葡萄胎病理相关新基因F10重组蛋白的表达及鉴定

目的 F10是从葡萄胎组织中克隆的新基因,前期研究显示F10基因可能与滋养细胞侵袭性有关,为进一步研究F10基因功能,拟构建原核质粒表达葡萄胎相关新基因F10重组蛋白,分离纯化并鉴定。方法用逆转录聚合酶链反应法从人组织中扩增F10基因编码序列,将其克隆到pET28a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)内进行诱导表达F10基因重组蛋白,用层析柱予以纯化并采用SDS-PAGE电泳鉴定。结果成功构建了pET28a/F10原核表达质粒,并获得高纯度的重组F10蛋白。结论表达及纯化的重组F10蛋白纯度高,适合作为制备单克隆抗体的抗原,可用于F10功能的进一步研究。

葡萄胎病理相关基因F10编码蛋白单克隆抗体的制备与应用

目的构建原核质粒表达葡萄胎相关新基因F10重组蛋白,分离纯化制备其单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法用逆转录聚合酶链反应法从成人组织中扩增F10编码序列,将其克隆到p ET28a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)内进行诱导表达F10基因重组蛋白。以纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体。ELISA法检测杂交瘤细胞分泌F10单克隆抗体的效价和类型,免疫组织化学染色检测F10蛋白在葡萄胎及胎盘组织中的表达,鉴定制备F10单克隆抗体的特异性。结果成功构建了p ET28a/F10原核表达质粒并获得高纯度的重组F10蛋白。筛选出3株能稳定分泌抗F10蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞系,其效价比高达1∶7.2×105,免疫球蛋白类型均为Ig G1类。免疫组织化学染色显示该抗体能特异结合葡萄胎及胎盘绒毛组织中的F10蛋白,且葡萄胎组织中F10蛋白的表达显著高于正常胎盘组织。结论表达及纯化的重组F10蛋白纯度高,免疫原性强。以此为抗原制备的抗F10蛋白的单克隆抗体效价高、特异性强,可用于F10功能的进一步研究。