显著因素,即接种量、酵母粉和培养温度,用最陡爬坡试验逼近最大产酶区域,应用中心组合设计和响应面分析确定产酶的最优组合为:酵母粉10.2 g/L,温度14.68℃,接种量5.32%。经过优化,碱性蛋白酶活力达到321.34 U/mL,比优化前提高了151%。

碱性脱毛蛋白酶产生菌的选育

从富含蛋白质的土壤中筛选出的碱性蛋白酶产生菌，命名为Ｂａｃｉｌｕｓｓｐ．８（简称为Ｎｏ．８）。Ｎｏ．８菌能在ｐＨ６－１２且含有较高浓度钙离子条件下生长并产酶，与目前的碱性蛋白酶生产菌如地衣芽孢杆菌２７０９相比，它具有较强的耐碱性和耐钙离子性。培养基起始ｐＨ值为７．５，接种菌龄为１８ｈ种子液２％。在３５～３７℃，培养４８～６０ｈ的条件下，Ｎｏ菌产生的蛋白酶活力可稳定在１７００～１８００ｕ／ｍｌ，并且在浸灰过程中可以脱毛。酶的最适ｐＨ为９．６，ｐＨ１０．６－１１．６最稳定。最适温度为４０℃。

一株产碱性蛋白酶的酵母菌发酵条件优化

对一株产碱性蛋白酶假丝酵母菌(Candidasp.N9211)的发酵条件进行了优化,研究各种碳源、氮源及无机盐对产酶的影响,应用正交试验优化发酵培养基组成。结果表明:最佳培养基组成为酵母膏20g/L,蛋白胨15g/L,干酪素20g/L,硫酸亚铁0.01g/L。优化后蛋白酶活性提高了27倍(由1.55U/mL提高到41.85U/mL)。摇瓶培养的最佳条件为:初始pH值10.0,接种量1%,发酵温度35℃,最佳培养时间为15h。

黄海黄杆菌YS-9412-130产酶发酵条件的优化

以产低温碱性蛋白酶的黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130突变株 SW2 - 10 4为培养菌株 ,进行碳源、氮源、无机盐、起始 p H值、培养时间、接种量和接种龄等发酵条件的优化实验。实验结果证明 ,在以1%葡萄糖为碳源 ,以 3.5%豆饼粉为氮源 ,无机盐 :0 .4 % Na2 HPO4 、0 .0 3% KH2 P0 4 、0 .0 2 % Mg SO4 、0 .1% Na2 CO3、0 .2 % Ca Cl2 ,起始 p H值 7.0 ,接种 12 h种龄的种子 4 % ,2 0℃、2 50 r/ min的条件下在旋转摇床中培养 36h,菌株产酶活性最高。

小麦赤霉病禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)产碱性蛋白酶的发酵条件

小麦赤霉病是全球毁灭性作物病害之一。禾谷镰刀菌产生碱性蛋白酶与侵染麦粒有关,纯化碱性蛋白酶对研究真菌降解谷物蛋白有重要作用。本研究探讨了培养基及发酵条件对禾谷镰刀菌菌株F15产碱性蛋白酶的影响。试验结果表明,优化的禾谷镰刀菌产碱性蛋白酶的液体发酵条件为:培养基含葡萄糖3.000%、蛋白胨2.000%、麸皮2.500%、KH2PO40.100%、KC l 0.200%、ZnSO40.001%、CaC l20.001%;培养条件为:初始pH9、接种量8%、种龄60 h,在120 r/m in下28℃振荡培养84 h,碱性蛋白酶活力达534.2 U/m l。

一株海洋细菌产碱性蛋白酶的研究

对 1株产碱性蛋白酶的海洋细菌Pseudomonassp .7- 11发酵产生碱性蛋白酶的条件和酶的调控机制进行了初步研究。结果显示 ,7- 11为好氧菌 ,具有某些嗜低温特性 ,且适宜在偏碱性的条件下生长并产酶 ,该菌产生碱性蛋白酶表现出初级动力学特征 ;酪蛋白培养基适合菌株产酶 ;K+对于菌株产酶有关键作用 ;复合氨基酸对产酶有抑制作用 ;初步显示 ,7- 11产生蛋白酶受诱导及阻遏两种方向的调控。

芽孢杆菌FJ-01-R的分离鉴定及固体发酵条件的探讨

从池塘底泥分离到11株菌,3株菌产碱性蛋白酶菌,经鉴定碱性蛋白酶活性最高的FJ-01-R为芽孢杆菌,并对该菌株固体发酵产酶条件进行了优化。优化结果为发酵终止时间48h,温度32℃,初始含水量60%,初始pH值8,细菌分泌碱性蛋白酶酶活由原来的250U/g增加到540U/g,提高1.15倍。

不同发酵条件对地热田H-1菌种产碱性蛋白酶活性研究

对一株地热田产碱性蛋白酶菌株H-1的发酵条件进行了单因素试验,研究了不同氮源、pH值、温度对产碱性蛋白酶活性的影响.结果表明:液体发酵菌株H-1产碱性蛋白酶的最适温度为40℃、最适pH值为8.0、最适的无机氮源、有机氮源分别为硫酸铵、豆饼粉.

海洋氧化短杆菌15E产碱性蛋白酶的发酵条件

对氧化短杆菌15E菌株(Brevibacterium oxydans)产碱性蛋白酶的发酵条件进行研究,结果表明,培养基初始pH值9.0、培养温度28℃、摇床转速200.rmin-1条件下培养40 h,菌体生长最适且总酶活力达到最大;菌株在添加5 g.L-1牛肉膏、1 g.L-1葡萄糖的酪蛋白培养基中生长和产酶均达到最佳;人工海水中的K+、Ca2+和Mg2+浓度较为适合15E菌株生长和产酶,其中K+对菌株产酶起关键作用.

海洋弧菌Vibrio sp.pro1产碱性蛋白酶发酵条件的研究

对一株产碱性蛋白酶海洋弧菌(Vibrio sp.pro1)的发酵条件进行了单因素和正交试验,研究了不同碳源、无机氮源、pH值、温度、装液量、接种量等对产酶的影响。结果表明,液体培养基最佳组成为蛋白胨5.0g/L,酵母膏1.0g/L,硝酸钾0.6g/L,氯化镁4.0g/L。摇瓶培养的最佳条件为初始pH值为8.5,发酵温度33℃,装液量40.0mL,接种量2.0mL,优化后产酶量提高了6.3倍。