F基因型腮腺炎减毒活疫苗的临床前安全性评价

目的观察F基因型腮腺炎减毒活疫苗的急性毒性及长期毒性试验效果。方法取前期制备的F基因型腮腺炎减毒活疫苗进行大鼠急性毒性试验,之后进行临床症状监测及大体病理学检查;并采用恒河猴进行长期毒性试验,之后观察试验动物的临床症状,进行血液学、生化检测、CD4+、CD8+细胞比例检测、病毒血症检测、病毒在组织器官的分布检测以及病理检查。结果急性毒性试验表明给予大鼠相当于人用剂量的1200倍剂量时,无论是临床症状监测还是大体病理学检查,均无明显异常;而长期毒性试验结果表明,恒河猴3次免疫8倍人用剂量时,疫苗对动物临床症状、血液学和血清生化指标无明显影响,CD4+、CD8+细胞比值亦无明显改变,动物的血液及组织器官中均未检出腮腺炎病毒RNA,各组织器官未见明显大体病理学改变。结论 F基因型腮腺炎减毒活疫苗的急性毒性试验及长期毒性试验均无明显异常,充分验证了疫苗的安全性,从而为疫苗进入临床试验提供了数据支持并奠定了基础。

F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的质量稳定性分析

目的分析在细胞工厂上生产的F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的质量稳定性。方法将KMB17细胞在细胞工厂中传代,待细胞长为单层时,将腮腺炎病毒SP-A株按MOI 0.02接种于KMB17细胞,在细胞工厂上连续制备6批F基因型腮腺炎减毒活疫苗,对病毒收获液、原液、半成品和成品进行病毒滴度检测,其中成品还进行热稳定性试验及无菌检查、异常毒性检查、细菌内毒素、牛血清白蛋白残留量和抗生素残留量等检测。对检测数据进行统计学分析,对实验结果进行正态性检验,并绘制2倍标准差及3倍标准差质量控制图,进一步分析其质量稳定性。结果不同阶段产品的病毒滴度、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量检测值均符合正态分布,且在2倍标准差控制限范围内波动;无菌试验、异常毒性试验、细菌内毒素检测结果均符合《中国药典》三部(2015版)要求。结论利用细胞工厂在人二倍体细胞基质上制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗的工艺,能持续稳定地获得有效性与安全性可靠的疫苗成品,且各项检测指标均符合《中国药典》三部(2015版)要求。本研究为F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化生产提供了实验依据。

不同细胞工厂制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的比较

目的比较两种不同厂牌聚苯乙烯细胞工厂制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的差异。方法采用不同浓度血清(10%、8%、5%),在两组不同厂牌细胞工厂(A组:无锡耐思生物科技有限公司,B组:美国康宁公司)中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB17,观察细胞形态变化并计数;在细胞长成致密单层后,接种SP-A株F基因型腮腺炎病毒,37℃培养7~9 d收获病毒液,经过滤后,获得疫苗原液。将病毒收获液、疫苗原液样品于4℃放置14 d、37℃放置7 d后检测病毒滴度,并按《中国药典》三部(2020版)要求检测相关安全性指标。结果两种不同厂牌细胞工厂培养的KMB17细胞生长状态和形态无明显差异,在细胞培养基的血清浓度为5%时,可获得较高滴度的病毒收获液;在该血清浓度下,两种不同厂牌细胞工厂培养的病毒收获液和疫苗原液感染性滴度均值为6.50 LgCCID50/mL,4℃放置14 d和37℃放置7 d后,A组与B组细胞工厂病毒滴度下降范围差异均无统计学意义(P>0.05);两种不同厂牌细胞工厂制备的病毒收获液和疫苗原液的无菌、分枝杆菌、支原体和细菌内毒素检查指标均符合《中国药典》三部(2020版)要求。结论两种不同厂牌细胞工厂均可用于制备SP-A株F基因型腮腺炎减毒活疫苗,本研究为F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化生产提供了实验依据。

不同月龄婴幼儿接种F基因型腮腺炎减毒活疫苗的免疫应答研究

目的探索不同月龄婴幼儿接种F基因型腮腺炎减毒活疫苗(Mumps attenuated live vaccine, MuV)后的免疫应答差异。方法招募无流行性腮腺炎疾病史且未接种过含腮腺炎成分疫苗的8-24月龄健康婴幼儿,接种F基因型MuV,采集免疫前和免疫后28d血标本,检测抗F基因型腮腺炎病毒中和抗体。结果分别招募8-12月龄、13-17月龄、18-24月龄健康儿童132名、104名、99名。3个年龄组儿童MuV免疫后抗F基因型腮腺炎病毒中和抗体阳性率分别为88.6%、90.4%、90.9%(χ~2=0.37,P=0.832),阳转率分别为87.9%、89.4%、89.9%(χ~2=0.27,P=0.874),几何平均滴度分别为1:5.88、1:7.12、1:6.83(H=1.25,P=0.536)。结论不同月龄婴幼儿接种F基因型MuV后均有良好免疫应答。

流行性乙型脑炎减毒活疫苗生产毒种(SA14-14-2株)及其疫苗的表型和E基因稳定性研究

目的 对乙脑减毒活疫苗SA14 14 2株生产毒种及其疫苗病毒滴度、脑内毒力和E区核苷酸序列进行回顾性测定。方法 应用乳金黄地鼠肾传代细胞 (BHK 2 1)结晶紫蚀斑法进行病毒滴度的测定 ,小鼠脑内法检测疫苗脑内毒力。应用RT PCR方法扩增SA14 14 2生产毒种和疫苗E区的核苷酸 ,经凝胶层析纯化的PCR产物直接用于测序或克隆到pGEM T载体中 ,经酶切和PCR鉴定后进行测序。结果 疫苗在 - 2 0℃保存长达 10多年 ,疫苗病毒滴度下降不超过 0 5lg;脑内毒力未见毒力回升。病毒蚀斑形态仍保持较SA14野毒株形态小的特性 ;以不同批次疫苗和生产毒种提取的病毒RNA作为模板进行RT PCR扩增 ,扩增的基因片段与预期大小一致 ;E区基因序列与野毒株差异的 8个氨基酸没有一个发生回复突变。结论 SA14 14

流行性乙型脑炎减毒活疫苗SA_(14)-14-2E基因的稳定性

分别对SA14 - 14- 2 (PHK8代 )疫苗株及其原野毒株SA14 和另 2个疫苗传代株 [SA14 - 14- 2 (PHK17代 )和SA14 - 14- 2 (鼠脑 1代 ) ]的E区基因进行了序列测定。结果表明 ,乙脑病毒减毒活疫苗SA14 - 14- 2在PHK细胞上连传至 17代时 ,发现 2个氨基酸突变 (E - 331、E - 398) ,但不是回复突变。虽然在毒力最容易返祖的乳鼠脑内传 1代后发生E - 10 7个氨基酸回复 ,但与野毒株毒力相比仍然相差很大 ,无毒力返祖现象。在疫苗的实际质控工作中 ,对上述与毒力相关的基因进行监测 ,可能有助于发现减毒活疫苗的毒力水平 ,为疫苗安全性提供更可靠的检测手段。

不同代次F基因型SP-A株腮腺炎病毒在恒河猴体内的致病性

目的观察不同代次F基因型SP-A株腮腺炎病毒在恒河猴体内的致病性。方法选取腮腺炎病毒SP-A株在KMB17细胞上传至15、20、30代的活病毒作为实验组,在Vero细胞上传至第2代的病毒作为野毒株对照组,分别接种恒河猴腮腺。观察实验动物体温和临床体征。活体取双侧腮腺,进行组织病理检查,并检测腮腺炎病毒中和抗体。结果对照组动物出现了明显的体温升高,一般状况较差,注射后第5天出现腮腺肿大,组织病理检查表现为淋巴细胞大量浸润。而各实验组动物均未出现腮腺炎症状和明显的组织病理学变化。各组动物接种病毒后均能产生抗腮腺炎病毒的中和抗体,但对照组的中和抗体GMT水平均高于各实验组。结论腮腺炎病毒SP-A株传至第15代次,已无致腮腺炎发病能力,为开发F基因型腮腺炎病毒减毒活疫苗奠定了基础。

甲型肝炎病毒(L-A-1株)基因型分析

目的 分析甲肝病毒基因型,为确定我国甲肝的分子流行病学及疫苗的安全性和免疫原性奠定基础。方法 采用抗原捕获聚合酶链反应（AC/PCR）,依据国际上甲肝病毒分型标准,扩增VP1/2A结合处的168个核苦酸（nt2909～3264）。结果 经生物信息学软件分析,得出L-A-1株病毒属于甲肝病毒基因IB亚型。结论 在我国有IA和IB两个亚型甲肝病毒流行。

麻疹-流行性腮腺炎-流行性乙型脑炎联合减毒活疫苗的安全性评价

目的进行麻疹-流行性腮腺炎(流腮)-流行性乙型脑炎(乙脑)联合减毒活疫苗(Measles,Mumps and Japanese Encephalitis Combined Attenuated Live Vaccine,M-M-JEV)的安全性评价。方法小鼠急性毒性试验:设M-M-JEV拟用临床剂量的80倍为低剂量,拟用临床剂量的400倍为高剂量,1次皮下注射给药,同时设阴性对照。观察临床症状,检查注射部位、体重、病理学。猴体长期毒性试验:设M-M-JEV拟用临床剂量为低剂量,拟用临床剂量的5倍为高剂量,2次皮下注射给药,同时设阴性对照及麻疹减毒活疫苗、流腮减毒活疫苗和乙脑减毒活疫苗对照。观察临床症状,检查注射部位、体温、体重、心电图、血液学、血清生物化学、摄食量、尿液、眼科学以及血清中和抗体(Neutralizing Antibody,NA)的变化情况,大体病理学和组织病理学检查。结果各项观察指标及检查结果均与对照疫苗或阴性对照相似,相关数据与对照疫苗或阴性对照组比较差异无统计学意义,未见其他明显毒副作用,第1次给药后4周,麻疹病毒NA、流腮病毒NA及乙脑病毒NA水平与对照单价疫苗比较差异均无统计学意义。结论M-M-JEV表现出与单价疫苗相似的安全性和免疫原性。

麻疹-流行性腮腺炎-流行性乙型脑炎联合减毒活疫苗的研究

目的研制麻疹-流行性腮腺炎(流腮)-流行性乙型脑炎(乙脑)联合减毒活疫苗(Measles,Mumps and Japanese Encephalitis Combined Attenuated Live Vaccine;M-M-JEV)。方法选用麻疹病毒沪191疫苗株、流腮病毒Wm84疫苗株和乙脑病毒SA14-14-2疫苗株,制备单价麻疹减毒活疫苗(Measles Attenuated Live Vaccine,MV)、流腮减毒活疫苗(Mumps Attenuated Live Vaccine,MuV)和乙脑减毒活疫苗(Japanese Encephalitis Attenuated Live Vaccine,JEV)原液,进行干扰试验、配比试验、保护剂筛选试验、冻干曲线的选择。结果确定了M-M-JEV的制备工艺,进行了M-MJEV的中试。中试的M-M-JEV经全面检定,各项指标均符合2010年版《中华人民共和国药典》(《中国药典》)三部单价MV、MuV和JEV的质量标准。动物试验未见病毒间交叉干扰,未见加重反应,未影响小鼠的免疫应答,表现出了良好的安全性和免疫原性。结论成功制备了M-M-JEV。

麻疹-流行性腮腺炎-流行性乙型脑炎联合减毒活疫苗的稳定性研究

目的考察麻疹-流行性腮腺炎（流腮）-流行性乙型脑炎（乙脑）联合减毒活疫苗（Measles,Mumps and Japanese Encephalitis Combined Attenuated Live Vaccine;M-M-JEV）的稳定性。方法将M-M-JEV,37℃放置7d,检测病毒滴度;2-8℃放置0-25个月,检测外观、水分、病毒滴度、安全试验、异常毒性,0月和18个月时进行全检;（-30±2）℃放置0-30个月,检测外观、水分、病毒滴度、安全试验、异常毒性,0月、18个月、30个月时进行全检。结果所有检测结果,均符合2010年版《中华人民共和国药典》三部麻疹减毒活疫苗、流腮减毒活疫苗和乙脑减毒活疫苗的质量标准。结论 M-M-JEV有较好的稳定性。

麻疹-流行性腮腺炎-流行性乙型脑炎联合减毒活疫苗猴体神经毒力研究

目的观察恒河猴对麻疹-流行性腮腺炎(流腮)-流行性乙型脑炎(乙脑)联合减毒活疫苗(Measles,Mumps and Japanese Encephalitis Combined Attenuated Live Vaccine,M-M-JEV)的神经毒力产生及其严重程度,对M-M-JEV进行安全性评价。方法猴两侧丘脑和腰髓内注射M-M-JEV,同时设阴性对照和麻疹减毒活疫苗、乙脑减毒活疫苗及麻疹-流腮联合减毒活疫苗对照,观察临床症状,并检查注射部位、体温、血液学、血液生物化学、摄食量、眼科学以及血清抗体等变化情况;实验结束进行大体病理学和组织病理学检查。结果各项观察指标及检查结果均与对照疫苗或阴性对照相似,相关数据与对照疫苗或阴性对照组比较差异均无统计学意义。结论 M-M-JEV表现出与单价疫苗或相关联合疫苗相似的安全性。

野生型麻疹病毒基因多样性:对全球消除麻疹的意义

本世纪60年代初麻疹减毒活疫苗问世以来。

乙型脑炎减毒活疫苗对中国主要流行基因型毒株的免疫效果

目的评价乙型脑炎(简称乙脑)减毒活疫苗SA14-14-2免疫人体后对中国流行的两种主要基因型(Ⅰ型和Ⅲ型)的免疫效果。方法收集乙脑减毒活疫苗免疫的健康儿童免疫前及免疫后28 d采集的血清样品,采用蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)检测血清中对中国流行的两种基因型乙脑病毒的中和抗体,并计算血清中和抗体阳转率。结果疫苗免疫后对国内流行的基因Ⅰ型和Ⅲ型乙脑病毒均产生了较高水平的中和抗体,血清中和抗体阳转率分别为90. 0%和92. 0%,几何平均滴度(GMT)分别为1︰26. 2和1︰27. 5,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论乙脑减毒活疫苗免疫人体后,对中国流行的2种基因型乙脑病毒均具有较好的免疫效果。

流行性乙型脑炎减毒活疫苗SA_(14)-14-2弱毒株的表型和基因型特性及其稳定性

自 198 9年以来 ,流行性乙型脑炎 (乙脑 )减毒活疫苗在国内已广泛应用于乙脑的预防接种 ,在约 1 5亿人群的接种观察中未发现与疫苗相关的病例报告。乙脑SA14 14 2减毒株的表型和基因型特征及其通过体内外传代后的表型和基因型稳定性表明 ,乙脑SA14 14 2减毒株具有弱毒群体均一 ,无温度敏感 (Ts) ,对小鼠、猴子脑内接种不致病 ,经细胞回传 17代或鼠脑传 5代后无返祖 ,以及在基因序列上核苷酸发生多部位 (5 7～ 6 6个 )突变导致 2 4～ 31个氨基酸替代 ,经细胞传代后保持稳定、无回复突变等主要特征。综述分析认为 ,上述SA14 14 2减毒株的这些表型和基因型特征 ,是疫苗接种后对人体高度安全的相关基础 ,结合该疫苗对人体的高免疫性 ,SA14 14

河北省2020年1例接种麻疹风疹联合减毒活疫苗后D8基因型麻疹野病毒感染的鉴定

目的对河北省2020年1例接种麻疹风疹联合减毒活疫苗(MR)后发热出疹病例进行麻疹病毒基因型鉴定。方法对该病例进行流行病学调查,采集血清和咽拭子标本,分别检测麻疹IgM抗体和麻疹病毒核酸,麻疹病毒核酸阳性标本进行核苷酸序列测定和分析。结果该病例8月龄,接种MR后8d出现发热、出疹、咳嗽、卡他、结膜炎、柯氏斑和淋巴结肿大;血清麻疹IgM抗体阳性,咽拭子标本麻疹病毒核酸阳性;该例麻疹病毒株与WHO D8基因型参考株的核苷酸、氨基酸同源性分别为98.6%、97.3%,与中国香港D8基因型株的核苷酸和氨基酸同源性均为100%。结论该例接种MR后麻疹病例为非本土的D8基因型麻疹野病毒感染所致,与MR接种无关。

基因工程肝炎疫苗研究新进展

病毒性肝炎是世界性的严重传染病。肝炎病毒至少有五种,甲型肝炎病毒(HAV),乙型肝炎病毒(HBV),丙型肝炎病毒(HCV),丁型肝炎病毒(HDV),戊型肝炎病毒(HEV)。HBV是一DNA病毒属嗜肝DNA病毒科。HDV是依赖于HBV的缺陷型病毒,其基因组是一单链RNA环状分子,包膜是HBV的包膜抗原。HAV、HCV、HEV均为RNA病毒,

乙型脑炎减毒活疫苗对不同基因型乙型脑炎病毒的免疫效果

目的研究乙型脑炎减毒活疫苗免疫人体后对不同基因型乙型脑炎病毒的免疫反应。方法将乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2)免疫8~12月龄健康儿童,采集免疫前及免疫后28 d静脉血,分离血清,采用蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)分别检测血清中对不同基因型乙型脑炎病毒毒株的中和抗体,计算血清中和抗体阳转率。结果乙型脑炎减毒活疫苗免疫后对基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型乙型脑炎病毒毒株均产生了显著水平的中和抗体,血清中和抗体阳转率分别为94%、92%和94%。结论乙型脑炎减毒活疫苗免疫人体后,对不同基因型的乙型脑炎病毒均产生良好的免疫应答。

乙型脑炎核酸疫苗的研究进展

流行性乙型脑炎（epidemic encephalitis）是由黄病毒科（flaviridae）黄病毒属乙型脑炎病毒引起的一种严重威胁人畜健康的急性中枢神经系统传染病，是重要的人畜共患病及虫媒病毒病。该病对猪的致死率不高，但能引起怀孕母猪发生流产、产死胎和木乃伊胎，公猪发生睾丸炎，育肥猪持续高热，仔猪常呈脑炎症状，对养猪业危害严重。目前，预防乙型脑炎病毒感染的疫苗有灭活疫苗和减毒活疫苗，但灭活疫苗存在注射剂量大、效果不稳定、免疫力不持久等不足；我国研制的减毒活疫苗虽然保护性好，但活苗有可能出现毒力反强、带毒、排毒、垂直传播、核酸重组等现象，而且通过常规的血清学方法检查一般与自然感染无法区分；因此，人们设法利用生物技术开发新型基因工程疫苗以克服现有疫苗的缺点。核酸疫苗作为疫苗家族的新成员有许多优点，笔者仅就乙型脑炎病毒核酸疫苗的研究现状作一综述。