长链非编码RNA F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA 1调节微小RNA-342-3p/自噬相关蛋白10轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和奥沙利铂耐药性的影响实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA 1(FBXL19-AS1)调节微小RNA(miR)-342-3p/自噬相关蛋白10(ATG10)轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和奥沙利铂耐药性的影响。方法:实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织及正常肠上皮细胞(NCM460)、人CRC细胞系RKO、HCT-8细胞及HCT-8/L-OHP细胞中FBXL19-AS1、miR-342-3p、ATG10 mRNA表达水平。将HCT-8细胞分为shFBXL19-AS1组、shRNA组、shFBXL19-AS1+inhibitor NC组和shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组,并以未转染的细胞为空白组。将HCT-8/L-OHP细胞分为L-OHP+shFBXL19-AS1组、L-OHP+shRNA组、L-OHP+shFBXL19-AS1+inhibitor NC组和L-OHP+shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组,并以未转染的细胞为空白组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测HCT-8、HCT-8/L-OHP细胞增殖及其耐药性。划痕实验检测细胞迁移能力。免疫印迹法(Western blot)检测P-糖蛋白(P-gp)、增殖蛋白(Ki-67)、迁移侵袭增强子因子1(MIEN1)、ATG10蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验分析miR-342-3p与FBXL19-AS1、ATG10靶向关系。结果:FBXL19-AS1、ATG10 mRNA表达在HCT-8/L-OHP细胞及CRC组织中增加,miR-342-3p表达则降低(均P<0.05)。shFBXL19-AS1组细胞增殖、细胞迁移、FBXL19-AS1和ATG10 mRNA表达以及Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较shRNA组和空白组降低,miR-342-3p表达则增加(均P<0.05)。shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组细胞增殖、细胞迁移、ATG10 mRNA以及Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较shFBXL19-AS1+inhibitor NC组增加,miR-342-3p表达则降低(均P<0.05)。L-OHP+shFBXL19-AS1组细胞增殖、细胞迁移、细胞耐药性及P-gp、Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较L-OHP+shRNA组和空白组降低(均P<0.05)。L-OHP+shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组细胞增殖、细胞迁移、细胞耐药性及P-gp、Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较L-OHP+shFBXL19-AS1+inhibitor NC组增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA FBXL19-AS1通过上调miR-342-3p/ATG10轴抑制CRC细胞的增殖、迁移,改善奥沙利铂耐药性。

长链非编码RNA FBXL19-AS1通过下调miR-223表达增加宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力

目的明确F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA 1(F-box and leucine rich repeat protein 19 antisense RNA 1,FBXL19-AS1)与微小RNA-223(microRNA-223,miR-223)对宫颈癌生物学行为的影响,并探讨FBXL19-AS1是否对miR-223具有调节作用。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应检测FBXL19-AS1与miR-223在44例宫颈癌样本与细胞系的表达。利用荧光原位杂交技术检测FBXL19-AS1的定位。利用寡核苷酸片段干扰FBXL19-AS1与过表达miR-223。应用CCK-8法检测细胞增殖能力。细胞划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。蛋白质印迹法检测各蛋白的表达量。应用荧光素酶报告基因实验检测FBXL19-AS1对miR-223的调节作用。结果与癌旁组织及End1/E6E7细胞相比,癌组织及HeLa细胞FBXL19-AS1表达量上调而miR-223表达量下调,二者呈负相关(均P<0.05)。FBXL19-AS1定位于细胞质。FBXL19-AS1表达与肿瘤大小、淋巴结转移、宫颈侵袭深度以及FIGO分期相关(均P<0.05)。干扰FBXL19-AS1显著降低HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力。过表达miR-223显著降低HeLa细胞增殖,迁移和侵袭能力。FBXL19-AS1通过海绵吸附方式下调miR-223表达。干扰miR-223部分逆转干扰FBXL19-AS1对HeLa细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。结论FBXL19-AS1通过下调miR-223表达增加宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

长非编码RNA FBXL19-AS1对急性髓细胞白血病THP-1细胞增殖与侵袭的影响

目的探究长非编码RNA F-box和富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA1 (lnc RNA FBXL19-AS1)在急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)THP-1细胞中的作用和机制。方法将THP-1细胞随机分为pc-NC组、pc-FBXL19-AS1组以及pc-FBXL19-AS1+miR-339-3p mimic组。pc-NC组转染pc DNA3.0-NC,pc-FBXL19-AS1组转染FBXL19-AS1过表达质粒,pc-FBXL19-AS1+miR-339-3p mimic组共转染FBXL19-AS1过表达质粒以及miR-339-3p模拟物。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测THP-1细胞增殖能力,以Transwell实验检测THP-1细胞侵袭能力,以蛋白质印迹法检测SKI原癌基因(SKI)表达。结果 72 h时,pc-NC组和pc-FBXL19-AS1组光密度分别为0.60±0.05和0.78±0.07;pc-NC组和pc-FBXL19-AS1组的侵袭细胞数分别为75.00±6.38和120.67±9.18;pc-NC组、pc-FBXL19-AS1组和pc-FBXL19-AS1+miR-339-3p mimic组中SKI蛋白表达水平分别为1.03±0.10,2.08±0.21和1.68±0.11;以上数据,pc-NC组和pc-FBXL19-AS1组相比,pc-FBXL19-AS1+miR-339-3p mimic组与pc-FBXL19-AS1组相比,差异均有统计学意义(均P <0.05)。此外,双荧光素酶报告基因实验表明FBXL19-AS1可直接靶向miR-339-3p。结论 FBXL19-AS1可促进THP-1细胞的增殖与侵袭,FBXL19-AS1可靶向miR-339-3p上调SKI的表达。