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抗竹叶青蛇毒抗体F(ab′)2的制备 被引量:6
1
作者 郑颖 张连江 +2 位作者 范泉水 邱薇 李作生 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期269-272,共4页
目的:制备特异性强、高纯度的抗竹叶青蛇毒抗体F(ab′)2。方法:以竹叶青蛇毒为免疫原免疫马,试血效价达到要求后,从免疫马血浆中先提取IgG,然后酶解、过疏水柱后得到F(ab′)2片段,以免疫扩散实验检测抗体F(ab′)2片段的特异性,以小鼠中... 目的:制备特异性强、高纯度的抗竹叶青蛇毒抗体F(ab′)2。方法:以竹叶青蛇毒为免疫原免疫马,试血效价达到要求后,从免疫马血浆中先提取IgG,然后酶解、过疏水柱后得到F(ab′)2片段,以免疫扩散实验检测抗体F(ab′)2片段的特异性,以小鼠中和试验测定其中和竹叶青蛇毒的能力。结果:纯化得到的F(ab′)2活性片段纯度可达90%;F(ab′)2冻干品与竹叶青蛇毒在8∶1时出现免疫沉淀线,在20∶1时可保护小鼠100%存活。结论:纯化得到的抗体F(ab′)2活性片段对竹叶青蛇毒具有较好的中和能力。 展开更多
关键词 竹叶青蛇毒 抗体 f(ab′)2 制备 冻干
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单克隆抗体F(ab’)_2片段的制备与质量控制 被引量:3
2
作者 米力 陈志南 +3 位作者 余晓玲 冯强 边惠洁 徐力青 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1999年第4期216-218,共3页
本文在F(ab’) 2 片段抗体的制备工艺上 ,采用HPLC疏水色谱法 ,用高性能的疏水色谱柱 ,经 2次纯化后的F(ab’) 2 纯度可大于 98% ,回收率大于 5 0 % ,整个过程控制无菌无热原 ,纯化后产品经检定完全符合有关人用鼠源性单抗质量控制标准 ... 本文在F(ab’) 2 片段抗体的制备工艺上 ,采用HPLC疏水色谱法 ,用高性能的疏水色谱柱 ,经 2次纯化后的F(ab’) 2 纯度可大于 98% ,回收率大于 5 0 % ,整个过程控制无菌无热原 ,纯化后产品经检定完全符合有关人用鼠源性单抗质量控制标准 ,适宜做大规模生产。 展开更多
关键词 单克隆抗体 f(ab')2片段 疏水柱层析 制备 检定
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抗体F(ab′)_2片段靶向的载多柔比星免疫毫微粒的构建及其抗肝癌作用 被引量:3
3
作者 王霞 刘晓波 +2 位作者 蔡美英 黎光 魏大鹏 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期176-180,共5页
目的 构建抗体F(ab′) 2 片段靶向的载药免疫毫微粒 ;评价F(ab′) 2 片段免疫毫微粒对肿瘤的特异结合性及杀伤作用。方法 采用异型双功能交联剂琥珀酰亚胺基 3 (2 吡啶二硫 )丙酸酯 (SPDP)将抗人肝癌单抗HAb18或对照抗体 4E3的F(ab... 目的 构建抗体F(ab′) 2 片段靶向的载药免疫毫微粒 ;评价F(ab′) 2 片段免疫毫微粒对肿瘤的特异结合性及杀伤作用。方法 采用异型双功能交联剂琥珀酰亚胺基 3 (2 吡啶二硫 )丙酸酯 (SPDP)将抗人肝癌单抗HAb18或对照抗体 4E3的F(ab′) 2 片段与多柔比星 (ADR)人血清白蛋白毫微粒 (ADR HAS NP)共价交联构建抗体F (ab′) 2 片段靶向的载药免疫毫微粒 (HAb18F(ab′) 2 ADR HSA NP ,4E3F (ab′) 2 ADR HSA NP) ;采用玻片凝集试验 ,免疫荧光染色实验确定F(ab′) 2 片段是否结合在毫微粒表面 ;采用花环形成实验 ,花环形成阻断实验 ,扫描电镜分别从光镜、电镜水平观察F(ab′) 2 片段免疫毫微粒是否同人肝癌细胞株SMMC 772 1特异性结合 ;采用MTT比色分析法研究F(ab′) 2 片段免疫毫微粒的体外细胞毒作用 ;采用皮下荷人肝癌裸鼠模型 ,经瘤体注射观察免疫毫微粒的抗人肝癌作用。结果 F (ab′) 2 片段免疫毫微粒圆球状 ,粒径1 2 μm左右 ,免疫荧光染色阳性而ADR HSA NP为阴性 ,提示F (ab′) 2 片段已偶联到ADR HSA NP表面 ;HAb18F(ab′) 2 ADR HSA NP能有效结合于人肝癌细胞株SMMC 772 1,该结合能被HAb18抗体的F(ab′) 2片段阻断 ,未见该免疫毫微粒与对照细胞 (SW 1116)有效结合 ,这些结果提示 ,HAb18F(ab′) 展开更多
关键词 抗体f(ab')2片段 多柔比星 ADR 白蛋白毫微粒 肝癌 载体
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疏水作用FPLC一步法制备级纯化抗人肝癌单抗HAb18F(ab')_2片段 被引量:9
4
作者 余晓玲 米力 陈志南 《第四军医大学学报》 2000年第1期S001-S003,共3页
目的 制备符合人用标准的肝癌单抗 HAb1 8F(ab') 2 片段 .方法 用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体 ,胃蛋白酶与抗体在 p H3.5 0 .1 mol· L- 1柠檬酸条件下 ,经不同反应时间 ,收集样品 ,上 FPL C(快速蛋白液相色谱 )Pheny... 目的 制备符合人用标准的肝癌单抗 HAb1 8F(ab') 2 片段 .方法 用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体 ,胃蛋白酶与抗体在 p H3.5 0 .1 mol· L- 1柠檬酸条件下 ,经不同反应时间 ,收集样品 ,上 FPL C(快速蛋白液相色谱 )Phenyl- Sepharose HP疏水柱纯化并进行质检 .结果 按上述条件消化 2 h,95 %以上的 Ig G裂解为 F(ab') 2 片段 ,经Phenyl- Sepharose HP疏水柱纯化后 F(ab') 2 片段纯度可达98.8% .纯化时间仅 5 0 m in,一次制备量可达 5 0 0 mg,回收率>5 0 % ,免疫活性为 1∶ 80 0 0 ,细菌、热原质检测结果为阴性 .结论 该法操作简便 ,周期短 ,易于质控 ,是大量、快速、高产率制备 F(ab') 2 片段的有效方法 . 展开更多
关键词 肝癌 单克隆抗体 纯化 fPLC 胃蛋白酶
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哇巴因多克隆抗体F(ab)_2片段的制备及其分子量测定 被引量:2
5
作者 张明娟 吕卓人 +2 位作者 袁育康 贺浪冲 王颢 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2001年第1期5-7,共3页
目的制备哇巴因多克隆抗体F(ab) 2 片段 ,并对其进行分子量的测定。方法免疫家兔制备哇巴因多克隆抗体 ,在适宜的条件下 ,用胃蛋白酶酶解哇巴因多克隆抗体 ,制备F(ab) 2 片段。酶解产物经HPSEC分析、纯化 ,ELISA法检测其免疫学活性。并... 目的制备哇巴因多克隆抗体F(ab) 2 片段 ,并对其进行分子量的测定。方法免疫家兔制备哇巴因多克隆抗体 ,在适宜的条件下 ,用胃蛋白酶酶解哇巴因多克隆抗体 ,制备F(ab) 2 片段。酶解产物经HPSEC分析、纯化 ,ELISA法检测其免疫学活性。并在适宜的色谱条件下 ,分别测定三种标准蛋白的洗脱体积 ,绘制标准曲线 ,测定其分子量。结果 10 0mg哇巴因多克隆抗体在 2mg胃蛋白酶消化 18h ,反应体系pH 3 .0的条件下消化 ,制备出了活性的F(ab) 2 片段 ,其相对分子质量为 10 7kD。结论用胃蛋白酶消化哇巴因多克隆抗体 ,可制备出活性的F(ab) 2 片段 ,同时其相对分子质量的测定为其进一步研究提供了依据。 展开更多
关键词 哇巴因 抗体 f(ab)2片段 制备 相对分子量
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载^(131)I和阿霉素“双弹头”F(ab′)_2片段免疫毫微粒的抗人肝癌作用 被引量:5
6
作者 刘晓波 蔡美英 +3 位作者 阚和平 魏大鹏 王霞 黎光 《实用癌症杂志》 2007年第1期1-4,共4页
目的研究载131I和阿霉素“双弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒的抗肿瘤效应及其在荷瘤裸鼠体内的分布。方法采用氯胺T法,将核素131I结合到抗人肝癌HAb18抗体的F(ab′)2片段靶向的载阿霉素毫微粒上,构建“双弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒;... 目的研究载131I和阿霉素“双弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒的抗肿瘤效应及其在荷瘤裸鼠体内的分布。方法采用氯胺T法,将核素131I结合到抗人肝癌HAb18抗体的F(ab′)2片段靶向的载阿霉素毫微粒上,构建“双弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒;采用花环形成实验、MTT比色分析法等分别研究该免疫毫微粒对人肝癌细胞株(SMMC-7721)的特异性结合及体外细胞毒作用;应用皮下荷人肝癌裸鼠模型,评价该免疫毫微粒的体内分布及其抗肝癌作用。结果“双弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒能特异性结合于SMMC-7721细胞周围形成花环,其IC50明显低于“单弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒;该免疫毫微粒经尾静脉给药后,主要分布于肝、脾等处,而经瘤体注射主要滞留于瘤体内,其抑瘤率显著高于对照“单弹头”毫微粒。结论载131I和阿霉素“双弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒,具有较“单弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒更佳的抗肿瘤效应。 展开更多
关键词 放射性核素 载药毫微粒 抗体f(ab’)2 片段 肝癌
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抗哇巴因多克隆抗体F(ab)_2片段的研制及鉴定 被引量:2
7
作者 张明娟 吕卓人 +2 位作者 袁育康 贺浪冲 王颢 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第6期585-586,605,共3页
目的 用胃蛋白酶酶解抗哇巴因多克隆抗体 ,制备出F(ab) 2 片段 ,为改型抗体的研究提供依据。方法 免疫家兔制备出抗哇巴因多克隆抗体 ,并用胃蛋白酶分别在不同的酶解条件下消化抗体 ,继之用高效液相排阻色谱法 (HPSEC)对其进行分析、... 目的 用胃蛋白酶酶解抗哇巴因多克隆抗体 ,制备出F(ab) 2 片段 ,为改型抗体的研究提供依据。方法 免疫家兔制备出抗哇巴因多克隆抗体 ,并用胃蛋白酶分别在不同的酶解条件下消化抗体 ,继之用高效液相排阻色谱法 (HPSEC)对其进行分析、纯化 ,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测、鉴定其活性。结果 用胃蛋白酶 2mg/1 0 0mg抗哇巴因多克隆抗体 ,消化 1 8h ,反应体系的 pH3 0时 ,可获得F(ab) 2 片段。结论 用胃蛋白酶酶解抗哇巴因多克隆抗体是研制出有活性的F(ab) 2 展开更多
关键词 f(ab)2片段 研制 鉴定 抗哇巴因多克隆抗体
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鼠源性单克隆抗体F(ab′)_(2)片段制备工艺 被引量:4
8
作者 余晓玲 米力 +1 位作者 陈志南 边惠洁 《第四军医大学学报》 2000年第12期1533-1536,共4页
目的 制备符合临床应用质量标准的鼠源性 m Ab F(ab′) 2 片段 .方法 采用胃蛋白酶消化小鼠腹水抗体 ,疏水作用色谱法纯化 F(ab′) 2 片段的新工艺 ,替代原有的木瓜蛋白酶消化 Ig G,阴离子交换色谱法纯化的旧工艺 .结果 新工艺所制备... 目的 制备符合临床应用质量标准的鼠源性 m Ab F(ab′) 2 片段 .方法 采用胃蛋白酶消化小鼠腹水抗体 ,疏水作用色谱法纯化 F(ab′) 2 片段的新工艺 ,替代原有的木瓜蛋白酶消化 Ig G,阴离子交换色谱法纯化的旧工艺 .结果 新工艺所制备的 F(ab′) 2 片段经 SDS- PAGE检测纯度达 98%以上 ,ABC免疫组化法测定免疫活性为 1∶ 80 0 0 ,回收率大于 5 0 % ,核酸含量及热原均合格 ,整个工艺流程可在 48h内完成 .结论 新工艺制备人用鼠源性 m Ab F(ab′) 2 片段更简便高效、安全实用 。 展开更多
关键词 鼠源性单克隆抗体 f(ab′)_(2)片段 制备工艺
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单抗TIGTC-Ⅲ片段F(ab′)_2的制备及其放射免疫显像研究 被引量:1
9
作者 施乐华 杨家和 +4 位作者 崔贞福 吴孟超 潘文舟 孔令山 王明库 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期35-36,39,共3页
目的:将抗人原发性肝癌(PLC)单抗TIGTCⅢ,用胃蛋白酶法消化成F(ab′)2片段,标记131I后进行裸鼠人肝癌移植瘤的体内定位研究。方法:采用胃蛋白酶消化法,进行裸鼠体内核素显像。结果:消化产率为317%... 目的:将抗人原发性肝癌(PLC)单抗TIGTCⅢ,用胃蛋白酶法消化成F(ab′)2片段,标记131I后进行裸鼠人肝癌移植瘤的体内定位研究。方法:采用胃蛋白酶消化法,进行裸鼠体内核素显像。结果:消化产率为317%±24%,经细胞结合实验证明F(ab′)2具有良好的免疫活性,抗体片段进入裸鼠体内后,与完整抗体比,进入肿瘤的速度快,生物学分布特异性高,定位指数上升,血清本底下降迅速,生物半衰期明显缩短。结论:F(ab′)2与全抗体比较可使成像时间提前。 展开更多
关键词 单克隆抗体 f(ab')2片段 放射免疫显像 肝肿瘤
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重组抗人血小板GPⅡb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)_2在Beagle犬体内药动学 被引量:1
10
作者 李佐刚 闻镍 +6 位作者 季顺东 汤瑶 孙旭 于敏 王秀文 王军志 李波 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第20期1570-1573,共4页
目的研究了重组抗人血小板GPIIb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)2经静脉单次给药后在Beagle犬中的药动学。方法按不同时间点采血,分离血浆,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定犬血浆中嵌合单抗F(ab′)2的浓度,根据非房室统计矩模型进行... 目的研究了重组抗人血小板GPIIb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)2经静脉单次给药后在Beagle犬中的药动学。方法按不同时间点采血,分离血浆,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定犬血浆中嵌合单抗F(ab′)2的浓度,根据非房室统计矩模型进行曲线拟合并计算药动学参数。结果Beagle犬分别静脉单次注射高、中、低(1.2,0.8,0.4mg.kg-1)后,t1/2分别为(7.35±0.65),(8.28±0.68)和(7.03±3.26)h,CLs与Vss随着剂量的减小发生增加的变化,血药浓度-时间曲线下面积AUC0-inf分别为(2453.70±371.59),(1097.64±142.11)和(362.63±169.12)μg.h.L-1,剂量之比为3:2:1,对应的AUC0-inf比值为6.8:3:1,剂量与AUC成正相关性,相关系数R2=0.9714,但是AUC0-inf的增加量大于剂量的增加量。结论在本实验的剂量范围内,剂量与AUC0-inf成正相关性,AUC0-inf的增加量大于剂量的增加量,预示在以上剂量范围内嵌合单抗F(ab′)2在Beagle犬血浆中的浓度变化可能呈非线性药动学规律;动物性别对药动学参数无显著性影响。 展开更多
关键词 ELISA 血小板减少症 人源化重组anti—GPⅡb/Ⅲa 单克隆抗体 药动学
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CD20F(ab′)_2抗体的发酵与纯化 被引量:1
11
作者 王金宏 纪庆 +5 位作者 熊冬生 许元生 杨纯正 王彩云 许元富 郑梦杰 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期654-657,共4页
转化了质粒PYZcpp3的 16C9大肠杆菌可高水平地分泌表达可溶性CD2 0F(ab′) 2 抗体 ;采用经优化的培养条件 ,在发酵罐上进行高密度培养OD550 值达 14 0 ;每升湿菌菌重 2 0 0g ;抗体的产量每升为 2 4 1mg ,其中F(ab′) 2 片段达 5 0 % ,F... 转化了质粒PYZcpp3的 16C9大肠杆菌可高水平地分泌表达可溶性CD2 0F(ab′) 2 抗体 ;采用经优化的培养条件 ,在发酵罐上进行高密度培养OD550 值达 14 0 ;每升湿菌菌重 2 0 0g ;抗体的产量每升为 2 4 1mg ,其中F(ab′) 2 片段达 5 0 % ,F(ab′) 2 可以特异性的识别CD2 0 + 细胞并与CD2 0相结合 ;F(ab′) 2 对Raji细胞的IC50 值为 2 2 8μg mL ;而Fab′对Raji细胞的IC50 值为 4 5 9μg mL。 展开更多
关键词 高密度培养 CD 20f(ab’)2 抗体 16C9大肠杆菌
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高纯度抗五步蛇毒F(ab′)_2血清的制备 被引量:1
12
作者 张连江 郑颖 +3 位作者 范泉水 邱薇 李江 余芳芳 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期414-418,共5页
目的摸索高纯度抗五步蛇毒血清的制备方法,以降低抗血清治疗毒蛇咬伤时因纯度不高发生的过敏和其他不良反应。方法从免疫后的马血浆中先提取IgG,然后酶解,通过疏水层析得到F(ab′)2片段,以SDS-PAGE电泳确定纯度,以小鼠体外中和试验确定F... 目的摸索高纯度抗五步蛇毒血清的制备方法,以降低抗血清治疗毒蛇咬伤时因纯度不高发生的过敏和其他不良反应。方法从免疫后的马血浆中先提取IgG,然后酶解,通过疏水层析得到F(ab′)2片段,以SDS-PAGE电泳确定纯度,以小鼠体外中和试验确定F(ab′)2活性片段的中和能力。结果制备的抗五步蛇毒血清F(ab′)2冻干品纯度质量分数为91.3%,中和五步蛇毒干粉质量比为15∶1。结论采用新方法制备的F(ab′)2活性片段纯度质量分数能从70%提高到90%以上。 展开更多
关键词 高纯度抗五步蛇毒血清 抗原结合片段[f(ab’)2] 制备
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抗人肝癌mAb HAb18F(ab′)_2半成品的制备与质量控制 被引量:1
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作者 余晓玲 米力 +1 位作者 陈志南 冯强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期161-163,共3页
目的制备符合人用标准的抗人肝癌mAbHAb18F(ab′)2 片段。方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体 ,然后在快速蛋白液相色谱(FPLC)上用Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化并进行质检。结果经Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化后 ,F(ab′)2 片... 目的制备符合人用标准的抗人肝癌mAbHAb18F(ab′)2 片段。方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体 ,然后在快速蛋白液相色谱(FPLC)上用Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化并进行质检。结果经Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化后 ,F(ab′)2 片段的纯度可达98.8% ;回收率大于50 % ;免疫活性为1∶8000;细菌、热原质检测均呈阴性。结论本制备工艺周期短、易于质控 ,适宜进行中试放大及半成品生产。 展开更多
关键词 抗人肝癌 单克隆抗体 片段抗体 制备 质量控制
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马破伤风免疫球蛋白F(ab′)_2及其临床应用前景 被引量:13
14
作者 丁天然 张永信 《上海医药》 CAS 2012年第19期13-15,共3页
破伤风在现今医疗条件下的死亡率仍高达10%。长期以来,破伤风防治主要依赖破伤风抗毒素(TAT),后者主要含有马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2和特异性抗体免疫球蛋白G(IgG)。经过多年的工艺改进,新制品马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2因提高了可... 破伤风在现今医疗条件下的死亡率仍高达10%。长期以来,破伤风防治主要依赖破伤风抗毒素(TAT),后者主要含有马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2和特异性抗体免疫球蛋白G(IgG)。经过多年的工艺改进,新制品马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2因提高了可中和破伤风毒素的有效成分F(ab′)2的含量,同时降低了会引起过敏反应的主要成分IgG的含量、使不良反应发生率降低,具有良好的临床应用前景,是TAT的升级换代制品。 展开更多
关键词 马破伤风免疫球蛋白f(ab’)2不良反应 临床应用
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抗汉坦病毒单克隆抗体F(ab')_2的制备及其纯度和活性鉴定
15
作者 赵茜 徐志凯 +3 位作者 王海涛 薛小平 张芳琳 白文涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期132-134,共3页
利用木瓜蛋白酶分别制备了抗汉坦病毒鼠源性单克隆抗体(mAb)3G1和3D8F(ab′)2片段。通过WaterDEAE40HR阴离子交换色谱柱纯化后,非还原型SDSPAGE呈现单一条带,相对分子质量(Mr)约100... 利用木瓜蛋白酶分别制备了抗汉坦病毒鼠源性单克隆抗体(mAb)3G1和3D8F(ab′)2片段。通过WaterDEAE40HR阴离子交换色谱柱纯化后,非还原型SDSPAGE呈现单一条带,相对分子质量(Mr)约100000。两种F(ab′)2片段均具有良好的血凝抑制活性。 展开更多
关键词 汉坦病毒 单克隆抗体 制备 鉴定 f(ab')2片段
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抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)_2治疗性抗体对SARS-CoVBJ-01株的中和作用
16
作者 邢丽 安玉军 +5 位作者 石辛甫 刘士山 赵光宇 张良艳 罗德炎 王希良 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期648-651,共4页
目的观察马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2治疗性抗体对SARS-CoVBJ-01毒株的中和作用。方法采用细胞病变法(cytopathiceffect,CPE)、四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyltetrazoliumassay,MTT)测定马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2对SARS-CoVB... 目的观察马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2治疗性抗体对SARS-CoVBJ-01毒株的中和作用。方法采用细胞病变法(cytopathiceffect,CPE)、四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyltetrazoliumassay,MTT)测定马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2对SARS-CoVBJ-01株的中和作用。结果三批马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2对SARS-CoVBJ-01株有很好的中和作用,CPE和MTT法测得中和效价分别为1∶6400、1∶6400、1∶12800。结论研制的马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2对SARS-CoVBJ-01株有很好的中和作用,并且两种方法结果一致,为SARS的治疗提供了可靠的依据。 展开更多
关键词 SARS SARS-COV BJ-01株 马抗SARS-CoV免疫球蛋白f(ab’)2 中和抗体
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人单核细胞趋化因子受体5(CCR5)N-端膜外第一襻特异抗体F(ab′)_2的制备及鉴定
17
作者 张莉 郭葆玉 +1 位作者 苗红 张冉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期236-239,共4页
目的 :研究人 β趋化因子受体 5 (huCCR5 )NH2 端膜外第一襻特异抗体F(ab′) 2 的制备及鉴定方法。方法 :计算机分析定位超基因家族中同源顺序最低的结构域NH2 端膜外第一襻 ,PCR扩增出该基因片段后克隆到原核表达载体pGEX 1N中 ,经测... 目的 :研究人 β趋化因子受体 5 (huCCR5 )NH2 端膜外第一襻特异抗体F(ab′) 2 的制备及鉴定方法。方法 :计算机分析定位超基因家族中同源顺序最低的结构域NH2 端膜外第一襻 ,PCR扩增出该基因片段后克隆到原核表达载体pGEX 1N中 ,经测序鉴定正确后 ,在E coli中表达 ,纯化后免疫新西兰白兔。经A蛋白 SepharoseCL 4B亲和层析纯化后 ,用胃蛋白酶消化IgG ,经S 2 0 0凝胶过滤柱分离制备F(ab′) 2 。结果 :经还原和非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳和ELISA阻断实验分析证明得到抗huCCR5NH2 端的特异性抗体。结论 :这一简捷快速的特定功能结构域抗体F(ab′) 2 的制备方法 ,对研究该基因在体内的表达及生物学功能提供了重要的实验材料 ,同时也对超基因家族中亚家族特异抗体研制提供了一种研究思路和方法。 展开更多
关键词 人单核细胞趋化因子受体5 融合蛋白 抗体 制备
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疏水层析法和凝胶过滤法分离HI47抗CD20F(ab’)_2之比较
18
作者 许元生 熊冬生 +3 位作者 肖瑛 范冬梅 王金宏 杨纯正 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期142-144,147,共4页
目的 比较疏水层析和凝胶过滤两种方法分离纯化HI4 7抗CD2 0F(ab’) 2 的优缺点。方法 采用亲和层析柱protein G对发酵菌体裂解液进行粗纯化,分别采用疏水层析法和凝胶过滤法进行抗CD2 0F(ab’) 2 的分离纯化:疏水层析采用梯度洗脱,80... 目的 比较疏水层析和凝胶过滤两种方法分离纯化HI4 7抗CD2 0F(ab’) 2 的优缺点。方法 采用亲和层析柱protein G对发酵菌体裂解液进行粗纯化,分别采用疏水层析法和凝胶过滤法进行抗CD2 0F(ab’) 2 的分离纯化:疏水层析采用梯度洗脱,80 %B液洗脱2 0min ,10 0 %B液洗脱30min ;凝胶过滤以5 0mmol LPB缓冲液(pH 7.0 ) ,0 .8mL min洗脱4h。结果 粗纯化产物主要含F(ab’) 2 、Fab’,含量分别为19.6 %、5 9.7%。采用疏水层析法1h即可完成分离,F(ab’) 2 回收率为6 7% ,纯度为89.3% ;凝胶过滤4h完成分离,F(ab’) 2 回收率为6 5 % ,纯度为90 .5 %。FACS结果表明,两者结合Raji细胞的阳性率分别为99.93%和99.97%。结论 疏水层析分离纯化抗CD2 0F(ab’) 2 简单、快速、回收率高、纯度高,适用于大规模的工业化生产。 展开更多
关键词 疏水层析 凝胶过滤 f(ab’)2
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抗黄曲霉毒素单克隆抗体F(ab')2片段的制备与活性 被引量:2
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作者 雷佳文 李培武 +3 位作者 张奇 张兆威 丁小霞 张文 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期317-320,共4页
为剧毒靶标(黄曲霉毒素)绿色分析提供高效抗体,在已有抗黄曲霉毒素杂交瘤细胞株1C11的基础上,通过小鼠腹水法制备单克隆抗体,经胃蛋白酶酶解,制备F(ab')2片段,发现在优化条件37℃、pH4.1柠檬酸缓冲液中酶解4.5h,可高效制备F(ab'... 为剧毒靶标(黄曲霉毒素)绿色分析提供高效抗体,在已有抗黄曲霉毒素杂交瘤细胞株1C11的基础上,通过小鼠腹水法制备单克隆抗体,经胃蛋白酶酶解,制备F(ab')2片段,发现在优化条件37℃、pH4.1柠檬酸缓冲液中酶解4.5h,可高效制备F(ab')2片段。通过酶联免疫吸附法(ELISA)比较了抗体片段与原始抗体的识别活性,发现F(ab')2片段效价达到1∶320 000,是原抗体效价的1.5倍;灵敏度(IC50)为8.7pg/mL,保持了原抗体的抗原结合能力。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素 单克隆抗体 f(ab')2片段 活性
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CX_2(NO_2)_2(X=H,F,C1)分子旋转势和构型稳定性的ab initio研究
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作者 吴念慈 董南 +2 位作者 蔡国强 俞庆森 宗汉兴 《杭州大学学报(自然科学版)》 CSCD 1992年第2期172-178,共7页
本文用ab initio计算方法,采用STO-3G基组,对二硝基卤代甲烷CH_2(NO_2)_3(1),CF_2(NO_2)_2(2);CCl_2(NO_2)_2(3)等分子作了单点计算,研究其旋转势能.全构型优化研究了五个具有对称性构型的结构和稳定性,并作了理论分析和探讨.
关键词 分子旋转势 硝基卤代甲烷 稳定性
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