Analysis of DNA Ploidy, Cell Cycle and Ki67 Antigen in Nasopharyngeal Carcinoma by Flow Cytometry

Summary: The expression of DNA ploidy, the cell cycle and Ki67 antigen in nasopharyngeal carcinoma (NPC) were studied and their relationship with the clinical biological behaviors and prognosis of NPC was evaluated. Biopsied specimens of NPC were made into cell suspension. By using cytometric double labeling Ki67 and DNA method, the expression of DNA ploidy, the cell cycle and Ki67 antigen were analyzed. The patients were followed-up for about 3 years and the relationship between the above-mentioned parameters and the clinical biological behavior and prognosis of NPC were evaluated. Of the 62 cases of NPC, the DNA aneuploid accounted for 29.03 %. The S phase cells accounted for 0 to 54 % in the cell cycle and the positive expression of Ki67 ranged from 0 to 52 %. There were 40 cases of LPI (64.5 %) including 15 negative cases and 22 cases of HPI (35 5 %) respectively. The DNA anueploid content was positively related to the S phase cells. The patients having a low expression of Ki67 or DNA aneuploid in tumor cells were not sensitive to chemotherapy, liable to metastasis to distant organs and had a poor prognosis, while Ki67 showed no correlation with DNA ploidy and the cell cycle. It was suggested that DNA ploidy and Ki67 could be used as an independent and objective marker to evaluate the radiosensitivity and prognosis of NPC.

卵巢的子宫内膜样癌临床情况及DNA倍体分析与p^(53)基因蛋白增殖细胞核抗原表达测定的研究

目的：研究卵巢的子宫内膜样癌ｐ５３基因蛋白、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达与ＤＮＡ倍体分析之间的相互关系，并对其与临床分期、病理学分级与残存瘤的关系等进行分析、比较。方法：应用流式细胞技术及ｐ５３、ＰＣＮＡ单克隆抗体免疫组化技术对卵巢的子宫内膜样癌１３例进行倍体分析及基因、抗原测定。结果：ＤＮＡ异倍体率为７８％，ｐ５３基因蛋白表达率为４６％，ＰＣＮＡ表达率为９２％。ＤＮＡ倍体分析与临床Ⅱ～Ⅳ期、病理２～３级及残存瘤＞２ｃｍ者有关，异倍体阳性率分别为９０．９％、８８．８％、８７．５％，明显高于临床Ⅰ期、病理１级及无残存瘤者。ｐ５３在临床Ⅱ～Ⅳ期、病理２～３级表达率分别为６８．６％和５５．５％，均高于临床Ⅰ期及病理１级者，并对ＤＮＡ倍体水平与ｐ５３表达之间的关系进行了探讨。结论：ＤＮＡ异倍体与ｐ５３基因蛋白表达阳性可作为卵巢的子宫内膜样癌恶性程度的重要指标。

舌鳞癌DNA倍体性和S期细胞比率与其预后关系

对７２例舌鳞癌根治术后病者作随访复查和用流式细胞仪对其石蜡包埋标本作ＤＮＡ含量测量。结果５年生存率为５６．９％，５年内死亡者和５年存活者异倍体率分别为６４．５％和４１．５％（Ｐ＞０．０５），而高Ｓ期细胞比率（ＳＰＦ）分别为９０．３％和４１．５％（Ｐ＜０．０１）。有颈淋巴转移者五年生存率（２８．６％）低于无颈淋巴转移者（６８．６％）（Ｐ＜０．０５）。两者异倍体率和高ＳＰＦ分别有显著差异和非常显著差异。高ＳＰＦ在临床期之间、Ｃ１和Ｇ２之间均有明显差异。提示ＤＮＡ倍体性与舌鳞癌５年生存率无关，而高ＳＰＦ则有密切关系。认为ＳＰＦ作为估测舌鳞癌的预后有较高的价值。

角化型外阴鳞癌与上皮内非瘤样变组织中DNA倍体及其与细胞增殖关系的研究

目的:研究角化型外阴鳞癌(vulvarsquamous cell carcinomas,VSCCs)与外阴上皮内非瘤样变(non-neoplastic epithelial disor-ders,NNED)组织中DNA倍体及其与细胞增殖的关系,探讨异常增殖在外阴癌变中的作用。方法:采用图像分析方法检测21例角化型VSCCs、7例外阴上皮内瘤变(vulvar intra-epithelial neoplasia,VIN)和53例NNED组织细胞的DNA倍性,并采用免疫组化方法检测其增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclearantigen,PCNA)的表达,9例正常外阴皮肤作对照。结果:从正常外阴皮肤、NNED、VIN到VSCCs组织,DNA指数(DNAindex,DI)和PCNA标记指数(PCNAlabeling index,LI)呈逐渐增高趋势,P=0.00。VSCCs组织中,DI和LI显著高于VIN、NNED和对照组,P<0.05。高分化癌患者的DI和LI显著低于中、低分化癌患者,P<0.05。正常外阴皮肤未检测出DNA非整倍体,VSCCs的非整倍体率38.1%,显著高于NNED和正常外阴皮肤组,P<0.05。在NNED中,非整倍体组的LI显著高于正常倍体组,P=0.00。结论:非整倍体出现导致遗传学不稳定可能是外阴良性疾病恶变的早期驱动力,检测NNED中的DNA倍性有助于判断其恶变潜在性。

肾细胞癌中c-kit蛋白表达和DNA倍体分析的临床病理学意义

目的探讨肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)各组织学类型中c-kit蛋白表达和DNA倍体分析的临床病理学意义。方法选取32例透明细胞肾细胞癌、26例乳头状肾细胞癌、20例嫌色细胞肾细胞癌和10例癌旁正常肾组织共88例蜡块组织标本作为实验对象。并应用免疫组化染色方法检测c-kit蛋白的表达,用流式细胞仪技术进行DNA倍体分析。结果在透明细胞肾细胞癌中c-kit呈阴性,26例乳头状肾细胞癌和20例嫌色细胞肾细胞癌标本均呈c-kit强阳性表达;在乳头状肾细胞癌中,c-kit阳性信号主要存在于胞质;而在嫌色细胞肾细胞细胞癌中,c-kit阳性信号主要表达在细胞膜上;在癌旁正常肾组织中可见肾小管上皮细胞的阳性表达信号。c-kit蛋白表达与肾细胞癌的分级和分期无相关性。另外,DNA异倍体分析结果表明,43.8%的透明细胞肾细胞癌、46.2%的乳头状肾细胞癌和30.0%的嫌色细胞肾细胞癌存在DNA异倍体现象;而正常肾组织均为DNA二倍体。结论c-kit蛋白表达检测可以作为肾细胞癌诊断和组织学分型的重要指标,同时,DNA倍体分析在肾细胞癌的诊断和预后判定中也有重要的辅助意义。

宫颈细胞DNA倍体异常伴ASCUS病变的临床病理学意义

目的结合DNA倍体分析和The Bethesda system(TBS)诊断结果,研究意义未明的不典型鳞状细胞(atypical squamous cells of undermined significance,ASCUS)伴有DNA倍体异常病例的预后及病理改变。方法南京市妇幼保健院33188名妇女行宫颈癌筛查。用宫颈刷取宫颈上皮细胞,经固定后,离心机制成两张玻片,一张行巴氏染色作TBS诊断;另一张Feulgen染色行DNA倍体分析,其中539例妇女均进行阴道镜检查和组织病理学检查。结果 539例活检病例中,诊断为宫颈炎296例,宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia)1级(CIN1)132例,CIN2 64例,CIN3 38例和浸润癌9例。CIN2或CIN2以上级别病变111例,其中96例有DNA倍体异常(86.5%)。251例常规细胞学诊断为ASCUS,其中无非整倍体细胞168例中发现8例CIN2(4.7%)的病变;而伴有非整倍体细胞的83例中发现17例CIN2或CIN2以上级别的病变(20.5%),两组百分比之间用配对c2检验,有显著差异。活检病例中常规细胞诊断30例非典型鳞状细胞不除外高级别鳞状上皮内病变(atypical squamous cells,cannot exclude high-grade squamous intraepithelial lesion,ASC-H),9例无非整倍体细胞病例中有2例病理诊断为CIN2(22%);21例伴有非整倍体细胞有19例病理诊断为CIN2或CIN2以上级别的改变(90.4%)。两组百分比之间用配对c2检验有统计学上差异。结论 ASCUS、ASC-H伴有DNA倍体异常患者发展为CIN2及以上级别病变风险较高。

细胞增殖及DNA倍体不同表达与结肠癌临床分期之间的关系

目的 研究细胞增殖核抗原 (PCNA)及 DNA倍体水平的不同表达与结肠癌临床分期和预后之间的关系。方法 应用免疫组织化学方法及图像分析技术检测 65例结肠癌患者癌组织、癌旁正常粘膜的 PCNA标记指数和 DNA相对含量。结果 结肠癌组织中 PCNA标记指数和DNA相对含量分别为 (54.7± 13 .4) %和 7.64± 3 .15,与癌周正常粘膜组织比较具有显著差异 (P<0 .0 1) ;随着 Dukes分期的进展 ,PCNA标记指数和 DNA相对含量逐渐增加 ,C、D期较 A、B期有显著差异 (P<0 .0 1)。结论 细胞增殖核抗原及 DNA倍体水平不同的表达与结肠癌的发生发展有明显的关系 ,两者可以作为结肠癌临床分期和预后的监测指标之一。

卵巢癌流式细胞DNA倍体和S期比例的异质性

①目的探讨卵巢癌流式细胞ＤＮＡ倍体和Ｓ期比例的异质性。②方法应用流式细胞术（ＦＣＭ）测定了２７例卵巢癌的ＤＮＡ倍体和Ｓ期比例（ＳＰＦ），每例测定２～６块，取自原发癌和腹腔转移癌的不同区域石蜡包埋肿瘤组织。③结果２１例ＤＮＡ指数一致，６例显示ＤＮＡ指数异质性；ＤＮＡ异倍体肿瘤中只有９例可进行ＳＰＦ计算，结果同一病人不同区域ＳＰＦ变异很大，其中位数为８％（２％～１５％）；所有ＤＮＡ二倍体肿瘤的ＳＰＦ变异中位数为３％（０～７％）。④结论为保证流式细胞ＤＮＡ倍体及ＳＰＦ测定能代表卵巢癌的全部细胞干系，应采取多区域取材检测。

眼睑基底细胞癌细胞DNA倍体及核增殖抗原蛋白表达

目的研究眼睑基底细胞癌细胞DNA倍体及核增殖抗原(Ki67)蛋白表达对眼睑基底细胞癌临床预后的意义。方法收集接受肿瘤切除术的眼睑基底细胞癌患者23例,采用细胞图像光度术(image cytometer, ICM)和免疫组织化学技术分别检测眼睑基底细胞癌细胞DNA倍体和Ki67蛋白表达状况。结果二倍体与异倍体发生率的差异无统计学意义(P>0．05),二倍体与异倍体患者性别比、年龄及肿瘤大小的差异均无统计学意义(P值均>0．05)。所有患者癌细胞Ki67表达指数平均为0．243±0．021,其中二倍体平均为0．177±0．023,异倍体平均为0．268±0．021,两者的差异无统计学意义(P=0．142)。3种临床类型之间的差异亦无统计学意义(P值均>0．05)。术后随访的18例患者中,10例局部复发,无一例发生远处转移。局部复发者中异倍体发生率为9／10例,显著高于无复发者的3／8例(P=0．043)。复发患者癌细胞Ki67表达指数平均为0．272±0．134,无复发患者平均为0．197±0．019,两者的差异无统计学意义(P=0．069)。结论眼睑基底细胞癌细胞DNA异倍体可能与术后复发有关,故在临床治疗上应考虑对该类型患者采取相应措施。

DNA倍体及核形态参数检测在肾细胞癌预后判断中的价值

目的 :探讨图像细胞术测定肾细胞癌DNA倍体和核形态参数在预后判断上的价值及其与病变分级的关系。方法 :根据Fuhrman等建议的病理分级系统对 4 7例肾细胞癌进行分级 ,肿瘤组织切片经Feulgen染色后 ,应用图像分析仪测量肾细胞癌的DNA倍体以及细胞核形态参数并结合临床随访资料进行统计分析。结果 :平均DNA倍体分布在FuhrmanⅠ～Ⅱ级主要为 2C ,≥ 5C的细胞少于 10 % ,Ⅲ～Ⅳ级中 2C细胞少于Ⅰ～Ⅱ级 ,≥ 5C的细胞超过 2 0 % ,各组间DNA倍体参数之间差异有显著性 (P <0 .0 1)。瘤细胞核面积、周长和形状因子等参数在Ⅰ～Ⅳ级间差异都具有显著性 (P <0 .0 1)。随访资料中FuhrmanⅠ～Ⅱ级复发及死亡数为 2 / 16 ,而Ⅲ～Ⅳ级为 8/12 ,两组比较 ,复发转移及死亡率差异有显著性 (P <0 .0 1)。平均DNA倍体和细胞核形态参数在健存组与复发死亡组之间差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :提示肾细胞癌Fuhrman分级Ⅰ～Ⅱ级预后较好 ,Ⅲ～Ⅳ级预后差。用图像细胞术进行细胞核DNA倍体及核形态参数测定 ,对肾细胞癌预后判断有应用价值。

细胞DNA定量分析技术在尿路上皮癌诊断中的应用价值

目的:探讨细胞DNA定量分析技术(DNA-ICM)在尿路上皮癌诊断中的应用价值。方法:收集162例尿液标本,其中92例来自尿路上皮癌患者,70例来自良性泌尿系统疾病患者,分别采用DNA-ICM和液基细胞学(LBC)两种方法进行检查,并将两种结果对比。结果:细胞DNA-ICM在尿路上皮癌诊断中的敏感度为65.2%、特异度为100%,LBC分别为27.2%、98.6%,DNA-ICM检查的敏感度高于LBC,差异有统计学意义(P<0.01)。上尿路上皮细胞癌患者尿液标本中DNA-ICM敏感度为77.1%,高于膀胱尿路上皮细胞癌患者尿液标本的57.9%,但两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:细胞DNA-ICM在诊断尿路上皮癌方面有较大应用价值,可提高尿脱落细胞学的阳性检出率,是尿路上皮癌诊断和随访的有效检查方法。

口腔鳞癌、切缘组织DNA倍性特征及临床意义

目的 :研究口腔鳞癌、切缘组织和正常粘膜的DNA倍性特征、S期细胞比率 (S - phasefraction ,SPF)及临床意义。方法 :用FACS检测 39例患者口腔鳞癌、切缘组织及正常粘膜的DNA倍性并计算S期细胞比率。结果 :口腔鳞癌和切缘组织的异倍体率分别为 38%和 31% ,无统计学差异 ,但两者均显著高于正常口腔粘膜的异倍体率15 %。癌组织中异倍体患者的颈淋巴结转移率 40 % ,显著高于二倍体患者 2 1% (P <0 .0 2 5 )。切缘组织异倍体患者与二倍体患者的颈淋巴结转移无显著差异。口腔鳞癌与切缘组织间SPF分别为 2 3± 8.6 %、2 6± 9.2 % ,两者显著高于正常粘膜 12± 4.9% (P <0 .5 )。结论 :口腔鳞癌异倍体与颈淋巴结转移有关。

DNA聚合酶β基因在眼睑基底细胞癌中的表达及意义

目的探讨DNA聚合酶β基因在眼睑基底细胞癌中的表达及意义。方法收集30例眼睑基底细胞癌及30例癌旁正常眼睑组织为研究对象,RT-PCR、荧光定量PCR技术检测标本中Polβ聚合酶基因的表达差异,western blot技术检测标本中Polβ聚合酶在蛋白水平的表达差异;对正常眼睑组织及眼睑基底细胞癌组织中Polβ基因的表达进行统计学分析。结果荧光定量和western blot结果显示,30例正常眼睑组织中仅有5例Polβ基因呈高水平表达,其余25例低水平表达;30例眼睑基底细胞癌标本中,9例早期眼睑基底细胞癌中6例呈高水平表达,3例低水平表达;21例浸润性眼睑基底细胞癌组织中有16例呈高水平表达,5例呈低水平表达。Polβ基因在正常眼睑组织中的表达低于在眼睑基底细胞癌组织中的表达,有显著性差异(P<0.05)。结论 Polβ基因在眼睑基底细胞癌组织中的表达明显高于正常对照,提示Polβ基因以高水平表达的方式参与眼睑基底细胞癌的发生发展过程。在眼睑基底细胞癌发生的早期即可发现Polβ基因的高表达,提示其可以作为癌变的一个早期诊断标准。

基于脱落细胞DNA倍体定量分析的口腔鳞状细胞癌筛查及效果评价

目的:探究DNA倍体定量分析技术在口腔鳞状细胞癌筛查中的应用及效果评价。方法:2022年3月~2023年6月,对西安交通大学口腔医院门诊及住院107例患者,进行DNA倍体筛查及液基细胞学检查。DI>2.5的患者,为阳性患者,进行病理组织活检;DI<2.5的患者,若无明确临床恶性指征,视为阴性。将患者DNA倍体筛查结果与液基细胞学结果及病理活检结果进行比较。结果:107例患者中,28例患者进行了病理检查,其中27例患者DNA倍体诊断意见与病理报告结果相符,吻合率为96.43%。DI>2.5且病理结果为恶性的患者共24例,DNA倍体诊断意见与病理报告结果相符,吻合率为100%;DI>2.5,病理结果未明确恶性的1例,为鳞状上皮乳头状增生,部分上皮中-重度不典型增生;D1<2.5,病理结果为良性的患者2例;病理结果为恶性的患者1例,显示有效检测细胞不足。口腔鳞状细胞癌共22例,21例DNA倍体诊断意见与病理报告结果相符,吻合率为95.45%。结论:对于口腔鳞状细胞癌,DNA倍体筛查结果与病理活检结果的吻合率较高,DNA倍体定量分析比传统的细胞学检查敏感,是一种较为可靠、客观的口腔癌无创筛查方法.

图象分析法检测乳腺癌细胞DNA含量及其意义

目的：检测乳腺癌及其癌变过程中细胞DNA的含量，探讨DNA含量在这一过程中的变化规律和临床意义。方法：对1988年63例在我院手术治疗的浸润性乳腺癌，以及1984～1992年间手术治疗的13例导管内癌（ductalcarcinomainsitu，DCIS）、6例导管内癌伴早期浸润（DCIS＋Ca）、6例导管上皮高度增生（proliferativebreastdisease，PBD）的原发灶进行DNA图象分析（imagecytometry，ICM）,结合临床资料，分析63例浸润性乳腺癌细胞DNA含量与预后关系的观察。结果：发现浸润性乳腺癌与DCIS及PBD相比，有较高的DNA指数（DNAindex，NA）DI)、异倍体检出率、核面积（nucleararea，NA）和5C细胞阳性率（P＜0.05）。在DCIS与PBD两组病人中，DI、NA无明显差别（P＜0.05），而异倍体肿瘤,5C细胞出现在DCIS中（P＜0.05），且PBD中无5C细胞、异倍体出现。在乳腺癌病人预后的单因素分析中，发现5C细胞阳性、异倍体肿瘤等的无病生存率低（P＜0.01）。结论:异倍体细胞群的出现是细胞癌变的早期标志，DNA含量随着乳腺癌恶性程度增加而发生显著改变。

DNA倍体联合高危型HPV在宫颈鳞癌患者淋巴结转移中的表达

目的探讨DNA倍体联合高危型HPV(HR-HPV)在宫颈鳞癌患者术后盆腔淋巴结微转移中的表达及意义。方法根据术后淋巴结常规病理学检查(HE染色)结果分为淋巴结转移组(实验1组)和淋巴结无转移组(实验2组)。采用DNA-AICM及导流杂交方法分别对两组进行DNA倍体及HR-HPV的检测;将HE染色结果与DNA异倍体、HR-HPV检测结果进行对比。结果 DNA异倍体及HR-HPV在实验1组中的阳性表达率分别为56.07%及50.47%,双阳性率为44.86%。二者在实验2组中的阳性表达率分别为17.49%及10.59%,双阳性率为4.93%;二者在转移阳性淋巴结中的阳性表达率及双阳性率均为100%。二者在转移阴性淋巴结中的阳性表达率分别为19.58%及12.42%,双阳性率为6.32%。结论 DNA倍体及HR-HPV有可能作为宫颈鳞癌盆腔淋巴结微转移的指标,二者联合检测可提高盆腔淋巴结微转移的检出率。

DNA倍体和Ki67对喉鳞状细胞癌预后的预测价值

目的探讨DNA倍体及细胞增殖抗原标记物Ki67对喉鳞状细胞癌预后预测的价值。方法采用Feul-gen染色和免疫组化方法,对298例喉鳞状细胞癌石蜡标本DNA倍体情况及Ki67表达进行分析。结果喉鳞状细胞癌组织中存在着DNA非整倍体肿瘤和DNA二倍体肿瘤;DNA非整倍体肿瘤中Ki67表达高于DNA二倍体肿瘤中的表达,结果差异有统计学意义(P<0.05);进一步经COX回归多因素分析发现喉鳞状细胞癌中DNA倍体的不同和Ki67表达的高低是影响肿瘤死亡的独立因素(P=0.003,P=0.007)。结论在喉鳞状细胞癌中,DNA倍体和Ki67表达水平与颈部淋巴结转移、肿瘤复发及患者生存率相关,是判断喉鳞状细胞癌患者预后估计的提示性依据。