甲氨蝶呤与抗人成骨肉瘤单克隆抗体F(ab′)_2片段偶联物的体外抗肿瘤作用

目的:研制一种以单抗F(ab′)2片段为基础的抗肿瘤导向药物。方法:制备出抗人成骨肉瘤单克隆抗体F(ab′)2片段与甲氨蝶呤(MTX)偶联物F(ab′)2-MTX、间接偶联物McAb-HSA-MTX、直接偶联物McAb-MTX,并进行体外靶细胞结合实验、细胞增殖抑制实验。结果:F(ab′)2、McAb、F(ab′)2-MTX、McAb-HSA-MTX、McAb-MTX均保持了与靶细胞MG-63的免疫反应性;细胞增殖抑制实验中,F(ab′)2-MTX、McAb-HSA-MTX、McAb-MTX、MTX的半抑制浓度(IC50)分别为(0.67±0.110)μg/L、(2.55±0.114)μg/L、(2.71±0.1452)μg/L、(5.51±1.529)μg/L,上述所有偶联物的杀伤活性明显大于游离MTX(P<0.05),F(ab′)2-MTX的杀伤活性明显大于McAb-HSA-MTX和McAb-MTX(P<0.01),F(ab′)2同抗体一样没有治疗作用。结论:F(ab′)2-MTX具有比MTX及McAb-MTX、McAb-HSA-MTX更强的体外抗肿瘤作用。

微囊藻毒素多克隆抗体的纯化及F(ab′)_2片段的制备

为制备微囊藻毒素(MCYST-LR)多克隆抗体F(ab′)2片段的方法。采用Protein G亲和柱纯化微囊藻毒素多克隆抗体,经木瓜蛋白酶在温和条件下酶切抗体,利用DEAE-52离子交换树脂柱分离抗体酶切片段,获得F(ab′)2片段。SDS-PAGE分析表明,MCYST-LR多克隆抗体得到有效纯化,木瓜蛋白酶酶切后出现明显F(ab′)2片段的对应谱带;利用紫外分光光度计法测得F(ab′)2片段的产率为30.6%。采用木瓜蛋白酶法成功制备了MCYST-LR多克隆抗体的F(ab′)2片段。