骨巨细胞瘤H3.3G34W蛋白表达与H3F3A基因突变对比研究

目的比较H3.3G34W蛋白和H3F3A基因突变在骨巨细胞瘤中的表达和H3.3G34W在其他富含破骨样巨细胞肿瘤中的表达,为H3.3G34W作为骨巨细胞瘤诊断和鉴别诊断工具提供理论依据。方法选取2021年7月至2024年3月在郑州大学第一附属医院诊治的骨巨细胞瘤患者72例、其他富含破骨样巨细胞肿瘤148例,采用免疫组化评估骨巨细胞瘤和非骨巨细胞瘤肿瘤中H3.3G34W的表达,Sanger DNA测序分析检测骨巨细胞瘤中H3F3A突变类型,分析并比较H3.3G34W表达和H3F3A基因突变对骨巨细胞瘤的诊断价值。结果72例骨巨细胞瘤中H3.3G34W阳性率88.89%(64/72),72例骨巨细胞瘤基因测序均检测出突变,8例H3.3G34W阴性患者中,1例H3F3A检出G34W突变,7例检出少见类型突变(包括G34V、G34L和G34R)。148例非骨巨细胞瘤肿瘤中H3.3G34W均为阴性。结论骨巨细胞瘤中H3F3A基因突变最常见的位点是G34W,与H3.3G34W蛋白免疫组化染色表达一致。DNA测序分析能检测到H3F3A的罕见突变类型。免疫组化染色检测H3.3G34W蛋白的表达在诊断骨巨细胞瘤与其他富含破骨样巨细胞的肿瘤鉴别诊断中有重要作用,敏感性和特异性均较高。

膀胱癌细胞高表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)通过上调CD24抑制NK细胞的杀伤

目的 探讨膀胱癌细胞过表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)后是否影响自然杀伤(NK)细胞的活化及杀伤并探讨其具体机制。方法 利用慢病毒载体构建E2F3a稳定过表达的人及小鼠膀胱癌细胞株并将其与NK细胞共孵育,乳酸脱氢酶释放实验及流式细胞术检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。转录组测序分析膀胱癌细胞E2F3a过表达组与对照组之间的基因表达差异,免疫组织化学染色法检测膀胱癌组织中E2F3a与差异基因在蛋白水平上表达的相关性。进一步利用染色质免疫沉淀(ChIP)、实时定量PCR、 Western blot法及小干扰RNA(siRNA)等方法探索膀胱癌细胞过表达E2F3a后对NK细胞活化及杀伤影响的具体机制。结果 在膀胱癌细胞中过表达E2F3a能显著抑制NK细胞的活化及杀伤。膀胱癌细胞过表达E2F3a可显著上调CD24基因的表达,膀胱癌组织中E2F3a和CD24蛋白的表达呈显著正相关。CHIP结果显示,E2F3a能够结合CD24的启动子区并促进CD24基因的转录。干涉E2F3a过表达膀胱癌细胞中的CD24表达后,发现膀胱癌细胞E2F3a过表达所介导的NK细胞活化及杀伤抑制被显著缓解。结论 在膀胱癌细胞中E2F3a可结合CD24的启动子区促进CD24基因的转录及CD24蛋白的表达。膀胱癌细胞E2F3a通过上调CD24表达来抑制NK细胞的活化及杀伤。

H3F3A基因突变及H3.3 G34W蛋白表达在骨巨细胞瘤中的诊断意义

目的探讨H3F3A基因突变及H3.3 G34W蛋白表达在骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCTB)中的情况及其诊断意义。方法收集34例GCTB和40例富含破骨样巨细胞的肿瘤(软骨母细胞瘤10例,富于巨细胞骨肉瘤3例,甲状旁腺功能亢进2例,动脉瘤样骨囊肿10例,非骨化性纤维瘤15例)。采用免疫组化EnVision两步法检测H3.3 G34W蛋白表达,采用荧光PCR-毛细管电泳测序法检测H3F3A基因突变。并对两种方法的特异性和敏感性进行对比分析。结果34例GCTB中32例(94.1%)表达H3.3 G34W,40例非GCTB中仅1例(2.5%)软骨母细胞瘤部分表达H3.3 G34W。34例GCTB中33例检出H3F3A突变(97.1%),其中31例(91.2%)为p.G34W,1例为p.G34V,1例为p.G34L突变。40例非GCTB均未检出H3F3A突变。结论H3F3A基因突变及H3.3 G34W蛋白在GCTB的诊断中均具有较高的特异性和敏感性。基因突变检测可以检出GCTB某些罕见突变类型。

骨巨细胞瘤中H3F3A基因突变和蛋白表达的比较研究

目的研究H3F3A基因突变在骨巨细胞瘤(GCTB)中的临床应用价值。方法采用免疫组化染色和Sanger测序法分别对我院50例骨巨细胞瘤(GCTB)患者H3F3A基因第34位甘氨酸的突变进行检测。结果50例GCTB中,发生H3F3A G34W抗体阳性44例,野生型6例;发生H3F3A G34基因突变47例,野生型2例,因DNA质量不佳测序失败1例。免疫组化与Sanger测序法检测GCTB患者的H3F3A基因突变,差异无统计学意义(P=1.00);肿瘤位于上肢骨9例(18.0%),下肢骨34例(68.0%),中轴骨共7例(14.0%)。2种方法检出G34W突变的一致性为97.7%。结论免疫组化染色和Sanger测序法各有优势,前者只能检测出G34W突变类型,而后者都能检测出G34其他类型的突变,临床医生可以根据具体情况来选择使用。H3F3A基因有可能成为GCTB靶向治疗的新分子标记物,这为下一步研究和指导临床用药提供了理论基础。

骨巨细胞瘤中H3F3A基因突变检测及其临床意义

目的分析H3F3A基因在骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCTB)与相关富于巨细胞骨肿瘤中的突变情况,并探讨其与临床病理特征的关系。方法收集32例GCTB和18例纤维结构不良、17例纤维组织细胞瘤、12例动脉瘤样骨囊肿、3例成软骨细胞型骨肉瘤、3例非骨化性纤维瘤、6例软骨黏液样纤维瘤等富于巨细胞的骨肿瘤,采用PCR-Sanger测序法检测福尔马林固定石蜡包埋组织中H3F3A exon2基因突变情况,并分析H3F3A基因突变与GCTB临床病理特征的关系。结果32例GCTB中H3F3A基因突变阳性率为65.6%,而富于巨细胞的骨肿瘤均未检出H3F3A基因突变。GCTB中H3F3A基因突变阳性率在不同性别、年龄、肿瘤大小、发生部位、复发状态之间差异均无统计学意义(P均>0.05),而不同影像学分期中差异有统计学意义(P<0.05),其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中的阳性率分别为30%、83.3%、80%。H3F3A基因突变阳性率与影像学分期呈正相关(r s=0.416,P<0.05)。结论H3F3A基因突变在GCTB中有较高的特异性,可用于GCTB与相关富于巨细胞骨肿瘤的鉴别诊断。

H3F3A(组蛋白3.3)G34W免疫组织化学标记骨巨细胞病变的临床病理研究

目的骨巨细胞瘤易与骨的含有多核巨细胞病变混淆,本研究意在探讨H3F3A(组蛋白3.3)G34 W在形态学上含有多核巨细胞病变中的表达及其特异性分析,以评估其作为诊断性标志物的价值。材料和方法回顾性分析H3F3A(组蛋白3.3)G34 W在骨的有多核巨细胞病变中的表达情况。结果61例患者,男22例,女39例,平均年龄32.3岁(8-82岁),病变主要位于椎体(49例)、四肢长骨(10例),1例位于下颌,1例位于手部,病理诊断为骨巨细胞瘤35例,骨肉瘤3例,动脉瘤样骨囊肿8例,色素性绒毛结节性滑膜炎3例,软骨母细胞瘤2例,甲状旁腺功能亢进性纤维囊性骨炎2例,颌骨修复性肉芽肿1例,骨肉瘤3例,Langerhans细胞组织细胞增生症1例,骨化性纤维瘤1例,磷酸盐尿性间叶性肿瘤1例,软骨粘液样纤维瘤1例,神经鞘瘤1例,上皮样肉瘤1例,异物巨细胞反应1例。H3F3A(组蛋白3.3)G34 W在32例骨巨细胞瘤阳性表达(32/35),1例骨肉瘤阳性表达,其余均不表达。结论H3F3A(组蛋白3.3)G34 W是骨巨细胞瘤特异性标记,在骨巨细胞瘤的诊断和鉴别诊断中有重要作用。

E2F3a在U251胶质瘤细胞中的功能研究

背景与目的:E2F3a是一种重要的转录激活因子,在多种肿瘤组织中均呈现表达上调。E2F3a在恶性化程度较高的神经胶质瘤中表达较高,目前它在胶质瘤细胞中的功能尚不清楚。本文的目的是研究E2F3a对U251胶质瘤细胞周期和凋亡的影响。方法:通过脂质体介导质粒转染在U251细胞中过表达E2F3a;用Western blotting检测细胞内E2F3a蛋白质的表达水平;用PI-核DNA染色结合流式细胞术分析细胞周期分布;用Annexin V-PE和7-AAD染色结合流式细胞术分析细胞凋亡比例;用实时荧光定量PCR方法测定细胞内A2、B1、D1和E细胞周期素mRNA的相对表达水平。结果:与空载体转染对照组相比,E2F3a过表达可将位于S期的细胞比例提高28%(P<0.01),将位于G0/G1期和G2/M的细胞比例分别降低15%和13%(P<0.01)。E2F3a过表达对细胞凋亡无明显影响。进一步研究发现,E2F3a可显著上调细胞周期素D1和E的mRNA表达,而不影响周期素A2和B1的mRNA表达。结论:E2F3a是胶质瘤细胞增殖的促进因子,它可通过上调细胞周期素D1和E的表达加速细胞由G1期进入S期。

E2F3a功能域缺失对细胞柔红霉素敏感性的影响

目的探讨E2F3a功能域缺失与细胞柔红霉素(daunorubicin)敏感性的关系。方法将E2F3a的野生型及4种缺失突变体分别转入293T细胞,同时转染空载作为阴性对照,4种突变体分别缺失N端、DNA结合域(DNA-binding domain,DBD)、异二聚化域(heterodimerization domain,HD)和反式激活域(trans-activation domain,TA)。在E2F3a表达到峰值时,经不同浓度柔红霉素作用36 h,采用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-car-boxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt]方法检测细胞存活率和半数抑制浓度(IC_(50))。结果MTS结果显示,过表达E2F3a野生型以及4种缺失突变体的293T细胞在柔红霉素作用后的存活率明显低于转染空载体的细胞,IC_(50)值显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与WT-E2F3a相比,过表达E2F3a-ΔN细胞的存活率明显升高(P=0.012),IC_(50)值也显著增高。相反,过表达E2F3a-ΔTA细胞的存活率明显低于过表达WT-E2F3a(P=0.031),IC_(50)值也显著降低。而过表达突变体E2F3a-ΔDBD、E2F3a-ΔHD的细胞存活率与WT-E2F3a比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论过表达野生型及缺失突变体的E2F3a可提高293T细胞对柔红霉素的敏感性。E2F3a的N端缺失可下调293T细胞对柔红霉素的敏感性,而TA功能域的缺失可上调细胞对柔红霉素的敏感性。

以骨肉瘤形态为主的原发性恶性骨巨细胞瘤7例临床病理分析

目的探讨以骨肉瘤形态为主原发性恶性骨巨细胞瘤(primary malignant giant cell tumor of bone,PMGCTB)的临床病理学特征。方法回顾性分析7例PMGCTB的临床病理特征。结果7例PMGCTB中,女性4例,男性3例,年龄9~66岁(平均39.5岁,中位年龄35岁)。发生部位以股骨骨端最常见(3/6),临床表现为病变部位的疼痛和肿胀。影像学表现为溶骨性占位、溶骨和硬化混合性占位为主;多数骨皮质破坏伴软组织肿块形成(5/7)。组织学均以普通型骨肉瘤形态为主,破骨细胞样多核巨细胞完全消失或少量存在。免疫表型:6例肿瘤细胞H3F3A G34W核阳性、1例H3F3A G34V核阳性,所有肿瘤均表达SATB2、p63,p53呈野生型,Ki67增殖指数10%~50%。所有病例均发现H3F3A基因改变,6例为H3F3A p.G34W突变,1例为H3F3A p.G34V突变。结论PMGCTB罕见,当缺乏经典骨巨细胞瘤组织学特征时诊断更具挑战性,需结合影像学、免疫表型及分子检测,并注意与骨肉瘤及其他高级别肉瘤相鉴别。

石榴F3'H全基因组分析及其在籽粒花色苷合成中的作用

【目的】对石榴PgF3’H进行全基因组鉴定,了解其成员大小、位置、结构、系统发育关系及顺式作用元件等相关信息,分析PgF3’H在石榴籽粒花色苷合成中的作用。【方法】通过生物信息学分析结合转录组数据了解石榴PgF3’H基因家族成员,分析其在不同品种石榴籽粒中随发育期的表达情况,并通过农杆菌介导拟南芥异源转化试验验证PgF3’H3的功能。【结果】鉴定到的3个PgF3’H成员均含有保守结构域CYP75B,具有比较保守的基因结构;对它们的顺式作用元件和表达情况进行分析,表明PgF3’H2和PgF3’H可能受光和激素调节,由MYB转录调控其表达,在石榴籽粒花色苷合成中发挥重要作用;初步验证了PgF3’H3的功能。【结论】鉴定了石榴3个PgF3’H基因成员,明确了PgF3’H2和PgF3’H3是与籽粒着色有关的重要候选基因,验证了PgF3’H3调控花色苷合成的功能。

Linc01419调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖与侵袭

目的:探讨长链非编码RNA Linc01419对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法:通过UALCAN软件(https://ualcan.path.uab.edu/)分析TCGA数据库中Linc01419在膀胱癌组织与正常膀胱组织中的表达差异;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Linc01419在不同膀胱癌细胞系、22例经病理证实为膀胱癌的手术患者的肿瘤组织及癌旁正常膀胱组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验和Transwell小室侵袭实验检测敲低Linc01419表达对膀胱癌细胞增殖与侵袭的影响;采用双荧光素酶报告基因检测法分析Linc01419与miR-34a-5p及miR-34a-5p与E2F3之间的靶向调控关系。结果:UALCAN数据库分析显示相较正常膀胱组织,Linc01419在膀胱癌组织中显著高表达(P<0.001);RT-qPCR分析结果显示相较癌旁正常膀胱组织,Linc01419在22例膀胱癌组织中表达明显上调(P<0.001),与UALCAN数据库分析结果一致;Linc01419在4株膀胱癌细胞中的表达明显高于正常膀胱上皮细胞(P<0.01);敲低Linc01419表达,可显著抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭及N-cadherin、PCNA蛋白的表达,而显著促进E-cadherin的蛋白表达(P<0.05);miR-34a-5p过表达对膀胱癌细胞具有类似的抑制作用;双荧光素酶报告基因实验、RIP及Pull-down实验证实Linc01419可靶向结合miR-34a-5p,而后者进一步介导了对E2F3的靶向调控;抑制miR-34a-5p表达,可显著削弱Linc01419沉默对膀胱癌细胞生物学行为及E-cadherin、N-cadherin、PCNA、E2F3表达的影响。结论:Linc01419在膀胱癌中异常高表达,其通过调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖和侵袭,很可能是膀胱癌发生、发展过程中的一个重要环节。

细胞色素氧化酶P450(CYP4F3A)的纯化及动力学研究

目的:纯化细胞色素氧化酶P450(CYP4F3A)以及测定酶促反应动力学参数。方法:应用免疫共沉淀技术纯化CYP4F3A酶,通过LTB4降解实验测定其米氏常数。结果:纯化的CYP4F3A浓度为0.12 mg/ml,Km=2.643±0.106μmol/L,Vmax=24.97±1.163 nmol/(min.nmol)。结论:获得从哺乳动物细胞中纯化的CYP4F3A具有较强LTB4降解活性,并通过测定其酶动力学常数,为研究CYP4F3A活性调节机制打下基础。

联合检测E2F3a和CASP8AP2表达水平在儿童急性淋巴细胞白血病预后中的意义

目的探讨联合检测E2F3a和CASP8AP2的表达水平在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）预后判断中的意义。方法选取2008年3月至2010年7月首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心收治的初诊ALL患儿141例，其中男97例，女44例；确诊时年龄1.2～15.5岁，中位数5.2岁。采用实时荧光定量PCR（qPCR）方法检测141例ALL患儿的E2F3a和CASP8AP2的基因表达水平。利用受试者工作特征（ROC）曲线确定E2F3a和CASP8AP2表达水平的最佳分界点，将患儿分为高表达组和低表达组，比较其预后差异。Cox回归方法分析E2F3a和CASP8AP2的联合表达水平的预后意义。结果E2F3a和CASP8AP2双低表达组儿童ALL的5年无复发生存（RFS）率、无病生存（EFS）率和总生存（OS）率分别为（58.9±10.0）%、（56.0±9.9）%和（72.0±9.0）%，均明显低于双高表达组[（94.9±2.5）%、（93.7±2.7）%和（96.2±2.2）%]，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。E2F3a和CASP8AP2 2个基因均低表达的患儿与其他患儿相比，其预后很差；2个基因均低表达与MLL重排、诱导治疗结束时微小残留病水平是儿童ALL的独立预后因素。结论初诊E2F3a和CASP8AP2低表达的ALL患儿预后差，联合分析E2F3a与CASP8AP2 2个基因的表达水平能更准确地判断预后、预测复发。

比利时杜鹃花类黄酮3'-羟化酶(F3'H)基因克隆及功能分析

【目的】类黄酮3’-羟化酶(flavanone 3’-hydroxylase,F3’H)是植物花青素合成过程中的关键酶,探究比利时杜鹃花(Rhododendron hybridum Hort)F3’H基因的功能及表达特性。【方法】以比利时杜鹃花不同发育时期的花瓣及盛花期的根、茎、叶为实验材料,从比利时杜鹃花转录本数据库中筛选类黄酮生物合成通路关键酶类黄酮3’-羟化酶基因序列信息并进行生物信息学分析,利用反转录(RT-PCR)技术克隆RhF3’H基因;利用紫外分光光度计测定了比利时杜鹃花花瓣不同时期的花青素含量,利用RT-qPCR技术对不同发育时期花瓣和成熟期的不同组织进行RhF3’H基因表达量分析;采用Gateway技术构建过表达载体35S:RhF3’H-GFP重组载体进行亚细胞定位验证;构建p1302-RhF3’H过表达载体对比利时杜鹃花花瓣进行侵染。【结果】成功获得比利时杜鹃花RhF3’H基因长度为1557 bp,编码518个氨基酸,具有保守的F3’H结构域,属于P450超家族;系统进化树分析显示,比利时杜鹃花RhF3’H与龙眼和荔枝F3’H蛋白亲缘关系最近;RT-qPCR结果显示,RhF3’H在比利时杜鹃花不同花瓣时期和根、茎、叶组织中均有表达,在不同花瓣发育时期中,盛开期和衰败期中RhF3’H基因的表达量较高,与花青素含量结果相一致;亚细胞定位分析显示,RhF3’H主要存在于细胞膜上;成功构建P1302-RhF3’H瞬时过表达载体,相较于CK和p1302,p1302-RhF3’H在杜鹃花花瓣中显著高表达,其花青素含量也显著增加。【结论】RhF3’H基因在花瓣细胞膜中表达,表达模式与花青素积累趋势一致;过表达RhF3’H基因促进了花青素的合成。

2014年F3A亚太锦标赛札记

2014年5月9日～18日，我作为中国航空模型代表队领队，与教练王保庆、翻译牛懿文、运动员黄振迪、张旭骏、段志勇、刘宇峰奔赴泰国，参加了在芭堤雅举行的2014年F3A亚太锦标赛。

Ventana-D5F3免疫组化和NGS检测肺腺癌ALK阳性比较

Ventana-D5F3免疫组化(IHC)和二代测序技术(NGS)在ALK阳性检测上具有较高的一致性,在临床应用中可以采用IHC进行肺腺癌ALK阳性患者的筛查,而NGS精准检测可以作为有效的补充。在检测方法选择时,需要考虑样本类型、肿瘤细胞比例、检测靶标对检测方法的限制。

实时荧光定量PCR检测猴痘病毒的方法研究

目的建立猴痘病毒(mpox virus)的实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法。方法以猴痘病毒F3L基因为靶序列,设计特异性引物和探针,建立猴痘病毒RT-PCR检测方法,并对方法的灵敏度、特异性和重复性进行检测;对疑似猴痘阳性的人脓拭子临床样本核酸进行检测,对RT-PCR方法检测临床样本能力进行评价。结果本研究建立的RT-PCR检测方法可实现猴痘病毒的特异性检测,与天花、痘苗、牛痘等其他正痘病毒无交叉反应,检测重复性好,最低检测限为103copies/μL。可以对人皮肤拭子样本中的猴痘病毒进行准确检测。结论本研究建立了猴痘病毒的RT-PCR检测方法,可在临床样本中快速、特异、灵敏的检测猴痘病毒。

Al_(2)O_(3)f/Al_(2)O_(3)陶瓷基复合材料研究进展

目前,航空发动机等高温部件对热结构材料性能要求日渐严苛。Al_(2)O_(3)f/Al_(2)O_(3)陶瓷基复合材料(Al_(2)O_(3)f/Al_(2)O_(3)CMCs)因具有优异的力学性能和抗氧化性,成为了热结构材料体系的研究热点。本文综述了Al_(2)O_(3)f/Al_(2)O_(3)CMCs的组成体系、主要性能和制备方法,并分析了该材料在相关领域的应用以及未来的发展趋势。

CF_(3)SO_(2)F/N_(2)混合气体的电离特性试验研究

为评估CF_(3)SO_(2)F/N_(2)混合气体的绝缘性能,研究了其在电场中的电离特性。通过稳态汤逊实验(SST)测量获得了CF3SO2F摩尔分数分别为10%、20%、30%、40%、100%的CF_(3)SO_(2)F/N_(2)混合气体的有效电离系数和临界约化场强,研究了混合比例、约化场强和电极距离对其电离特性的影响,并比较了CF_(3)SO_(2)F/N_(2)混合气体相对于SF6的绝缘强度。结果表明:CF_(3)SO_(2)F摩尔分数为10%时,CF_(3)SO_(2)F/N_(2)混合气体的电离特性与N_(2)类似;随着CF_(3)SO_(2)F占比增大至20%以上后,CF3SO2F/N2混合气体的电离特性逐步由CF_(3)SO_(2)F主导;CF_(3)SO_(2)F/N_(2)混合气体相对于SF6的理论绝缘强度随着CF_(3)SO_(2)F摩尔分数的增大而增大,40%CF_(3)SO_(2)F/60%N_(2)混合气体的临界约化场强约为SF_(6)的1.01倍,但其对电场变化的敏感程度不如SF6。研究结果可为CF_(3)SO_(2)F/N_(2)混合气体的绝缘强度评估提供理论基础。