F10下调通过细胞色素C促进KLE细胞凋亡

目的建立F10基因表达稳定下调的KLE细胞系,探讨F10基因沉默对KLE细胞凋亡的影响及机制。方法将两条合成的寡核苷酸退火后形成的双链DNA连接到逆转录病毒载体pRetroQ上构建表达质粒pRetroQ-iF10,脂质体转染KLE细胞,嘌呤霉素筛选,获得单细胞克隆;荧光定量RT-PCR鉴定阳性克隆。流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量RT-PCR和western blot检测细胞色素C和Bcl-2表达。结果两个抗性克隆呈现F10 mRNA表达显著下调。F10基因沉默的KLE细胞克隆凋亡率较对照组增加近9倍,细胞色素C mRNA表达上调、胞浆细胞色素C表达增加,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调。结论成功构建F10基因表达稳定下调的KLE细胞系,F10基因表达下调导致细胞凋亡;细胞色素C的释放可能是F10沉默诱导KLE细胞凋亡的途径之一。