结核分枝杆菌fadD家族蛋白的研究进展

结核分枝杆菌复合群感染导致的结核病依然威胁着全球人类及动物的健康。结核分枝杆菌含有复杂的细胞壁结构,其脂质成分与细菌的毒力、致病性、耐药性密切相关,结核分枝杆菌有250个基因参与脂类物质的合成与代谢,其数量是大肠杆菌的4倍之多,fadD家族也是众多脂质代谢基因中的一类,在细菌的生命周期或者在其致病中扮演着重要的角色。本文对结核分枝杆菌fadD家族蛋白结构、作用机制、调控和应用前景进行了综述,希望能为结核疫苗、诊断方法等的研发提供理论基础。

九香虫含药血清对人结肠癌细胞SW480凋亡相关因子FADD·p53表达作用的研究

[目的]观察九香虫含药血清对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡相关因子FADD、p53表达的影响,初步探讨其诱导结肠癌细胞凋亡的作用机制。[方法]20只雄性SD大鼠按随机数字表法分为2组(生理盐水对照组和九香虫含药血清组),每组10只。其中,九香虫含药血清组给予九香虫煎剂灌胃5 d后,制备九香虫含药血清,按不同浓度体外作用于SW480细胞72 h。CCK8细胞增殖试验检测其对SW480细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测其对SW480细胞凋亡的诱导作用,Western blot法、荧光定量PCR法检测细胞中FADD、p53蛋白及mRNA的表达。[结果]各浓度九香虫含药血清对SW480细胞生长均有抑制作用,且明显促进其凋亡,凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。Western bolt及荧光定量PCR结果表明,九香虫含药血清干预可使FADD表达明显增强,p53表达明显减弱。[结论]九香虫含药血清可诱导人结肠癌细胞凋亡,并影响凋亡相关因子p53、FADD的表达,从而达到抗肿瘤作用。

食管上皮癌变过程中FAS、FASL、FADD和caspase-8的表达及其意义

目的研究细胞凋亡调控因子FAS、FASL、FADD和caspase-8基因在食管上皮癌变过程中的表达及其意义。方法用免疫组化SP法检测食管黏膜中FAS、FASL、FADD和caspase-8的表达;原位杂交法检测食管黏膜中FADDmRNA和caspase-8mRNA的表达。结果从食管正常黏膜组织到不典型增生和食管癌组织,FAS蛋白表达率呈逐渐下降趋势,FASL蛋白表达率呈逐渐上升趋势,食管癌与正常组织之间差异明显(P<0·05)。高、中分化鳞癌中蛋白阳性表达率显著高于低分化鳞癌(P<0·05)。从食管正常黏膜组织到不典型增生和食管癌组织,FADD和caspase-8蛋白及RNA阳性表达率呈逐渐下降趋势,食管癌与正常黏膜组织之间差异明显(P<0·01);caspase-8蛋白和mRNA在高、中分化鳞癌中的表达率高于低分化鳞癌(P<0·05)。结论FAS与FASL的表达失衡与食管癌的发生、发展有密切关系,并与食管癌的分化和免疫逃避有关。FADD与caspase-8基因表达异常在食管癌的发生、发展中可能起着重要作用。

环磷酰胺诱导白血病细胞株凋亡及FasL、FADD基因蛋白表达

目的研究环磷酰胺(CP)诱导白血病细胞株(Jurkat)凋亡的机制,进一步探讨FasL和FADD在CP诱导白血病细胞凋亡中的作用。方法CP刺激人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat,分别培养12、24、48h,在相应的时间点收获细胞,碘化丙啶(PI)染色细胞DNA,流式细胞术(FCM)检测DNA片段的亚二倍体峰(subG1)阳性的凋亡细胞;并用WesternBlot技术测定FasL和FADD的表达。结果CP3mg/L刺激Jurkat白血病细胞12h几乎未见细胞凋亡(P>0.05),在24h也只有26.40%的细胞出现凋亡;但随着时间的延长,CP诱导细胞凋亡明显增加,到48h则有74.95%的细胞发生凋亡(P<0.01)。CP也上调FasL和FADD的表达,并随CP刺激细胞时间的延长其表达量也逐渐增加。结论CP诱导白血病细胞株Jurkat凋亡的起效时间较晚,诱导细胞DNA片段形成,上调FasL和FADD的表达,表明CP诱导白血病细胞凋亡依赖于Fas/FasL通路。

内毒素肝损伤中FADD mRNA表达及凉血化瘀方的影响

目的研究凋亡调节基因相关死亡区蛋白(FADD)mRNA在内毒素肝损伤中的表达与肝细胞凋亡的关系,以及凉血化瘀方对其的影响。方法腹腔注射内毒素脂多糖于D-氨基半乳糖致敏小鼠造成暴发性肝衰竭模型,用逆转录-聚合酶链反应半定量分析FADDmRNA表达情况,同时观察药物的影响作用。结果造模3h模型组和治疗组肝组织中FADDmRNA表达分别为110%、100%,至6h模型组的表达增加(124%),治疗组表达下调(81%)。结论凉血化瘀方抑制肝细胞凋亡的作用,可能与其下调FADDmRNA表达有关。

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织FADD表达的影响

目的观察眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠大脑皮层组织中FADD的表达,探讨眼针治疗脑损伤的作用机制。方法健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组。CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型。RT-PCR、免疫组化及Western印迹方法检测大鼠缺血侧脑皮层FADD的mRNA和蛋白表达的变化。结果与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层FADD mRNA和蛋白水平均显示出高表达(P<0.01),眼针组同模型组相比,FADD mRNA和蛋白表达则下调(P<0.05)。结论眼针抑制脑皮层组织中FADD的表达,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一。

依达拉奉对脑缺血再灌注后FADD、caspase-8表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后Fas相关死亡域蛋白(FADD)、caspase-8蛋白的表达及依达拉奉对其的影响。方法用免疫组化法测定缺血2 h后再灌注不同时相缺血半暗带FADD、caspase-8蛋白的表达。结果缺血半暗带皮质内FADD、caspase-8蛋白的表达于缺血再灌注后3 h明显上升,再灌注12 h达高峰(P<0.01),至再灌后24 h明显下降。依达拉奉能显著下调其表达(P<0.01,P<0.05)。结论脑缺血再灌注后缺血半暗带FADD、caspase-8蛋白的表达均明显增加,提示二者可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用,依达拉奉可能通过抑制其表达而达到脑保护的作用。

牛FADD基因的克隆分析及其真核表达载体的构建

【目的】克隆牛FADD基因并构建真核表达载体,以探讨其在牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采用RT-PCR技术,从牛卵巢组织总RNA中反转录FADD cDNA,对编码区核苷酸序列分析后,将其全长cDNA删除终止密码子,采用定向克隆技术连接克隆到含有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-Nl中,用BglⅡ、EcoRⅠ双酶切、测序进行鉴定,并进行了牛FADD mRNA的组织表达谱分析。【结果】克隆的牛FADD基因编码区全长序列与NCBI公布的序列完全一致,核苷酸和氨基酸序列与猪的同源性最高,与鸡的同源性最低,仅为42.5%和44%;通过PCR方法在FADD阅读框两端引入了BglⅡ和EcoRⅠ克隆位点,并于起始位点前加入Kozak序列,成功构建pAcGFP-N1-bFADD融合蛋白表达载体。组织表达谱分析表明,牛FADD mRNA高表达于肝脏、淋巴组织及睾丸、卵巢组织,在小肠、心、胰腺、肺、肾及肌肉中则弱表达或无表达。【结论】成功克隆了牛FADD基因,并构建pAcGFP-N1-bFADD融合蛋白表达载体,为FADD基因在牛卵母细胞发育调控中的基础研究提供了一种简便可靠的方法。

FADD在非小细胞肺癌组织中的表达及与癌细胞凋亡的关系

目的探讨FADD在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床生物学意义,并探讨其与NSCLC癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化SP法分别检测55例肺癌组织及23例癌旁正常肺组织中FADD的表达,TUNEL法检测NSCLC中癌细胞凋亡。结果 55例NSCLC组织中FADD表达的阳性率为83%,23例正常肺组织中FADD表达的阳性率为91%,差异无统计学意义(P>0.05)。NSCLC中FADD表达程度与肿瘤的分化程度呈正相关(rs=0.483,P=0.000),与肿瘤的TNM分期呈负相关(rs=-0.404,P=0.002)。NSCLC中FADD阳性表达率与肿瘤的分化程度、TNM分期有关(均P<0.01)。与肿瘤的性别、年龄、是否吸烟、肿块大小、病理分型、淋巴结转移、胸腔积液无关。所选36例NSCLC中均检测到癌细胞的凋亡,FADD蛋白中等阳性、强阳性的NSCLC中癌细胞凋亡程度较高,而阴性表达的NSCLC中凋亡程度较低。结论 FADD表达异常在NSCLC的发生发展中可能起着重要作用,FADD表达水平与NSCLC细胞凋亡密切相关。

非小细胞肺癌组织中FADD基因的表达及突变分析

背景与目的:Fas相关死亡结构域蛋白(Fas-associateddeathdomain,FADD)是细胞凋亡信号转导过程中重要的转接蛋白,研究表明其异常表达可能与肿瘤关系密切,但有关FADD与人非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)的研究尚鲜见报道。本研究检测FADD基因在NSCLC中的表达及突变情况,以探讨该基因在肺癌发生发展中的作用及机制。方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(polymerasechainreactionandsingle-strandconformationpolymorphism,PCR-SSCP)以及免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)分别检测62例NSCLC及13例癌旁非癌肺组织中FADD基因突变及蛋白表达情况,原位杂交法(insituhybridization,ISH)检测其中30例肺癌组织FADDmRNA表达水平,原位末端标记法(terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTP-biotinnicklabeling,TUNEL)检测62例NSCLC中的癌细胞凋亡。结果:PCR-SSCP检出62例NSCLC组织中有4例N2期组织发生FADD基因突变,提示FADD基因突变与淋巴结转移有关。IHC结果显示:NSCLC组织中FADD蛋白阳性率为80.6%(50/62),其阳性表达程度与肿瘤分化程度呈显著正相关(rs=0.411,P<0.01),癌组织中FADD阳性表达程度高于癌旁非癌肺组织(P<0.05)。

FADD,Caspase-8的表达缺失在肝细胞癌TRAIL耐受机制中的作用

目的:探讨FADD和Caspase-8表达缺失在肝细胞癌TRAIL耐受机制中的作用.方法:免疫组织化学方法检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中FADD蛋白的表达,原位杂交方法检测HCC中Caspase-8的表达,并结合临床资料进行分析.采用TRAIL联合应用亚毒性剂量的化疗药及细胞因子,观察其对于肝癌细胞株(HepG2、SMMC-7721)的胞毒作用,荧光分光光度计检测Caspase-8活性变化,Westernblot检测FADD表达的变化.结果:60例HCC中FADD阳性率,显著低于癌旁肝组织FADD阳性率(25%vs70%,P<0.01);HCC中33例Caspase-8表达阳性率,低于癌旁组织阳性率(19/20,95%).亚毒性剂量的化疗药(丝裂霉素、5-氟尿嘧啶、放线菌素D)可显著增强TRAIL的细胞毒活性,治疗后Caspase-8活性及FADD表达量显著增高.结论:HCC中FADD、Caspase-8的表达下调可能参与TRAIL耐受的机制,化疗药物可通过上调FADD的表达、增强Caspase-8活性来加强TRAIL的抗癌作用.

人FADD基因诱导粘液表皮样癌细胞凋亡的研究

目的 观察人FADD基因对涎腺粘液表皮样癌细胞 (MEC - 1)的诱导凋亡作用。方法 通过反转录PCR获取人FADD基因 ,将基因克隆入绿色荧光蛋白真核表达载体pIRES2 -EGFP中 ,阳离子脂质体法转染粘液表皮样癌细胞 ,通过细胞记数、荧光显微镜及电镜观察、流式细胞仪等检测被转染细胞的生长及其凋亡状况。结果 与对照组相比 ,在转染 1～ 3天内 ,FADD基因的表达导致粘液表皮样癌细胞存活数目减少 ,大量细胞发生凋亡。结论 人FADD基因可以有效地诱导转染的粘液表皮样癌细胞凋亡。

糖尿病大鼠缺血再灌注脑组织中FADD、Daxx的表达及其意义

目的:研究Fas相关死亡域蛋白(FADD)、死亡域相关蛋白(Daxx)在糖尿病缺血再灌注脑组织损伤中的作用。方法:36只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、脑缺血再灌注组和糖尿病脑缺血再灌注组。大鼠腹腔内注射链脲佐菌素制作糖尿病模型,之后再应用栓线法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。于缺血1h再灌注12h后对各组大鼠进行神经功能缺损评分,TTC染色测定梗死体积,Tunel法检测细胞凋亡数目,免疫组化染色及Western blot检测缺血半暗带侧皮质区FADD、Daxx的表达。结果:与脑缺血再灌注组相比,糖尿病脑缺血再灌注组的神经功能缺损评分、梗死面积及凋亡细胞数均有明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。糖尿病脑缺血再灌注组免疫组化染色检测FADD灰度值为110.18±4.21、Daxx为101.26±3.27;Western blot检测FADD蛋白定量为1.191±0.041、Daxx为1.389±0.052。脑缺血再灌注组免疫组化染色检测FADD灰度值为131.46±3.24、Daxx为123.16±2.19;Western blot检测FADD蛋白定量为1.035±0.032、Daxx为1.146±0.083。与脑缺血再灌注组相比,糖尿病脑缺血再灌注组FADD及Daxx蛋白的表达均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FADD、Daxx可能参与了糖尿病加重脑缺血再灌注损伤的病理生理过程,FADD、Daxx表达增加可能是糖尿病加重脑缺血再灌注损伤的机制之一。

凋亡相关蛋白FLIP、FADD在结直肠癌中的表达及其与细胞凋亡、增殖的关系

目的探讨FLIP、FADD蛋白在结直肠癌中的表达及其与结直肠癌细胞凋亡、增殖的关系。方法应用免疫组化方法检测FLIP、FADD和PCNA蛋白在60例结直肠癌及35例结肠腺瘤中的表达并经图像分析系统测量FLIP、FADD和PCNA蛋白的平均光密度(D)值。TUNEL法检测结直肠癌细胞凋亡并计算凋亡指数(AI),以PCNA阳性细胞所占细胞总数的百分比作为增殖指数(PI)。结果 FLIP、PCNA阳性物质在结直肠癌中表达高于结肠腺瘤(P<0.05),而FADD蛋白在结直肠癌中的表达低于结肠腺瘤(P<0.05);结直肠癌组细胞AI低于腺瘤组(P<0.05),而PI高于腺瘤组。FLIP蛋白表达与细胞AI负相关(r=-0.8560,P<0.05),与PI正相关(r=0.8214,P<0.05);FADD蛋白表达与结直肠癌细胞AI正相关(r=0.9003,P<0.05),与PI负相关(r=-0.8411,P<0.05)。结论 FLIP蛋白可能对结直肠癌细胞有抑制凋亡、促进增殖作用,而FADD则相反;FLIP高表达和FADD低表达可能与结直肠癌的发生发展有关。

cFLIP、FADD在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:研究cFLIP、FADD在宫颈癌组织中的表达,探讨cFLIP、FADD在宫颈癌发生、发展中的作用及其临床意义。方法:采用免疫组化(SP法)检测64例宫颈癌、15例CIN、12例慢性宫颈炎病例以及10例正常宫颈组织中cFLIP、FADD蛋白的表达,并检测宫颈癌中增殖细胞核抗原标记指数(PCNA-LI)。结果:cFLIP、FADD在宫颈癌中的表达与CIN、慢性炎症组及正常组中的表达差异有显著意义(P<0.01),宫颈癌组织中同时出现cFLIP的高表达和FADD的低表达。cFLIP的表达水平与PC-NA-LI呈正相关(r1=0.7738,P<0.01),FADD的表达水平与PCNA-LI成负相关(r2=-0.8011,P<0.01)。进一步分析发现,在宫颈癌中,肿瘤细胞分化越差,临床分期越晚,以及伴有癌细胞转移的淋巴结中,cFLIP高表达,而FADD低表达。cFLIP、FADD的表达与患者年龄、组织学分型无关。结论:cFLIP、FADD与宫颈癌的发生、发展和转移密切相关,可能是治疗宫颈癌的潜在靶点。

FADD、Caspase-3与稽留流产的关系探讨

目的探讨FADD及Caspase-3在稽留流产绒毛滋养细胞中的表达及其关系。方法随机选取早孕稽留流产组35例(实验组)和正常早孕绒毛组30例的绒毛(对照组)检测两组绒毛滋养层细胞FADD和Caspase-3表达。结果FADD和Caspase-3在两组滋养层细胞中均有阳性表达,表达部位均以合体滋养层细胞为主。FADD和Caspase-3在稽留流产组绒毛滋养细胞中表达明显强于对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论Fas凋亡途径可能是滋养层细胞凋亡的主要凋亡途径,FADD、Caspase-3是滋养层细胞凋亡中重要的促凋亡因子,滋养层细胞凋亡的增加可能参与了稽留流产的发生。

人参皂苷Rg1对帕金森病模型小鼠黑质区FADD和FLIP表达的影响及其意义

目的:探讨人参皂苷Rg1对帕金森病(PD)模型小鼠黑质区凋亡信号蛋白Fas死亡结构域蛋白(FADD)、FADD样白细胞介素1-转化酶样抑制蛋白(FLIP)及Caspase-3表达的影响,阐明FADD和FLIP在PD发病机制中的作用及人参皂苷Rg1对多巴胺(DA)能神经元的保护作用。方法:45只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组,每组15只。模型组小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),人参皂苷Rg1组小鼠注射MPTP前先注射人参皂苷Rg1,对照组小鼠腹腔注射生理盐水。观察各组小鼠行为学变化;采用免疫组织化学法和免疫蛋白印迹法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、FLIP、FADD及Caspase-3的表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠出现典型PD症状,黑质区TH阳性细胞数明显减少(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显增加(P<0.01),胞浆染色深;FADD、FLIP及Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,人参皂苷Rg1组小鼠PD症状减轻,黑质区TH阳性细胞数明显增多(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显减少(P<0.01),胞浆染色浅;FADD、FLIP和Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.01)。FADD与Caspase-3阳性细胞数呈正相关关系(r=0.791,P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可通过影响PD模型小鼠黑质区FADD和FLIP的表达对DA能神经元起到一定的保护作用。

PCR-SSCP法检测非小细胞肺癌中FADD基因突变的研究

目的检测Fas相关死亡结构域蛋白(Fasassociateddeathdomainprotein,FADD)基因在人非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer,NSCLC)中的突变情况,以探讨该基因在肺癌发生发展中的作用及机制。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(polymerasechainreactionandsinglestrandconformationpolymorphism,PCRSSCP)检测74例NSCLC原发灶癌组织及13例癌旁正常肺组织中FADD基因突变情况。结果74例NSCLC组织中检出5例发生FADD基因突变,FADD基因突变与癌的淋巴结转移呈显著正相关(rs=0.378,P=0.001),与其他临床病理特征无关。结论NSCLC中存在着FADD基因突变。FADD基因突变在NSCLC的发生发展中可能起着重要作用。

大鼠脑缺血再灌注后FADD、FAP-1的表达

目的 探讨脑缺血再灌注后FADD、FAP 1表达的时间及表达部位。方法 用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,用免疫组化法检测FADD、FAP 1的表达。结果 脑缺血前无FADD、FAP 1的表达 ,缺血再灌注后即有阳性染色 ,缺血再灌注 12h表达最多 ,缺血再灌注 2 4h阳性表达最少。海马区与皮层FADD、FAP 1的表达明显多于纹状体区。结论 大鼠脑缺血再灌注引起了FADD、FAP 1的表达 ,FADD、FAP 1的表达可能与凋亡有关。

槲皮素对脑缺血再灌后FADD蛋白表达的影响

目的研究大鼠脑缺血/再灌后Fas相关死亡域蛋白（FADD）的表达及槲皮素对其影响。方法用免疫组化法测定缺血2h再灌注不同时相缺血半暗带FADD蛋白的表达。结果缺血半暗带脑皮质内FADD蛋白的表达于再灌注3h明显升高,再灌注12h达高峰（P〈0.01）,至再灌注24h其表达明显下降。槲皮素能显著下调其表达（P〈0.01-0.05）。结论脑缺血/再灌后缺血半暗带FADD蛋白表达明显增加,提示可能在脑缺血/再灌注损伤中发挥重要作用。槲皮素可能通过抑制其表达从而达到脑保护的作用。