尾静脉注射BA/F3-JAK2V617F细胞构建BALB/c小鼠真性红细胞增多症模型

目的应用BA/F3-JAK2V617F细胞构建BALB/c小鼠真性红细胞增多症模型。方法40只雌性BALB/c小鼠,随机分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、芦可替尼组。接种前各组小鼠均接受1.0 Gay的全身辐照,24 h内分别接种不同浓度的BA/F3-JAK2V617F、BA/F3-Blank细胞,并给予相应药物28 d。末次给药后,采血、取材进行血液学检测、骨髓涂片、组织病理学检测。结果与空白对照组比较,中、高剂量组外周血红细胞数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比容(HCT)升高,骨髓中粒细胞系、粒红比减少,红细胞系增加,体重明显下降,脾脏重量、脾指数明显增大;低剂量组HGB、脾指数显著升高,粒细胞系、粒红比减少。与高剂量组比较,芦可替尼组RBC、HGB、HCT、骨髓中红细胞系、脾脏重量、脾指数均明显降低,体重、骨髓中粒细胞系、粒红比均明显升高。空白对照组病理检测无明显变化;低剂量组胸骨骨髓造血活跃;中剂量组脾脏髓外造血,胸骨、股骨造血活跃;高剂量组脾脏髓外造血,腰椎、股骨、胸骨骨髓造血活跃;芦可替尼组胸骨骨髓造血活跃。结论BALB/c小鼠经1.0 Gay剂量的全身辐照后,尾静脉注射BA/F3-JAK2V617F 1.0×106~1.6×10^(6)个细胞可成功构建真性红细胞增多症动物模型,符合真性红细胞增多症的生物学特点。

小麦与高冰草体细胞杂种F_3～F_5代的耐盐性研究

小麦与耐盐牧草高冰草的不对称体细胞杂交 ,获得表型象普通小麦的体细胞杂种后代并用于小麦耐盐实验 ,用不同浓度的NaCl处理小麦、高冰草、小麦和高冰草体细胞杂种F4 代株系Ⅰ - 1- 6、Ⅱ - 1- 3、Ⅱ - 1- 6 ,5天后观察其形态 ,计算耐盐指数 ,测定生长量 (鲜重、干重及相对含水量 )。结果表明 :亲本济南177耐盐性最差 ;杂种F4 代Ⅰ - 1- 6、Ⅱ - 1- 3、Ⅱ - 1- 6的耐盐性介于双亲之间 ,在山东省不同地区 0 3%～0 6 %的盐地中 ,对F3～F5代部分杂种株系进行栽培试验 ,结果表明 ,在 0 3 %～ 0 4%的盐地中其千粒重 40～5 5g ,6 6 6 7m2 产量为 35 0～ 45 0kg ;在 0 5 %～ 0 6 %的盐地中 ,千粒重 35～ 45g ,6 6 6 7m2 产量为 2 6 0～ 32 0kg。

Lupalbigenin抑制Ba/F3 EGFR WT野生型肺癌细胞增殖作用机制

在细胞水平上探讨Lupalbigenin(LG)抑制Ba/F3 EGFR WT肺癌细胞增殖的机制。使用电转染构建细胞系,利用MTS、Western blot、流式细胞术等方法构建稳定表达的EGFR(野生型)细胞Ba/F3 EGFR WT为材料,检测不同浓度化合物对细胞相关检测指标的影响。结果表明:以Ba/F3为模式细胞构建稳定表达EGFR的Ba/F3 EGFR WT肺癌细胞;在Ba/F3 EGFR WT细胞中,LG能够抑制Ba/F3 EGFR WT细胞增殖;下调EGFR信号通路中P-EGFR、P-Erk、P-Gsk-3β和P-S6蛋白水平;增加细胞总凋亡率;上调细胞中Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-6、Cleaved-Caspase-7、Bax、Cytochrome-C蛋白水平,下调Bcl-2蛋白水平;上调细胞中P27蛋白水平,下调CDK6、Cyclin A2、Cyclin D1蛋白水平。LG是一种天然小分子化合物,能够有效抑制野生型非小细胞肺癌细胞Ba/F3 EGFR WT增殖。有望为野生型EGFR肺癌提供药物开发的新思路,并为天然化合物在治疗人类疾病中提供理论基础。

Tpr-Met转化的Ba/F3稳定株的构建

目的:建立一种可用于高通量筛选c-Met抑制剂的细胞模型。方法:采用电转染将Tpr-Met表达载体导入Ba/F3细胞中并筛选出能够稳定表达Tpr-Met的细胞株。而后对这种稳定株的白细胞介素3(IL-3)非依赖性增殖、Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SU11274对细胞增殖和信号通路的抑制作用进行全面评价。通过酶标仪检测细胞MTS吸光度值判断细胞的增殖水平,通过Western blot法检测Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SU11274对细胞信号通路的抑制作用。结果:获得稳定表达Tpr-Met的Ba/F3细胞株,该细胞株呈现IL-3非依赖性生长;能够表达持续活化的Tpr-Met;下游信号通路中关键分子Erk的磷酸化水平显著提升;c-Met特异性抑制剂SU11274通过抑制Tpr-Met磷酸化抑制下游信号通路的活化并抑制稳定株细胞增殖。结论:成功构建了Tpr-Met转化的Ba/F3细胞株。

SLUG基因可调控性干扰载体的构建及其在鼻咽癌细胞中的表达

目的 探讨鼻咽癌细胞中基因表达,构建可调控性相关基因干扰载体,并验证其干扰作用。方法 将高转移人鼻咽癌细胞株5-8F、5-8F-H3细胞进行培养,实时荧光定量RT-PCR检测5-8F及5-8F-H3细胞中SLUG、CBX3、MAD2L1、PLAU、HMGA1基因的表达水平。应用酶切、连接技术构建pSUPERIOR-SLUG干扰载体,采用脂质体转染方法转染5-8F-H3细胞,经嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,实时荧光定量RT-PCR检测干扰效果。结果 5-8F及 5-8F-H3细胞中SLUG基因表达水平均明显高于CBX3、MAD2L1、PLAU、HMGA1基因(均P<0.05),相对倍数分别为(11.23±1.78)倍、(1.23±0.17)倍、(1.57±0.27)倍、(6.36±0.38)倍、(3.66±1.14)倍,以SLUG基因倍数最高。所构建的pSUPERIOR-SLUG重组质粒,经酶切鉴定及序列分析证实为所需的目标序列,并成功转染鼻咽癌5-8F-H3细胞。阳性克隆S2-18基因表达水平高于阳性克隆S1-7、S1-9、S2-22基因(P<0.05),干扰率分别为67.42%、72.45%、84.20%、75.61%。结论 SLUG基因在鼻咽癌5-8F-H3中高表达。成功构建了重组质粒——pSUPERIOR-SLUG,并成功转染鼻咽癌5-8F-H3细胞,为后续进一步研究SLUG在鼻咽癌的作用奠定了基础。

CYP4F3基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建

目的构建细胞色素P450(CYP)4F3基因RNA干扰(RNAi)重组慢病毒载体。方法设计并合成CYP4F3 siRNA序列,与含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的pGCL载体连接产生PscsiCYP4F3慢病毒载体,PCR和测序鉴定。用PscsiCYP4F3、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染人肾上皮细胞系293T细胞,包装产生慢病毒,测定病毒滴度,并以人肺腺癌A549细胞中CYP4F3mRNA表达水平确定该基因干扰的有效靶点。结果成功构建CYP4F3siRNA的慢病毒载体,并筛选出该基因的有效干扰靶点。结论成功构建人CYP4F3基因RNAi慢病毒载体,为后期研究CYP4F3基因功能奠定基础。