siRNA干扰LEF-1的表达对骨肉瘤细胞株F5M2侵袭和迁移的影响

目的:检测LEF-1在骨肉瘤细胞株F4和F5M2中的表达;探讨siRNA干扰前后对骨肉瘤细胞中LEF-1的表达及对细胞侵袭和迁移的影响。方法:采用Western-blot及qRT-PCR检测具有不同转移能力的骨肉瘤细胞株(F4,F5M2)中LEF-1的表达水平;利用RNAi干扰技术将LEF-1 siRNA转染到F5M2细胞中,使用Western-blot检测转染LEF-1 siRNA后细胞中LEF-1蛋白的表达变化;Tanswell实验检测干扰LEF-1的表达对F5M2细胞侵袭和迁移的影响。结果:LEF-1在骨肉瘤细胞株F4,F5M2中差异表达,其中在F5M2细胞中的表达较高。在转染LEF-1 siRNA的F5M2细胞中,LEF-1蛋白表达水平显著降低。Tan-swell实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组F5M2细胞的侵袭和迁移能力显著降低。结论:LEF-1 siRNA可以下调骨肉瘤细胞中LEF-1的表达,抑制骨肉瘤细胞的侵袭和转移。LEF-1有可能成为骨肉瘤诊治的新靶点。

EFEMP1促进骨肉瘤侵袭及转移能力的研究

目的检测EFEMP1在骨肉瘤组织及细胞株F4和F5M2中的表达,探讨EFEMP1在骨肉瘤细胞中的表达,明确其对骨肉瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法采用免疫组织化学SP法检测45例临床骨肉瘤及12例骨软骨瘤病例肿瘤组织中EFEMP1表达;采用免疫印迹法(Western blot)及逆转录定量PCR(qRT-PCR)检测具有不同转移潜能的骨肉瘤细胞株(F4、F5M2)中EFEMP1的表达水平;Tanswell实验检测重组人EFEMP1对F5M2细胞侵袭和迁移的影响。结果免疫组化结果显示在45例骨肉瘤标本中,有42例EFEMP1阳性(93.3%),其中强阳性为29例(64.4%),3例(6.7%)为阴性。骨软骨瘤中EFEMP1表达均为阴性。qRT-PCR检测以及Western-blot结果显示,在mRNA和蛋白水平上,骨肉瘤细胞株F4和F5M2中均有EFEMP1的表达,F5M2细胞株EFEMP1的表达高于F4细胞株,Western-blot显示EFEMP1在F4和F5中均有表达,且在F5M2中EFEMP1表达水平高于F4(P<0.05),这一结果与qRT-PCR检测结果一致。Tanswell实验结果显示,与阳性对照组和空白对照组相比,实验组F5M2细胞的侵袭和迁移能力显著增加,重组人全长蛋白EFEMP1可促进骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力。结论EFEMP1在人骨肉瘤组织中表达水平增高,骨肉瘤细胞株F4及F5M2中EFEMP1表达阳性,且高转移骨肉瘤细胞株F5M2中EFEMP1表达量较低转移细胞株F4表达水平明显增高,重组人EFEMP1能够促进骨肉瘤细胞侵袭及转移。EFEMP1可为骨肉瘤患者早期诊断和治疗提供一个新的策略。