大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者血浆IgG亚型及FⅧ结合表位鉴定

目的确定1例大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者的临床和实验室诊断；通过体内外干预实验观察获得性血友病A患者体内的FⅧ抑制物对正常人血浆及兔FⅧ凝血活性（FⅧ：C）的影响；确定患者FⅧ抑制物的IgG亚型和结构表位，以揭示该病发病的分子机制。方法用Ⅰ期法测定患者血浆FⅧ：C；以Bethesda单位（BU）表示FⅧ：C抑制物滴度；用蛋白A一琼脂糖柱纯化患者及正常人血浆IgG；用活化部分凝血活酶时间（APTT）分析其对FⅧ：C的抑制作用；观察FⅧ抑制物对兔血浆FⅧ：C活性的抑制作用；分别用抗IgG1、IgG2、IgG3、IgG4抗体作Western blot，结合灰度扫描确定患者血浆IgG亚型相对表达量；散射比浊法测定患者及正常人体内各IgG亚型浓度；用FⅧ／FⅧ抑制物固相结合试验及Western blot鉴定患者IgG抗体（FⅧ抑制物）作用于FⅧ的具体“表位”。结果①患者APTT明显延长，正常血浆不能纠正；FⅧ：C〈1．5％，FⅧ抑制物滴度为147．8BU；②纯化的患者IgG以剂量依赖方式抑制正常人混合血浆FⅧ：C；动物实验显示患者血浆能以时间依赖方式延长兔血浆APTT；@Western blot结果显示FⅧ抑制物成分主要为IgG4，其次为IgG1，FⅧ抑制物作用于FⅧ：C的结构相对分子质量为44×10^3。散射比浊法测定结果显示患者体内IgG4、IgG4含量明显高于正常人。结论研究结果证明大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者体内FⅧ抑制物对FⅧ：C有抑制作用，FⅧ抑制物的IgG亚型主要为IgG4，其次为IgG1；患者FⅧ抑制物作用于FⅧ的表位为相对分子质量为44×10^3的肽段，揭示了该获得性血友病A发生、发展的分子机制。