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致猪水肿病大肠杆菌鄂E株菌毛F18基因FedF亚基的克隆、表达及其生物学特性
被引量:
2
1
作者
刘国平
郭爱珍
+3 位作者
吴斌
钱平
刘正飞
陈焕春
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期479-484,共6页
以致猪水肿病大肠杆菌鄂E株为模板,通过PCR的方法扩增大肠杆菌菌毛F18主要亚基FedF的全长及去信号肽亚基因FedFs,扩增片段分别为1000、900 bp。将纯化的扩增产物克隆到pMD18-T中,通过酶切鉴定和序列分析表明,含SacⅠ及HindⅢ酶切位点的...
以致猪水肿病大肠杆菌鄂E株为模板,通过PCR的方法扩增大肠杆菌菌毛F18主要亚基FedF的全长及去信号肽亚基因FedFs,扩增片段分别为1000、900 bp。将纯化的扩增产物克隆到pMD18-T中,通过酶切鉴定和序列分析表明,含SacⅠ及HindⅢ酶切位点的基因全长为967 bp,鄂E株FedF基因编码区全长903 bp,编码301个氨基酸,碱基序列同标准株107/86的同源性为100%。与菌毛AF/R1相比,编码的蛋白质没有同源性。利用pGEX-KG分别构建表达载体,SDS-PAGE检测表明FedFc/pGEX-KG无表达带,FedFs/pGEX-KG则有约58 000的特异性表达带;West-ern blotting检测表明重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白GST-FedF免疫新西兰兔所制备的抗血清,能抑制Ee株与刷状缘细胞的粘附。利用表达的蛋白建立了F18的ELISA检测方法,并检测790份临床送检血样,其中536份呈阳性,血清学阳性率为67.8%。结果表明,FedF是猪大肠杆菌病新型疫苗及F18+E.coli感染鉴别诊断的良好候选抗原,通过本试验建立的ELISA方法揭示国内的F18+E.coli感染严重,血清学阳性率高达67.8%。
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关键词
大肠杆菌
f
ed
f
f18基因
克隆
原核表达
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职称材料
ETEC F18R基因多态性与仔猪腹泻的相关分析
被引量:
1
2
作者
王玲玉
贺长青
+4 位作者
蒋隽
柴玉兰
许栋
何俊
马海明
《中国猪业》
2015年第5期47-50,共4页
本试验采用PCR-RFLP方法,以杜洛克(26头)、长白猪(34头)、大白猪(55头)为研究对象,对肠毒素大肠杆菌受体(ETEC F18R)基因进行多态性检测,计算其基因型频率、基因频率及其与三个外来纯种仔猪腹泻的相关分析。结果表明,杜洛克存在AA,AG和G...
本试验采用PCR-RFLP方法,以杜洛克(26头)、长白猪(34头)、大白猪(55头)为研究对象,对肠毒素大肠杆菌受体(ETEC F18R)基因进行多态性检测,计算其基因型频率、基因频率及其与三个外来纯种仔猪腹泻的相关分析。结果表明,杜洛克存在AA,AG和GG三种基因型,抗性基因型AA基因型的频率为0.1538,易感基因型AG、GG基因型的频率分别为0.4231.和0.4231。大白猪和长白猪存在两种基因型(AG,GG),其中GG基因型的分布频率分别为0.9706和0.8727。卡方检验表明三个外来品种均处于Hardy-Weinberg平衡状态,长白猪和大白猪ETEC F18R基因型间的腹泻特性差异不显著(P>0.05),而杜洛克基因型间的腹泻特性差异显著(P<0.05)。
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关键词
仔猪
ETEC
f
18
R
基因
多态性
腹泻
下载PDF
职称材料
不同猪种E .coli F1 8受体基因的多态性
被引量:
39
3
作者
施启顺
黄生强
+2 位作者
柳小春
贺长青
蒋隽
《Acta Genetica Sinica》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期221-224,共4页
采用PCR RFLP技术检测了大约克、长白、杜洛克、宁乡、沙子岭和大围子 6个品种共 86 7头猪的E .coliF18受体 (ECF18R)基因座的遗传变异。结果表明 :Hin6Ⅰ RFLP位点上 ,大约克、长白、杜洛克 3个外来猪种均存在多态 ,且以敏感型 (GG型...
采用PCR RFLP技术检测了大约克、长白、杜洛克、宁乡、沙子岭和大围子 6个品种共 86 7头猪的E .coliF18受体 (ECF18R)基因座的遗传变异。结果表明 :Hin6Ⅰ RFLP位点上 ,大约克、长白、杜洛克 3个外来猪种均存在多态 ,且以敏感型 (GG型和AG型 )居多 ,平均占 94%,3个外来猪种的G等位基因频率平均为 0 76 ,AA抗性型个体占少数 ,平均为 6 %,猪群中M30 7处G→A的突变频率并不高。宁乡、沙子岭和大围子 3个本地猪种的所有检测样品都表现为GG型 ,在该位点上均不存在G→A的突变。各猪种ECF18受体基因座的PCR RFLP基因型分布 χ2 检验结果表明 ,每个外来猪种ECF18受体基因座的PCR RFLP基因型分布与 3个本地猪种的相比均差异显著或极显著 ,3个本地猪种间的ECF18受体基因座的PCR RFLP基因型分布完全一致。外来猪种间只有长白与杜洛克各基因型的分布差异显著 ,其余均不显著。
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关键词
猪
品种
f
18
受体
基因
PCR—R
f
LP
多态性
肠毒素大肠杆菌病
抗性
基因
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职称材料
题名
致猪水肿病大肠杆菌鄂E株菌毛F18基因FedF亚基的克隆、表达及其生物学特性
被引量:
2
1
作者
刘国平
郭爱珍
吴斌
钱平
刘正飞
陈焕春
机构
华中农业大学农业微生物学国家重点实验室
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期479-484,共6页
基金
湖北省重点科技攻关资助项目(2001AA201B020)
文摘
以致猪水肿病大肠杆菌鄂E株为模板,通过PCR的方法扩增大肠杆菌菌毛F18主要亚基FedF的全长及去信号肽亚基因FedFs,扩增片段分别为1000、900 bp。将纯化的扩增产物克隆到pMD18-T中,通过酶切鉴定和序列分析表明,含SacⅠ及HindⅢ酶切位点的基因全长为967 bp,鄂E株FedF基因编码区全长903 bp,编码301个氨基酸,碱基序列同标准株107/86的同源性为100%。与菌毛AF/R1相比,编码的蛋白质没有同源性。利用pGEX-KG分别构建表达载体,SDS-PAGE检测表明FedFc/pGEX-KG无表达带,FedFs/pGEX-KG则有约58 000的特异性表达带;West-ern blotting检测表明重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白GST-FedF免疫新西兰兔所制备的抗血清,能抑制Ee株与刷状缘细胞的粘附。利用表达的蛋白建立了F18的ELISA检测方法,并检测790份临床送检血样,其中536份呈阳性,血清学阳性率为67.8%。结果表明,FedF是猪大肠杆菌病新型疫苗及F18+E.coli感染鉴别诊断的良好候选抗原,通过本试验建立的ELISA方法揭示国内的F18+E.coli感染严重,血清学阳性率高达67.8%。
关键词
大肠杆菌
f
ed
f
f18基因
克隆
原核表达
Keywords
E. coli
f
ed
f
gene
f
18
gene
cloning
prokaryotic expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q852.61 [生物学]
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职称材料
题名
ETEC F18R基因多态性与仔猪腹泻的相关分析
被引量:
1
2
作者
王玲玉
贺长青
蒋隽
柴玉兰
许栋
何俊
马海明
机构
湖南农业大学
出处
《中国猪业》
2015年第5期47-50,共4页
基金
863项目(2011AA100304)
湖南省战略性新兴产业重大科技攻关项目(2011GK4061)
文摘
本试验采用PCR-RFLP方法,以杜洛克(26头)、长白猪(34头)、大白猪(55头)为研究对象,对肠毒素大肠杆菌受体(ETEC F18R)基因进行多态性检测,计算其基因型频率、基因频率及其与三个外来纯种仔猪腹泻的相关分析。结果表明,杜洛克存在AA,AG和GG三种基因型,抗性基因型AA基因型的频率为0.1538,易感基因型AG、GG基因型的频率分别为0.4231.和0.4231。大白猪和长白猪存在两种基因型(AG,GG),其中GG基因型的分布频率分别为0.9706和0.8727。卡方检验表明三个外来品种均处于Hardy-Weinberg平衡状态,长白猪和大白猪ETEC F18R基因型间的腹泻特性差异不显著(P>0.05),而杜洛克基因型间的腹泻特性差异显著(P<0.05)。
关键词
仔猪
ETEC
f
18
R
基因
多态性
腹泻
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
不同猪种E .coli F1 8受体基因的多态性
被引量:
39
3
作者
施启顺
黄生强
柳小春
贺长青
蒋隽
机构
湖南农业大学动物科学技术学院
出处
《Acta Genetica Sinica》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期221-224,共4页
基金
国家自然科学基金项目资助 (编号 :30 0 70 5 5 3)~~
文摘
采用PCR RFLP技术检测了大约克、长白、杜洛克、宁乡、沙子岭和大围子 6个品种共 86 7头猪的E .coliF18受体 (ECF18R)基因座的遗传变异。结果表明 :Hin6Ⅰ RFLP位点上 ,大约克、长白、杜洛克 3个外来猪种均存在多态 ,且以敏感型 (GG型和AG型 )居多 ,平均占 94%,3个外来猪种的G等位基因频率平均为 0 76 ,AA抗性型个体占少数 ,平均为 6 %,猪群中M30 7处G→A的突变频率并不高。宁乡、沙子岭和大围子 3个本地猪种的所有检测样品都表现为GG型 ,在该位点上均不存在G→A的突变。各猪种ECF18受体基因座的PCR RFLP基因型分布 χ2 检验结果表明 ,每个外来猪种ECF18受体基因座的PCR RFLP基因型分布与 3个本地猪种的相比均差异显著或极显著 ,3个本地猪种间的ECF18受体基因座的PCR RFLP基因型分布完全一致。外来猪种间只有长白与杜洛克各基因型的分布差异显著 ,其余均不显著。
关键词
猪
品种
f
18
受体
基因
PCR—R
f
LP
多态性
肠毒素大肠杆菌病
抗性
基因
Keywords
pig
E.coli
f
18
receptor gene
PCR-R
f
LP
polymorphism
分类号
S828.2 [农业科学—畜牧学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
致猪水肿病大肠杆菌鄂E株菌毛F18基因FedF亚基的克隆、表达及其生物学特性
刘国平
郭爱珍
吴斌
钱平
刘正飞
陈焕春
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
2
下载PDF
职称材料
2
ETEC F18R基因多态性与仔猪腹泻的相关分析
王玲玉
贺长青
蒋隽
柴玉兰
许栋
何俊
马海明
《中国猪业》
2015
1
下载PDF
职称材料
3
不同猪种E .coli F1 8受体基因的多态性
施启顺
黄生强
柳小春
贺长青
蒋隽
《Acta Genetica Sinica》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2003
39
下载PDF
职称材料
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