高纯度抗五步蛇毒F(ab′)_2血清的制备

目的摸索高纯度抗五步蛇毒血清的制备方法,以降低抗血清治疗毒蛇咬伤时因纯度不高发生的过敏和其他不良反应。方法从免疫后的马血浆中先提取IgG,然后酶解,通过疏水层析得到F(ab′)2片段,以SDS-PAGE电泳确定纯度,以小鼠体外中和试验确定F(ab′)2活性片段的中和能力。结果制备的抗五步蛇毒血清F(ab′)2冻干品纯度质量分数为91.3%,中和五步蛇毒干粉质量比为15∶1。结论采用新方法制备的F(ab′)2活性片段纯度质量分数能从70%提高到90%以上。

肠道病毒71型多克隆抗体F(ab’)2片段的制备及其体外中和效果评价

目的制备肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)多克隆抗体F(ab’)2片段,并评价其体外中和效果。方法采用硫酸铵分级沉淀法从EV71感染的兔血清中提取Ig G,用胃蛋白酶进行酶解,正交试验确定最佳酶解条件;使用阴离子交换层析(Q Sepharose Fast Flow)纯化得到F(ab’)2片段,采用体外中和试验检测其对EV71的中和效果。结果硫酸铵分级沉淀法得到电泳纯的Ig G;最佳酶解条件为:胃蛋白酶与Ig G按1∶10的质量比混合,47℃反应4 h,在此条件下,F(ab’)2的产率最大值为79.51%,且方差分析表明,酶切比例对F(ab’)2产率的影响最大,温度次之,时间对F(ab’)2产率的影响不明显;经阴离子交换层析纯化,可有效去除Fc片段,得到电泳纯的F(ab’)2;F(ab’)2具有与Ig G、正常血清同等的中和效果。结论成功制备了EV71兔多克隆抗体F(ab’)2片段,初步确定该F(ab’)2片段具有良好的体外中和效果。

马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)_2新制备工艺的建立

目的建立马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)2新的制备工艺。方法制备并纯化破伤风类毒素(Tetanustoxoid,TT)及重组破伤风毒素c片段(Recombinant tetanus toxin C fragment,rTT-C),将TT/rTT-C(2∶1)免疫马匹,待血清抗体效价达3 500 IU/ml时,采血,分离血清,灭活,去除外源蛋白,胃蛋白酶消化制备F(ab′)2,经DEAE柱层析纯化,并对其进行中和抗体效力、安全性和稳定性检测。结果纯化的TT和rTT-C的浓度分别为70 000 Lf/L和4～5 mg/L,纯度分别达95%以上和96%以上;纯化的TAT-F(ab′)2收率为1.4%,纯度达91%以上,中和抗体效价>15 000 IU/ml;其安全性及稳定性均符合《中国药典》三部(2005版)要求,有效期暂定为18个月。结论建立了马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)2新的制备工艺,制备的制品达到甚至超过了国外的质量标准,为马抗血清同类制品的升级换代提供了技术支持。

纸纤维固定木瓜蛋白酶的研究及应用

利用纸纤维为载体,制备高活性的固定化木瓜蛋白酶并应用于抗HCG抗体的水解.利用戊二醛交联法,制备固定化木瓜蛋白酶,并通过一系列优化,得到最佳固定化条件,包括pH﹑给酶量﹑温度﹑戊二醛体积分数,将制备的固定化木瓜蛋白酶应用于抗HCG抗体水解并制备F(ab′)2片段.研究表明:反应温度为40℃时,固定化酶在pH 5.0,0.01mol/L的醋酸缓冲液条件下,给酶量为46mg/g载体,戊二醛体积分数为0.01%时,固定化酶的酶活达到最高19 250U/g,相对于优化前1 940U/g提高了近10倍,成功应用于抗HCG抗体水解制备F(ab′)2片段:经SDS-PAGE电泳检测,F(ab′)2片段达到电泳纯.ELISA反应检测表明:片段仍保留较高的活性,效价为1∶12 000.

绿色无毒黄曲霉毒素B_1免疫检测方法

建立了一种基于抗独特型抗体的绿色无毒的ELISA方法，并用于检测面粉中黄曲霉毒素B1。通过酶解2种抗黄曲霉毒素小鼠单克隆抗体（11A9和1G3）制备F（db’）2片段，并将其免疫新西兰大白兔制备抗独特型抗体。最终得到两种抗独特型抗体，并对抗独特型抗体和AFB。进行相关性分析。通过实际样品添加回收，其批内回收率为115．60％～121．88％，变异系数在5％以内；而批间回收率为111．89％～126．98％，变异系数低于8％。分析结果准确可靠，表明此无毒绿色ELISA是一种安全可靠的AFB1分析方法。

抗大田软海绵酸单抗独特型抗体的制备及鉴定

目的:研制大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单抗的独特型抗体并鉴定其模拟抗原特性,为建立无毒检测提供借鉴。方法:利用小鼠腹水法大量制备抗OA单抗,经辛酸饱和硫酸铵法纯化后用胃蛋白酶酶切制备F(ab’)2片段,免疫日本大耳白兔,取其血清,琼脂扩散法检测血清抗体与抗OA单抗反应活性,ELISA方法鉴定血清抗体与抗OA单抗反应活性及与OA竞争活性。结果:该抗独特型抗体与抗OA单抗呈阳性反应,且可抑制抗OA单抗与固相抗原OA-OVA的结合。结论:制备的抗OA单抗的独特型抗体与OA抗原存在内影像的关系,可替代毒素用于检测。

破伤风抗毒素制备方法的改进

目的:改进破伤风抗毒素的制备方法,提高破伤风抗毒素中F(ab’)2片段含量。方法:常规方法免疫马匹,通过延长胃酶消化时间、调整胃蛋白酶比例及pH值处理免疫血浆,经硫酸铵沉淀、明矾吸附、超滤及除菌后,测定F(ab’)2片段含量。结果:通过调整上述生产条件,破伤风抗毒素中F(ab’),含量与总蛋白比由60％增至90%。结论:改进后的方法提高了破伤风抗毒素F(ab’)2含量。