FBXW7通过抑制c-Myc/SOX2/SLC7A11促进头颈鳞癌细胞铁死亡

目的探究FBXW7对头颈鳞状细胞癌铁死亡的影响。方法体外培养头颈鳞癌细胞系HN4和HN6,构建FBXW7,SOX2过表达质粒,将质粒稳定转染细胞系培养,采用qRT-PCR和Western blot实验分别在转录水平和蛋白水平验证过表达转染效率。通过检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和活性氧(ROS)水平来验证过表达FBXW7后头颈鳞癌细胞的脂质过氧化水平。用铁死亡抑制剂Fer-1处理细胞后进一步检测细胞活力变化验证FBXW7对铁死亡的影响。通过Western blot检测转染过表达质粒后对细胞通路的影响。结果HN4和HN6细胞系在过表达FBXW7后表现出脂质过氧化水平增加,铁死亡抑制剂Fer-1能够有效逆转过表达FBXW7引起的细胞铁死亡。Western blot实验结果显示过表达FBXW7降低了c-Myc、SOX2和SLC7A11的表达。结论FBXW7通过降解c-Myc来调控SOX2-SLC7A11的表达,从而有效调控头颈鳞状细胞癌铁死亡。

miR-424靶向FBXW7对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨miR-424靶向F-box和WD重复结构域7(F-Box and WD repeat domain containing 7,FBXW7)轴对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞增殖、凋亡的影响。方法以实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测人正常骨髓浆细胞与MM细胞系MM.1S、RPMI 8226、U266中miR-424及FBXW7表达。体外培养U266细胞并随机分为对照组、miR-424抑制剂组(转染miR-424抑制剂)、FBXW7过表达组(转染FBXW7过表达质粒)、阴性对照组(转染miR-424阴性对照和空载质粒)、miR-424抑制剂+FBXW7敲低组(转染miR-424抑制剂和FBXW7siRNA)。以RT-qPCR实验检测miR-424及FBXW7表达;以Edu染色、TUNEL染色分别检测增殖、凋亡;以蛋白质印迹实验检测增殖相关蛋白(Cyclin D1、PCNA)、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)与FBXW7蛋白表达。在裸鼠右腋皮下接种转染后的各组U266细胞来构建多发性骨髓瘤移植瘤裸鼠模型,检测其移植瘤生长情况并比较其21 d移植瘤体积。以双荧光素酶报告实验验证miR-424对U266细胞FBXW7的靶向调控作用。结果与人正常骨髓浆细胞相比,MM.1S、RPMI 8226、U266细胞miR-424表达升高(P<0.05),FBXW7 mRNA表达降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-424抑制剂组、FBXW7过表达组细胞增殖率、Cyclin D1、PCNA及Bcl-2蛋白表达、21 d移植瘤体积降低(P<0.05),FBXW7mRNA表达、凋亡率、FBXW7和Bax蛋白表达升高(P<0.05);阴性对照组细胞各指标无显著差异(P>0.05)。与miR-424抑制剂组相比,miR-424抑制剂+FBXW7敲低组细胞增殖率、Cyclin D1、PCNA及Bcl-2蛋白表达、21 d移植瘤体积增大(P<0.05),FBXW7 mRNA表达、凋亡率、FBXW7和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。miR-424可靶向下调U266细胞FBXW7表达。结论下调miR-424可通过上调FBXW7表达而抑制MM细胞增殖及在裸鼠体内生长,促使其凋亡。

miRNA-93-5p通过调控FBXW7基因参与宫颈癌进展

目的:探究miRNA-93-5p是否可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌进展。方法:收集20例临床宫颈癌患者组织,分组为癌旁组织、宫颈癌组织,RT-qPCR检测宫颈组织中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,并检测人正常宫颈上皮细胞H8、宫颈癌细胞Caski、HeLa、C33A细胞miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平。选择宫颈癌细胞C33A,分为对照组(正常培养)、miRNA-93-5p抑制组(转染低表达miRNA-93-5p),FBXW7激活组(转染高表达FBXW7),转染48h后收集细胞,RT-qPCR检测各组细胞中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,Western blotting检侧C33A细胞中FBXW7蛋白水平,流式细胞术检测C33A细胞凋亡率,平板克隆检测C33A细胞克隆能力,划痕实验检测C33A细胞迁移能力,Transwell实验检测C33A细胞侵袭能力。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.001)。与H8细胞相比,Caski、HeLa、C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.05),后续实验中选择C33A宫颈癌细胞株进行研究。与对照组相比,miRNA-93-5p抑制组C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平显著降低(P<0.001),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.01),细胞迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01),FBXW7蛋白及mRNA水平显著增加(P<0.01)。与对照组相比,FBXW7激活组C33A细胞中FBXW7 mRNA水平显著增加(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.001),迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01)。结论:miRNA-93-5p可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌细胞的凋亡、增殖、迁移、侵袭水平。

FBXW7/MCM7信号轴介导肝癌细胞增殖的研究

目的 探讨FBXW7靶向调控MCM7表达对肝癌细胞增殖的影响。方法 采用免疫共沉淀法(CoIP)和免疫荧光染色法(IF),分析肝癌细胞系MHCC-97H中FBXW7与MCM7的互作关系;通过慢病毒感染过表达FBXW7和(或) MCM7,小干扰RNA技术下调FBXW7和(或) MCM7的表达;采用Western blot检测FBXW7对MCM7蛋白表达的影响,CCK-8实验检测肝癌细胞的增殖活性,EdU细胞增殖检测分析肝癌细胞的增殖能力,平板克隆实验分析肝癌细胞的集落形成能力。结果 在MHCC-97H细胞中,FBXW7与MCM7存在互作关系:过表达FBXW7抑制了MCM7的蛋白表达水平、并抑制了肝癌MHCC-97H细胞的增殖(P <0.05),在过表达FBXW7的基础上增加MCM7的表达后,细胞增殖能力提高(P <0.05);下调FBXW7后细胞中MCM7表达增加、细胞增殖能力增强(P <0.05),而下调FBXW7的同时干扰MCM7表达后,细胞增殖能力减弱(P <0.05)。结论 FBXW7能抑制肝癌细胞增殖,其机制与负向调节肝癌细胞中促癌蛋白MCM7的表达水平有关。

转甲状腺素蛋白介导STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路对高糖诱导的人视网膜内皮细胞新生血管生成的影响

目的分析转甲状腺素蛋白(TTR)介导信号转导和转录激活因子4(STAT4)/miR-223-3p/F-box WD重复蛋白7(FBXW7)通路对高糖(HG)诱导的人视网膜内皮细胞(hRECs)新生血管生成的影响。方法将hRECs分为对照组、HG组、HG+TTR组、HG+NC mimic组、HG+miR-223-3p mimic组和HG+TTR+miR-223-3p mimic组。生物信息学分析STAT4与miR-223-3p的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验进行验证。ELISA检测细胞中TTR水平,RT-PCR检测miR-223-3p水平,CCK-8法检测细胞增殖,血管生成实验分析血管生成率,Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)、TTR、STAT4和FBXW7蛋白表达。结果与对照组相比,HG组hRECs中TTR水平升高(P<0.05)。培养24 h时,与HG组相比,HG+TTR组细胞活力明显下降(P<0.05)。与HG组血管生成率(38.12±4.91)%相比,HG+TTR组hRECs血管生成率[(19.46±2.12)%]明显较小(P<0.05)。与HG+NC mimic组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达上调,细胞活力增加(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达下调,细胞活力下降(均为P<0.05)。与HG+NC mimic组血管生成率(40.11±4.10)%相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(61.52±6.25)%]增多(P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(42.24±4.33)%]减少(P<0.05),且与HG+NC mimic组比较差异无统计学意义(P>0.05)。生物信息学分析结果显示,STAT4与miR-223-3p启动子区域相互作用。与HG组相比,HG+TTR组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均升高,FBXW7和VEGF蛋白表达均降低(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、VEGF、STAT4和FBXW7蛋白表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论TTR可能通过调节STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路抑制HG诱导的hRECs的血管生成。

结肠癌组织microRNA-223、FBXW7的表达及与其临床病理参数和预后的关系

目的研究结肠癌组织中microRNA-223(miR-223)、FBXW7的表达及其与临床病理参数和预后的关系。方法收集2015年1月—2017年4月钦州市第一人民医院146例经手术切除的结肠癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织中mi R-223、FBXW7表达。通过在线网站预测miR-223与FBXW7存在结合位点。Pearson法分析两者表达的相关性及其与临床病理参数的关系。根据结肠癌组织中miR-223、FBXW7表达的均值分为miR-223高表达组与miR-223低表达组,FBXW7高表达组与FBXW7低表达组。用Kaplan-Meier法绘制不同mi R-223、FBXW7表达结肠癌患者的生存曲线。多因素Cox回归分析结肠癌患者预后的影响因素。结果结肠癌组织miR-223 m RNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05),FBXW7mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.05)。病理分期Ⅲ期、有淋巴结转移结肠癌组织mi R-223mRNA相对表达量高于Ⅰ、Ⅱ期和无淋巴结转移(P<0.05);病理分期Ⅲ期、有淋巴结转移结肠癌组织FBXW7mRNA相对表达量低于Ⅰ、Ⅱ期和无淋巴结转移(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度及有无侵犯浆膜结肠癌组织miR-223、FBXW7mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关系数分析显示,结肠癌组织miR-223表达与FBXW7表达呈负相关(r=-0.679,P<0.05)。术后随访8~60个月,随访期间死亡35例,总生存率为76.03%(111/146)。miR-223高表达组总生存率低于mi R-223低表达组(P<0.05)。FBXW7高表达组总生存率高于FBXW7低表达组(P<0.05)。单因素Cox回归分析结果显示,侵犯浆膜[HR=1.454(95%CI:1.086,1.947)]、病理分期Ⅲ期[HR=1.744(95%CI:1.070,2.840)]、淋巴结转移[HR=2.896(95%CI:1.114,7.531)]、miR-223≥4.76[HR=2.196(95%CI:1.085,4.445)]为结肠癌患者预后的危险因素(P<0.05),FBXW7≥1.23[HR=0.388(95%CI:0.172,0.875)]为保护因素(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,侵犯浆膜[HR=1.490(95%CI:1.154,1.924)]、病理分期Ⅲ期[HR=1.979(95%CI:1.132,3.460)]、淋巴结转移[HR=2.401(95%CI:1.015,5.677)]、miR-223≥4.76[HR=2.140(95%CI:1.063,4.309)]为结肠癌患者预后的危险因素(P<0.05),FBXW7≥1.23[HR=0.625(95%CI:0.475,0.823)]为保护因素(P<0.05)。结论结肠癌组织mi R-223高表达、FBXW7低表达与结肠癌患者病理分期、淋巴结转移及预后有关。

LncRNA VIM-AS1通过miR-497-5p/FBXW7轴调控高糖环境下视网膜内皮细胞的迁移和凋亡

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)VIM反义RNA 1(VIM-AS1)在糖尿病视网膜病变中的潜在分子机制。方法:使用q RT-PCR测定LncRNA VIM-AS1、miR-497-5p和FBXW7 mRNA的表达。使用蛋白质印迹检测FBXW7蛋白水平。分别使用CCK-8实验、伤口愈合实验和流式细胞技术分析评估细胞增殖、迁移和凋亡。通过双荧光素酶报告基因分析验证lncRNA VIM-AS1、miR-497-5p和FBXW7之间的结合关系。结果:在高糖处理的ARPE-19细胞中,LncRNAVIM-AS1和FBXW7的表达显著降低,而miR-497-5p的表达上调。LncRNA VIM-AS1可以通过竞争性结合miR-497-5p上调FBXW7的表达。LncRNA VIMAS1过表达能够促进HG处理的ARPE-19细胞的增殖和迁移,并抑制细胞凋亡,而miR-497-5p过表达消除了lncRNA VIM-AS1过表达对HG处理的ARPE-19细胞的影响。此外,FBXW7敲低消除了miR-497-5p对HG处理的ARPE-19细胞表型的抑制。结论:lncRNA VIM-AS1可通过调控miR-497-5p/FBXW7轴促进HG处理的ARPE-19细胞增殖和迁移,同时抑制细胞凋亡,提示lncRNA VIM-AS1作为治疗靶点潜力巨大。

FTO调控FBXW7的m6A甲基化修饰促进宫颈癌放化疗抵抗的机制研究

目的探讨肥胖相关蛋白(obesity-associated protein,FTO)和F框/WD-40域蛋白7(F-box and WD-40 domain protein 7,FBXW7)在宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)放化疗抵抗中的作用.方法实时荧光聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western印迹检测CSCC细胞中FTO和FBXW7表达.TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据分析FTO和FBXW7表达及相关性.在CSCC细胞中过表达FTO,免疫沉淀检测FBXW7的mRNA的m6A表达变化.四甲基偶氮唑盐比色法[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]检测FTO和FBXW7在CSCC细胞放化疗抵抗中的作用.结果与人正常宫颈上皮细胞(HUCEC)比较,FTO和FBXW7在CSCC细胞(SiHa,c-33a)中弱表达(P<0.05);FTO调控FBXW7的mRNA的m6A甲基化水平.过表达FTO的CSCC细胞在经过照射和顺铂处理后,细胞存活比例下降,放化疗抵抗减轻(P<0.05);而在此基础上抑制FBXW7,治疗后的细胞存活比例增加,诱导了CSCC放化疗抵抗(P<0.05).结论FTO可以去除FBXW7的m6A甲基化修饰,上调FBXW7的表达,抑制CSCC对放化疗的抵抗.FTO对CSCC恶性表型的影响是通过FBXW7实现的.

Fbxw7在肝癌中的表达及与肝癌细胞增殖相关性研究

目的:探讨Fbxw7在肝癌中的表达及其与肝癌细胞增殖能力的相关性。方法:收集40例肝细胞癌组织及对应的癌旁组织,运用RT-PCR、免疫组化技术检测Fbxw7在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况;real time RT-PCR技术检测正常肝细胞株LO2、肝癌细胞株Hep3B和SMMC-7721中Fbxw7 mRNA的表达水平;平板克隆形成实验与裸鼠皮下成瘤实验检测不同Fbxw7 mRNA表达水平的细胞株体内外增殖能力。结果:Fbxw7 mRNA及蛋白在肝癌组织中表达水平显著低于对应癌旁组织(P<0.05);Fbxw7蛋白低表达与高Edmonson分级和高TNM分期具有显著的相关性(P<0.05);正常肝细胞株LO2中Fbxw7 mRNA的表达水平显著高于肝癌细胞株Hep3B和SMMC-7721(P<0.05);Fbxw7表达较低的细胞株形成的克隆数较多,且裸鼠皮下成瘤体积较大,结果均具有统计学差异(P<0.05)。结论:Fbxw7低表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,并与肝癌细胞增殖能力相关。

Fbxw7通过降解c-Myc和Cyclin E诱导胃癌细胞凋亡和生长阻滞

目的:检测Fbxw7在胃癌组织中的表达并探讨其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:免疫组织化学染色技术检测Fbxw7在20例胃癌及对应癌旁组织中的表达;应用Fbxw7过表达质粒和Fbxw7 shRNA分别转染人胃癌细胞系MGC-803和AZ521,Western blot技术检测Fbxw7及其靶蛋白c-Myc和Cyclin E表达变化,通过MTT和流式细胞术检测Fbxw7对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。结果:Fbxw7在胃癌组织中的表达显著低于对应的癌旁组织(P<0.05);Fbxw7过表达的MGC-803细胞中c-Myc和Cyclin E蛋白表达明显减少,Fbxw7过表达诱导细胞凋亡和生长阻滞(P<0.05);敲低AZ521细胞中Fbxw7表达引起c-Myc和Cyclin E蛋白蓄积,导致细胞凋亡减少和增殖能力增强(P<0.05)。结论:Fbxw7在胃癌组织中低表达,其可能通过泛素化降解c-Myc和Cyclin E诱导胃癌细胞凋亡和生长阻滞,提示Fbxw7在胃癌中可能作为关键抑癌因子发挥功能。

FBXW7在成人T细胞性急性淋巴细胞白血病中的突变研究

背景:F-Box和WD40蛋白7(F-Box and WD40 domain protein 7,FBXW7)是E3泛素连接酶复合物的组份,控制NOTCH1,c-MYC和Cyclin E等多种蛋白的降解。目的:研究成人T细胞性急性淋巴细胞白血病(T-ALL)中FBXW7基因突变。方法:通过对54例成人T-ALL患者FBXW7外显子5-12进行扩增、克隆和测序,分析FBXW7突变的发生率、突变位点和类型、与NOTCH1突变的相关性及其临床预后意义。结果:本组成人T-ALL中FBXW7突变率11.1%,共发现4种点突变(R465H,R465L,R479P和R505C)和1个插入/缺失突变,FBXW7突变全部位于WD40结构域。研究还发现,FBXW7突变患者中83.3%同时存在NOTCH1突变,与FBXW7突变并存的NOTCH1突变均发生于HD结构域,包括点突变(L1574P,L1596H和L1600P),和缺失/插入突变。此外,研究还显示,FBXW7单独突变组患者的总生存时间比无突变组延长(P=0.049)。结论:FBXW7突变可能在NOTCH1介导的TALL发病机制有重要作用。

FBXW7与NOTCH1突变对成人急性T淋巴细胞白血病患者生存的影响

目的:探讨FBXW7、NOTCH1突变在成人T-ALL中的突变率以及突变特征,并研究其2个突变对成人T-ALL的临床特征和预后的影响。方法:通过对106成人T-ALL的FBXW7和NOTCH1基因进行基因测序,确定FBXW7和NOTCH1在106例患者中的突变率及突变特征,并对比突变组与非突变组的临床特征和预后情况。结果:在106例成人T-ALL中,FBXW7突变共有21例(19.8%),NOTCH1突变有66例(62.3%),FBXW7/NOTCH1双突变有18例(17.0%)。单独FBXW7或NOTCH1突变对预后的影响不大,但FBXW7/NOTCH1双突变组患者的2年累计总体生存率和无事件生存率皆低于无突变组,分别为(27.8%vs 70.3%)(P <0.01)、(16.7%vs 48.6%)(P <0.01),复发率高于非突变组(77.8%vs43.2%)(P=0.02)。结论:单独的FBXW7或NOTCH1突变尚不能作为预测预后的因素,但FBXW7/NOTCH1双突变可能提示预后不良。

脑胶质瘤中Fbxw7蛋白的表达

目的探究F框/WD-40域蛋白7(F-Box and WD40 domain protein 7,Fbxw7)与异柠檬酸脱氢酶1 ( isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)在胶质瘤组织中的表达情况。方法用免疫组织化学法,蛋白质印迹法观察86例胶质瘤患者的胶质瘤组织和30例头颅外伤去骨瓣内减压患者(对照组)脑组织中Fbxw7、IDH1的表达与分布,其中低级别胶质瘤48例(WHOⅠ-Ⅱ)、高级别胶质瘤(WHO Ⅲ-Ⅳ)38例,分析免疫组化、蛋白质印迹中Fbxw7、IDH1的表达的差异,分析Fbxw7的表达与可能的临床病理参数(年龄、性别、肿瘤直径、病理分级、头晕病史、癫痫情况、术前KPS评分、胶质瘤细胞成分、IDH1蛋白表达、肿瘤部位)之间的关系。结果胶质瘤组织中Fbxw7的表达明显高于对照组(t=-13.251, P<0.01),且Fbxw7在胶质瘤组织中随着病理级别的升高而表达降低(χ2=8.017, P<0.01);胶质瘤组织中IDH1的表达高于对照组(t=-10.838, P<0.01), IDH1在胶质瘤组织中随着病理级别的升高而升高(χ2=4.282, P=0.036);Fbxw7的表达与胶质瘤直径,病理级别、癫痫发作、IDH1表达有关(χ2=10.994、8.017、14.918、30.454,P<0.05)。结论 Fbxw7蛋白在不同级别胶质瘤组织表达的差异,可能为了解胶质瘤分子学机制提供新思路。

FBXW7调控非小细胞肺癌上皮间质转化的作用机制

目的:研究FBXW7在非小细胞肺癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)过程中发挥的作用。方法:收集100对非小细胞肺癌组织和对应的癌旁组织,利用免疫组化检测FBXW7在癌组织和癌旁组织中的表达。利用Western blot检测FBXW7在细胞系中的表达及FBXW7对EMT部分标志蛋白的影响。利用Transwell实验检测FBXW7对NSCLC细胞迁移能力的影响。免疫共沉淀实验和泛素化的Western blot验证FBXW7与Snail1的关系。结果:FBXW7在NSCLC组织中的表达明显低于对应癌旁组织中的表达。FBXW7在正常肺上皮细胞中的表达也明显高于4种非小细胞肺癌细胞系中的表达。FBXW7过表达显著抑制A549细胞的迁移能力。FBXW7过表达也明显抑制NSCLC细胞的EMT。机制研究发现,FBXW7可以直接结合并泛素化降解Snail1蛋白,并且Snail1部分逆转FBXW7对NSCLC细胞EMT标志蛋白的影响。结论:FBXW7对NSCLC细胞EMT的调控部分依赖于泛素化降解Snail1蛋白。

FBXW7基因点突变对结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移、侵袭和抗凋亡能力的影响

目的:探讨FBXW7基因点突变对结直肠癌细胞株HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:通过构建FBXW7基因野生型及突变型过表达的重组载体,并将其转染HCT-116细胞,应用Western blotting检测转染后FBXW7蛋白表达情况。CCK-8检测细胞增殖能力,平板细胞克隆形成实验(HTCA)检测肿瘤细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕及Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:转染野生型FBXW7基因的HCT-116细胞中FBXW7蛋白表达水平高于对照组(转染突变型FBXW7基因的HCT-116细胞)、阴性对照组(转染空质粒载体p EZ-M90的HCT-116细胞)及空白对照组(未进行任何特殊处理的HCT-116细胞)(均P<0.05)。转染野生型FBXW7的HCT-116细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力相较于其余各组均显著下降(均P<0.05),且细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:FBXW7基因点突变可使其蛋白表达水平降低,从而促进结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。

血脉通颗粒对基因FBXW7α及其下游Toll样受体炎症信号通路的影响

目的探讨血脉通颗粒干预基因FBXW7α及其下游Toll样受体4(TLR4)炎症信号通路对动脉粥样硬化(AS)的作用。方法 22只8周龄ApoE基因敲除小鼠给予高脂饲料喂养13周,确认AS斑块形成后随机分为血脉通组和对照组。血脉通组给予灌胃给予血脉通,1次/d,对照组给予等量生理盐水,6周后处死。RT-PCR检测小鼠主动脉弓部FBXW7α(F框/WD-40域蛋白7)、TLR4、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的相对表达;Western blot检测小鼠主动脉弓部FBXW7α、C/EBPδ、TLR4的表达情况;ELISA检测小鼠血浆IL-6和TNF-α的表达水平。体外应用脂多糖刺激RAW267.4细胞株,同时给予血脉通颗粒含药血清进行干预,应用RT-PCR检测细胞中TLR4信号通路相关因子的表达;应用ELISA法测定培养上清液中炎症因子IL-6和TNF-α的表达。结果无论是体内实验还是体外培养实验,结果均显示血脉通组FBXW7α表达水平明显高于对照组,而C/EBPδ、TLR4、NF-κB、IL-6和TNF-α表达水平均显著低于对照组(P<0.01);血脉通组小鼠血浆和培养上清液中炎症因子IL-6和TNF-α的水平亦显著低于对照组(P<0.01)。结论血脉通颗粒可增强FBXW7α的表达进而抑制TLR4信号通路中相关分子的表达和过度激活,减少炎症因子IL-6和TNF-α的分泌,可能是其抗AS的机制之一。

TINCR靶向microR-544a/FBXW7对人乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)组织分化诱导非蛋白编码RNA(TINCR)靶向microRNA-544a(miR-544a)/FBXW7对人乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人乳腺癌MCF7细胞株,设置空白对照组(不转入任何载体)、TINCR NC组(pcDNA3.1空载体)和TINCR上调组(pcDNA3.1-TINCR表达载体)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MCF7细胞lncRNA TINCR、miR-544a相对表达量;CCK-8法检测MCF7细胞增殖情况;流式细胞术检测MCF7细胞凋亡情况;Transwell法检测MCF7细胞侵袭情况;Western blotting检测MCF7细胞FBXW7、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白相对表达量。取TINCR上调组MCF7细胞,分为miR-544a NC组(转染miR-544a NC)和miR-544a上调组(转染miR-544a mimic),验证转染效率。结果空白对照组、TINCR NC组MCF7细胞lncRNA TINCR、miR-544a相对表达量、OD值、细胞凋亡率、穿膜细胞数及FBXW7、PCNA、Bax、MMP-2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组、TINCR NC组比较,TINCR上调组MCF7细胞lncRNA TINCR相对表达量、细胞凋亡率及FBXW7、Bax蛋白相对表达量升高(P<0.05),miR-544a相对表达量、OD值、穿膜细胞数及PCNA、MMP-2蛋白相对表达量降低(P<0.05)。TINCR上调组与miR-544a NC组MCF7细胞OD值、侵袭细胞数及miR-544a、FBXW7蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与TINCR上调组和miR-544a NC组比较,miR-544a上调组MCF7细胞OD值、侵袭细胞数及miR-544a相对表达量升高(P<0.05),FBXW7蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论lncRNA TINCR可能通过靶向miR-544a/FBXW7,抑制人乳腺癌细胞增殖、侵袭,并促进其凋亡。

抑癌基因FBXW7与恶性肿瘤相关研究进展

F框/WD-40域蛋白7(F-box and WD-40 domain protein 7,FBXW7)基因,又称FBW7或h CDC4,是泛素蛋白酶体降解途径的重要识别因子之一,参与靶向降解多种癌蛋白,进而调控恶性肿瘤的发生发展过程,目前已被认为是一种抑癌基因。本综述着重探索FBXW7基因在恶性肿瘤发生发展中的作用,旨在为肿瘤治疗提供新的切入点和诊疗思路。

FBXW7与KLF5在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:研究FBXW7与KLF5在乳腺癌病变组织中的表达程度及两个因子同临床相应病理学特征之间的联系以及两者内在联系,并阐明其在人类乳腺癌形成过程中的作用机制。方法:选取经佳木斯大学附属第一医院确诊为乳腺癌并行手术治疗的患者病理蜡块,且再次由资深病理科医生证实,通过采用Elivision TM Plus/HRP免疫组化方法,分别检测45例乳腺癌组织标本中FBXW7和KLF5两个与癌症相关基因的表达状况,同时在应用软件SPSS17.0的帮助下,采用传统的统计学计算方法分析上述两因子同临床相应的病理学特点间的关系,最后探讨FBXW7和KLF5是否存在相关的临床指导意义。结果:乳腺癌中KLF5阳性表达率为82.22%,高于正常乳腺的17.78%;乳腺癌中FBXW7蛋白阳性表达为53.33%,低于正常乳腺中的100.00%;二组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:KLF5在乳腺癌中表达明显增强,FBXW7在乳腺癌中表达明显降低,提示在乳腺癌发生中KLF5和FBXW7发挥一定作用,对KLF5、FBXW7的检测可作为重要生物学指标。

Fbxw7在急性T淋巴细胞白血病中的表达及其对细胞生长的抑制作用

目的:观察F框/WD40域蛋白7(Fbxw7)在急性T淋巴细胞白血病中的表达,探讨其对细胞生长的影响及其机制。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测62例急性T淋巴细胞白血病患者中的Fbxw7 mRNA表达情况,将携带Fbxw7的过表达慢病毒载体转至白血病Jurkat细胞后,采用RT-PCR和Western blot检测其转染效果,MTT法检测Jurkat细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡情况,Western blot检测c-Myc蛋白和周期蛋白E(Cyclin E)的表达。结果:急性T淋巴细胞白血病复发组患者和初发组患者中Fbxw7 mRNA表达水平较正常健康人明显降低(P<0.05);病毒转染后,Fbxw7组(转染携带Fbxw7过表达慢病毒载体)中Fbxw7 mRNA和蛋白质的相对表达水平较对照组(未转染的细胞)、阴性组(转染对照慢病毒载体)明显升高(P<0.05);转染24 h后,细胞增殖受影响不明显(P>0.05),而转染48 h和72 h后,细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);转染48 h后,与对照组相比,Fbxw7组Jurka细胞中G0/G1期细胞所占比例和细胞凋亡率明显升高,S期和G2/M期细胞所占百分比、c-Myc和Cyclin E蛋白的相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Fbxw7在急性T淋巴细胞白血病中低表达,上调其表达可抑制白血病Jurkat细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调c-Myc和Cyclin E蛋白表达有关。