基于FBXO31的慢性乙型肝炎肝纤维化无创诊断模型的建立及评价

目的探讨基于F-box蛋白31(FBXO31)构建的慢性乙型肝炎肝纤维化无创诊断模型的临床应用价值。方法前瞻性选取2019年3月至2021年1月在常州市第三人民医院就诊的164例慢性乙型肝炎患者作为研究对象。采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血中单个核细胞,采用蛋白质印迹法检测单个核细胞中FBXO31的表达水平。采用logistic回归分析构建慢性乙型肝炎肝纤维化诊断模型,采用ROC曲线和决策树分析法评价该模型的诊断效能。结果根据肝纤维化病理分期标准,164例肝纤维化患者中S0期30例,S1期28例,S2期36例,S3期32例,S4期38例。S0期、S1期、S2期、S3期和S4期患者的FBXO31相对表达量分别为0.22±0.07、0.34±0.07、0.43±0.09、0.52±0.10和0.72±0.14,组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。Spearman秩相关分析显示,FBXO31的相对表达量与肝纤维化病理分期呈正相关(r_(s)=0.877,P<0.05)。由FBXO31、ALT、AST和血小板(PLT)构成的模型X、模型Y和模型Z诊断慢性乙型肝炎肝纤维化病理分期的ROC曲线下面积均大于AST/PLT比值指数(APRI)和肝纤维化指数(FIB4),差异均有统计学意义(P均<0.05)。决策树分析结果显示,模型X、模型Y和模型Z对于慢性乙型肝炎肝纤维化病理分期的诊断均具有临床应用价值。结论外周血单个核细胞中FBX031的表达水平越高,提示慢性乙型肝炎患者的肝纤维化程度越严重。基于FBXO31构建的慢性乙型肝炎肝纤维化无创诊断模型对于肝纤维化病理分期≥S2期的诊断有较高价值,但在肝纤维化病理分期≥S3期和S4期的诊断中仍存在一定不足。

miR-876-5p通过靶向FBXO31促进卵巢癌细胞增殖和侵袭的机制

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-876-5p通过靶向F-box蛋白31(FBXO31)促进卵巢癌细胞增殖和侵袭的机制。方法对TCGA数据库中,miR-876-5p和FBXO31在卵巢癌患者中的表达特点和与预后的关系进行分析。通过双荧光素酶报告验证miR-876-5p靶向FBXO31。将卵巢癌细胞系SKOV-3分为4组:对照组、mimic组、mimic+FBXO31组和FBXO31组。通过质粒转染技术过表达miR-876-5p和(或)FBXO31。qPCR和Western blot检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、Transwell实验检测各组的细胞生长和侵袭能力。通过荷瘤裸鼠实验在体内验证miR-876-5p和FBXO31对肿瘤生长的影响。结果在TCGA数据库中,miR-876-5p高表达的患者的生存率显著低于miR-876-5p低表达患者(P<0.05)。卵巢癌患者FBXO31水平显著降低,卵巢癌分期的越高FBXO31水平越低,并且FBXO31高表达卵巢癌患者的生存率显著高于FBXO31低表达(P<0.05)。miR-876-5p直接靶向FBXO31。过表达miR-876-5p抑制FBXO31 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05),过表达FBXO31显著逆转miR-876-5p对FBXO31的抑制作用(P<0.05)。Mimic组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于对照组(P<0.05),FBXO31组的细胞活力和细胞迁移能力显著低于对照组(P<0.05),并且mimic+FBXO31组的细胞活力和细胞迁移能力显著低于mimic组(P<0.05)。miR-876-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤体积和质量均显著高于对照组(P<0.05),miR-876-5p+FBXO31组肿瘤体积和质量显著低于miR-876-5p组(P<0.05)。结论miR-876-5p具有促进卵巢癌进展的作用,而FBXO31可能抑制卵巢癌进展。miR-876-5p直接靶向FBXO31,并且miR-876-5p过表达可通过抑制FBXO31促进卵巢癌细胞生长、侵袭,起到抑制卵巢癌生长的作用。

基于miR-29c/FBXO31轴研究铁线莲总皂苷对食管癌细胞化疗耐药的作用机制

目的:探讨铁线莲总皂苷对食管癌(EC)Eca109/cDDP细胞化疗耐药性的影响及可能作用机制。方法:采用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡水平;通过Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因试验验证靶向关系;RT-qPCR检测miR-29c及Fbox31 mRNA相对表达;Western blot技术检测FBXO31、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)、p-P38MAPK、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及Cleaved Caspase-3(C-caspase-3)蛋白相对表达。结果:Eca109/cDDP细胞存活率随铁线莲总皂苷作用浓度增大而明显降低(P<0.05);10μg/mL的铁线莲总皂苷联合0.3μg/mL的顺铂可明显提高Eca109/cDDP细胞凋亡率,明显抑制细胞迁移及侵袭(P<0.05);抑制miR-29c表达后,细胞存活率、Fbox31 mRNA及蛋白相对表达上调,细胞凋亡率明显降低,miR-29c相对表达和p-P38MAPK、C-caspase-3蛋白相对表达下调,细胞迁移及侵袭数明显增加(P<0.05);双荧光素酶基因试验检测结果显示Fbxo31为miR-29c的靶基因。结论:铁线莲总皂苷可提高EC细胞的化疗耐药抗性,降低癌细胞存活率,促进凋亡并抑制迁移及侵袭,其作用机制可能与上调miR-29c表达,抑制FBXO31表达进而激活促癌细胞凋亡程序有关。