华中五味子酮对阿尔茨海默病样大鼠海马内IL-1β及iNOS表达的影响

目的:观察华中五味子酮(schisandrone)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)样大鼠海马内白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA水平的影响,探讨华中五味子酮对AD可能的防治作用.方法:30只雄性SD大鼠, 8～12周龄,体质量250～300 g,随机分为3组:空白对照组、AD模型组和华中五味子酮干预组(n=10).采用侧脑室立体定向注射β-淀粉样蛋白(amyloid-beta protein)Aβ25-35(溶于无菌生理盐水,浓度10 mmol/L)的方法,建立AD的动物模型,并用华中五味子酮(溶于玉米油,浓度1 mmol/L)灌胃进行药物干预,通过半定量RT-PCR的方法观察华中五味子酮对AD样大鼠海马区IL-1β及iNOS mRNA水平的影响.结果:用华中五味子酮干预,AD样大鼠海马内IL-1β及iNOS mRNA水平(0.333 7±0.122 3和0.266 6±0.088 5)较AD样大鼠(0.969 3±0.153 9和0.666 0±0.121 1)有显著降低(P<0.001).结论:华中五味子酮能够抑制Aβ诱导的氧化应激和炎性反应,在AD发病中可能具有保护作用.

Nod样受体蛋白-3(NLRP3)炎症小体在翼状胬肉中的表达

目的观察翼状胬肉组织和正常结膜组织中Nod样受体蛋白-3(Nod-like receptor pyrin domain3,NLRP3)炎症小体、细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)的表达,探讨NLRP3炎症小体在翼状胬肉发生过程中的作用。方法选取20例翼状胬肉组织和6例正常结膜组织为实验对象,采用免疫组织化学法检测NLRP3、IL-1β蛋白的表达,通过Western-blot检测半胱天冬酶-1(cysteine-aspartic acid protease 1,Caspase-1)及Procaspase-1的蛋白表达水平,并通过实时荧光定量PCR检测白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的基因表达水平。结果 NLRP3在正常结膜上皮细胞中无表达,而在翼状胬肉组织的基底部呈阳性表达;IL-1β在正常结膜组织中无表达,而在翼状胬肉组织中呈阳性表达;Pro-caspase-1在正常结膜组织和翼状胬肉中的表达差异无统计学意义(P>0.05),而其活性形式Caspase-1在翼状胬肉组织中的表达明显高于正常结膜组织(P<0.05);IL-18在胬肉组织中的平均表达水平明显高于正常结膜组织(P<0.05)。结论 NLRP3信号通路活化后,其下游信号分子Caspase-1、IL-1β、IL-18在翼状在胬肉组织中异常高表达,说明NLRP3炎症小体及相关信号通路可能在翼状胬肉的进展过程中发挥作用。

右美托咪定通过调控白细胞介素-17及转化生长因子-β1/Smad蛋白3信号通路对脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨右美托咪定介导白细胞介素(IL)-17对脂多糖(LPS)诱导的人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞(以下简称“A549细胞”)炎症、增殖、迁移、上皮间质转化及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白3(Smad3)信号通路的调控作用。方法体外培养A549细胞,将其分为对照组(不做干预)、LPS组(10.00μg/ml LPS)和实验组(10.00μg/ml LPS+1.25、2.50、5.00、10.00μg/ml右美托咪定),分别采用CCK-8试剂盒和反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定细胞活力和IL-17 mRNA表达水平以筛选右美托咪定最适实验浓度;随后将细胞分为对照组、LPS组、IL-17组、右美托咪定组和IL-17+右美托咪定组,干预24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子IL-17、IL-8和IL-6的表达水平;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)试剂盒用来检测细胞增殖率;划痕实验用来检测细胞迁移率;蛋白免疫印迹(WB)法测定肺泡上皮间质转化(EMT)相关蛋白、TGF-β1/Smad3通路相关蛋白及IL-17蛋白表达水平。结果右美托咪定逆转了LPS对A549细胞活力的抑制作用和IL-17 mRNA表达水平的促进作用,且10.00μg/ml浓度的右美托咪定组的效果最好,因此选择10.00μg/ml右美托咪定用于后续实验。LPS组细胞中IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维粘连蛋白(FN)、Smad3的磷酸化(p-Smad3)/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-17+右美托咪定组IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN、p-Smad3/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平低于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-17+右美托咪定组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平高于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定通过抑制IL-17的分泌恢复LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤,促进LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖并抑制其迁移和EMT进程,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad3通路的信号转导有关。

细胞外信号调节激酶1/2在Aβ_(25-35)引起体外培养星形胶质细胞炎症反应中的作用

目的观察Aβ诱导星形胶质细胞激活炎症细胞因子表达及细胞外信号调节激酶1/2的表达。探讨细胞外信号调节激酶1/2是否参与了星形胶质细胞激活炎症细胞因子作用及其作用机制。方法传代体外培养的大鼠星形胶质细胞,分别用终浓度为10μmol/L和20μmol/L的Aβ25-35作用30分钟。在PD98059组,加入Aβ25-3520μmol/L前1小时,加入PD培养。用Western blot分析iNOS、COX-2、IL-1β、P-ERK1/2的改变。结果Aβ25-35可使体外培养星形胶质细胞P-ERK1/2蛋白表达明显增加,同时,Aβ25-35也可使iNOS、COX-2、IL-1β表达明显增加,ERK1/2上游激酶MEK特异性阻滞剂PD98059可完全阻断Aβ25-35引起的ERK1/2表达增加,也可抑制Aβ25-35引起的iNOS、COX-2、IL-1β蛋白表达增加。结论ERK1/2信号转导通路参与Aβ25-35引起体外培养星形胶质细胞炎症反应的作用。

老年病毒性心肌炎患者外周血NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-18/IL-1β-TGF-β信号通路的变化及意义

目的探究老年病毒性心肌炎患者外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3-凋亡相关斑点样蛋白(ASC)-半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-1-白细胞介素(IL)-18/IL-1β-转化生长因子(TGF)-β信号通路的变化及意义。方法选择140例老年病毒性心肌炎患者,根据病程分为急性期和恢复期,另选择同期50例健康体检者,均采用聚合酶链反应检测外周单个核细胞(PBMCs)中NLRP3炎性小体、ACS、Caspase-1 mRNA水平,Western印迹检测上述三者蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测外周血IL-18、IL-1β和TGF-β水平,分析检测结果。结果140例患者检出病毒140株,其中RNA病毒86株,DNA病毒54株,主要病毒为柯萨奇病毒B、柯萨奇病毒A和疱疹病毒1型;病毒性心肌炎急性期患者NLRP3、ACS、Caspase-1 mRNA及其蛋白表达水平和血清IL-18、IL-1β、TGF-β水平均显著高于恢复期和对照组(P<0.05),恢复期和对照组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);病毒性心肌炎急性期患者NLRP3 mRNA及其蛋白表达与ACS、Caspase-1 mRNA表达和ACS、Caspase-1蛋白表达及血清IL-18、IL-1β、TGF-β水平均呈正相关(P<0.05)。结论老年病毒性心肌炎急性期患者NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-18/IL-1β-TGF-β信号通路被激活,参与病理过程,可为疾病诊疗提供指导。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员3炎症小体的活化调节与牙周疾病的关系

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员(NLRP)3炎症小体是一种位于细胞质内的多蛋白质复合体,由其核心成分感知病原体和宿主危险信号后组装而成,通过激活半胱氨酸天冬酰胺特异蛋白酶-1致促炎因子白细胞介素(IL)-1β成熟与分泌参与免疫炎症反应。牙周病是由宿主和微生物因素相互作用导致的局部炎症反应,而IL-1β又是牙周炎发病的关键因素之一。IL-1β的成熟和分泌与NLRP3炎症小体密切相关,且牙周致病菌可调节该炎症小体的表达及活化,因此NLRP3炎症小体对牙周疾病的发生发展和治疗具有重要意义。本文就NLRP3炎症小体的生物学功能、活化机制及其在牙周病学领域的研究进展作一综述。

转化生长因子-β诱导视网膜色素上皮细胞增殖中NLRP3炎症小体的表达及意义

目的探讨转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)刺激下Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体在视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)增殖中的表达变化及意义。方法利用TGF-β刺激RPE细胞增殖模拟增生性玻璃体视网膜病变模型,随机分为空白对照组(Sham组)和TGF-β诱导RPE细胞增殖组(TGF-β组),TGF-β组再根据浓度(0.5μg·L^(-1)、2.5μg·L^(-1)、10.0μg·L^(-1)、12.5μg·L^(-1))分组。利用MTT微量酶比色法检测RPE细胞增殖情况;Western blot观察NLRP3蛋白的表达变化;利用标准ELISA试剂盒检测白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-18表达情况。结果与Sham组比较,0.5μg·L^(-1) TGF-β组RPE细胞增殖不明显,差异无统计学意义(P>0.05),但NLRP3、IL-1β和IL-18表达明显提高(均为P<0.01);2.5μg·L^(-1)、10.0μg·L^(-1)和12.5μg·L^(-1)TGF-β组RPE细胞增殖明显,NLRP3、IL-1β和IL-18表达均提高(均为P<0.05);与0.5μg·L^(-1) TGF-β组相比,2.5μg·L^(-1)、10.0μg·L^(-1)和12.5μg·L^(-1)TGF-β组RPE细胞增殖显著增加,NLRP3、IL-1β和IL-18表达均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论不同浓度TGF-β诱导RPE细胞增殖中NLRP3炎症小体表达变化不同,两者可能相互调控影响RPE细胞增殖,在增生性玻璃体视网膜疾病发生发展中具有重要的作用。

喘息婴幼儿血清YKL-40、IL-8水平与潮气肺功能的相关性研究

目的探讨血清几丁质酶3样蛋白1(YKL-40)、白细胞介素-8(IL-8)水平在不同严重程度喘息婴幼儿中的变化及其与潮气肺功能的相关性。方法选择2021年6月至2023年5月白求恩国际和平医院儿科收治的喘息急性发作婴幼儿70例,根据症状的严重程度分为轻症组44例和重症组26例,选择同期来我院体检的健康婴幼儿22例作为对照组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组婴幼儿的血清YKL-40、IL-8水平,并测查潮气呼吸肺功能,采用Pearson相关分析法分析YKL-40与IL-8与潮气肺功能参数的相关性。结果重症组患儿的血清YKL-40和IL-8水平分别为(56.81±13.48)ng/mL、(192.89±51.11)pg/mL,明显高于轻症组的(43.48±14.61)ng/mL、(148.84±54.13)pg/mL和对照组的(29.06±10.24)ng/mL、(94.45±23.94)pg/mL,而轻症组患儿的血清YKL-40、IL-8水平又明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重症组、轻症组和对照组婴幼儿的潮气量(VT/kg)、吸气时间(TI)和呼气时间(TE)比较差异均无统计学意义(P>0.05);重症组患儿的吸气时间与呼气时间比(TI/TE)、达峰容积比(VPEF/VE)和达峰时间比(TPTEF/TE)分别为0.60±0.11、(21.53±5.44)%、(18.17±4.85)%,明显低于轻症组的0.68±0.12、(25.92±6.48)%、(23.51±8.63)%和对照组的0.72±0.18、(35.62±6.24)%、(34.26±7.16)%,轻症组患儿TI/TE、VPEF/VE、TPTEF/TE明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,血清YKL-40与IL-8呈正相关(r=0.926,P<0.05),与VPEF/VE及TPTEF/TE呈负相关(r=-0.725、-0.827,P<0.05),YKL-40与VT/kg、TI、TE及TI/TE无明显相关性(r=-0.294、-0.469、0.247、-0.387,P>0.05)。结论YKL-40和IL-8可能参与了婴幼儿喘息的急性气道炎症过程,且与喘息严重程度及肺小气道功能相关。

磷酸甘油酸变位酶5调控细胞焦亡在肝脏缺血-再灌注损伤中的作用

目的研究磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)调控细胞焦亡在肝脏缺血-再灌注损伤(IRI)中的作用及分子机制。方法建立C57小鼠肝脏IRI模型,随机分别予再灌注6 h(6 h组)与12 h(12 h组),并设立假手术组(Sham组),每组10只。分析IRI对小鼠肝组织及血清学指标的影响;分析小鼠肝脏IRI过程中PGAM5、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1的表达情况。建立肝细胞IRI模型(IRI组),采用Caspase-1抑制剂Z-YVAD-FMK预处理后再建立肝细胞IRI模型(抑制剂组),将未处理的AML12细胞作为对照组,分析抑制Caspase-1活性对细胞焦亡的影响。采用脂质体3000将PGAM5小干扰核糖核酸(siRNA)(siRNA组)和siRNA阴性对照(siRNA-NC)(siRNA-NC组)转染至AML12细胞,再建立肝细胞IRI模型,将未处理的AML12细胞作为对照组,分析PGAM5调控细胞焦亡对肝细胞IRI的影响。结果 6 h组和12 h组小鼠肝组织中部分肝细胞水肿,肝窦区变窄,中央静脉充血,偶见点灶状坏死等,且12 h组较6 h组病变加重。与Sham组小鼠比较,6 h组和12 h组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平升高,且12 h组高于6 h组;6 h组和12 h组肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平升高,12 h组低于6 h组;6 h组和12 h组小鼠肝组织IL-1β信使核糖核酸(mRNA)相对表达量升高,12 h组低于6 h组;6 h组和12 h组肝组织细胞凋亡率升高,12 h组低于6 h组(P<0.01~0.05)。与Sham组小鼠比较,6 h组和12 h组小鼠肝组织PGAM5 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均升高,且12 h组高于6 h组(P<0.01~0.05);6 h组和12 h组肝组织PGAM5、Caspase-1蛋白表达增多。IRI组细胞NOD样受体蛋白3(NLRP3)、裂解Caspase(cleaved Caspase)-1及Gasdermin D(GSDMD)蛋白相对表达量较对照组升高,GSDMD荧光强度较对照组增强;抑制剂组NLRP3、cleaved Caspase-1及GSDMD蛋白相对表达量较IRI组下降,GSDMD荧光强度较IRI组减弱(P<0.01~0.05)。与对照组比较,siRNA-NC组细胞存活率下降,PGAM5、NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量升高(P<0.01~0.05);与siRNA-NC组比较,siRNA组细胞存活率升高,PGAM5、NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量下降(P<0.01~0.05)。结论 PGAM5可加重小鼠肝脏IRI,其机制可能为通过PGAM5/Caspase-1/GSDMD信号通路调控细胞焦亡,加速肝细胞损伤。

KLF5转录因子抑制TRAIL诱导PC-3前列腺癌细胞凋亡的分子机制

目的探究通过抑制KLF5表达促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞凋亡的分子机制。方法在TRAIL诱导下,使用MTT实验、流式细胞实验、Western blot及qRT-PCR检测KLF5敲低组与对照组的PC-3细胞在细胞活性、凋亡比例及凋亡相关标志物的表达。结果在PC-3细胞中抑制KLF5表达后,TRAIL诱导下的细胞凋亡明显增加,TRAIL受体DR4、DR5表达上升,凋亡抑制因子c-FLIP蛋白表达下调,但是其mRNA表达水平不变。结论抑制KLF5,可以通过上调TRAIL受体、下调c-FLIP蛋白表达的途径,促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。使用小干扰RNA或小分子药物抑制KLF5表达,可能是潜在的激素非敏感前列腺癌治疗手段。

几丁质酶-3样蛋白1对脂多糖诱导小鼠骨骼肌卫星细胞炎症损伤相关分子表达的影响

目的探讨在脓毒症模型中几丁质酶-3样蛋白1(CHI3L1)介导骨骼肌干细胞损伤的潜在机制。方法用6种浓度的脂多糖(LPS)刺激体外培养的小鼠骨骼肌卫星细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和细胞增殖与毒性试剂盒(CCK-8)筛选出细胞处理最佳浓度。构建CHI3L1过表达和干扰载体转染骨骼肌卫星细胞,采用聚合酶链反应(PCR)、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)验证转染效率。将细胞按随机数字表法分为空白对照组(不加任何干预的细胞)、模型组(LPS刺激未转染的细胞)、过表达CHI3L1组(LPS刺激转染了CHI3L1过表达质粒的细胞)、过表达CHI3L1对照组(LPS刺激转染了空载质粒的细胞)、干扰CHI3L1组(LPS刺激转染了CHI3L1干扰序列的细胞)、干扰CHI3L1对照组(LPS刺激转染了CHI3L1干扰序列阴性对照的细胞)。采用ELISA检测细胞外天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用Western blotting检测细胞中IL-1β、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达水平。结果根据CCK-8和ELISA检测结果筛选出最佳浓度为5 mg/L的LPS进行后续实验,且PCR、Western blotting证实转染有效。与空白对照组比较,模型组细胞外IL-1β、caspase-1含量和细胞中Akt、p-Akt、IL-1β的蛋白表达水平均明显升高〔IL-1β(ng/L):11.22±0.55比8.63±0.63,caspase-1(pmol/L):9.47±0.22比8.65±0.15,Akt/GAPDH:1.36±0.12比1.06±0.15,p-Akt/GAPDH:0.78±0.07比0.09±0.01,IL-1β/GAPDH:1.38±0.12比0.18±0.03,均P<0.05〕。与模型组、过表达CHI3L1对照组比较,过表达CHI3L1组细胞外IL-1β、caspase-1含量和细胞中p-Akt、IL-1β的蛋白表达均明显升高〔IL-1β(ng/L):14.93±0.97比11.22±0.55、9.38±0.40,caspase-1(pmol/L):10.35±0.03比9.47±0.22、8.46±0.24,p-Akt/GAPDH:1.21±0.04比0.78±0.07、0.63±0.04,IL-1β/GAPDH:1.87±0.08比1.38±0.12、1.51±0.17,均P<0.05〕。与模型组、干扰CHI3L1对照组比较,干扰CHI3L1组细胞外IL-1β和caspase-1含量及细胞中p-Akt、IL-1β的蛋白表达均明显降低〔IL-1β(ng/L):8.98±0.73比11.22±0.55、10.44±0.65,caspase-1(pmol/L):7.61±0.63比9.47±0.22、8.37±0.38,p-Akt/GAPDH:0.50±0.04比0.78±0.07、0.94±0.06,IL-1β/GAPDH:0.77±0.02比1.38±0.12、1.13±0.07,均P<0.05〕。结论CHI3L1可能通过caspase-1和IL-1β介导脓毒症模型中小鼠骨骼肌干细胞的损伤;CHI3L1可能参与了调控骨骼肌干细胞中Akt的信号通路,而对STAT3信号通路无明显影响。

人参皂苷Rg1对帕金森病模型小鼠黑质区FADD和FLIP表达的影响及其意义

目的:探讨人参皂苷Rg1对帕金森病(PD)模型小鼠黑质区凋亡信号蛋白Fas死亡结构域蛋白(FADD)、FADD样白细胞介素1-转化酶样抑制蛋白(FLIP)及Caspase-3表达的影响,阐明FADD和FLIP在PD发病机制中的作用及人参皂苷Rg1对多巴胺(DA)能神经元的保护作用。方法:45只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组,每组15只。模型组小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),人参皂苷Rg1组小鼠注射MPTP前先注射人参皂苷Rg1,对照组小鼠腹腔注射生理盐水。观察各组小鼠行为学变化;采用免疫组织化学法和免疫蛋白印迹法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、FLIP、FADD及Caspase-3的表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠出现典型PD症状,黑质区TH阳性细胞数明显减少(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显增加(P<0.01),胞浆染色深;FADD、FLIP及Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,人参皂苷Rg1组小鼠PD症状减轻,黑质区TH阳性细胞数明显增多(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显减少(P<0.01),胞浆染色浅;FADD、FLIP和Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.01)。FADD与Caspase-3阳性细胞数呈正相关关系(r=0.791,P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可通过影响PD模型小鼠黑质区FADD和FLIP的表达对DA能神经元起到一定的保护作用。

γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路对银屑病样皮炎小鼠γδT17细胞表达的影响

目的探讨γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路对银屑病样皮炎小鼠γδT17细胞表达的影响.方法将45只健康雄性SPF级BALB/c小鼠按照简单随机抽样法等分为对照组、模型组和干预组,模型组和干预组小鼠背部脱毛区均每日外涂5%咪喹莫特乳膏62.5 mg,干预组还在外用咪喹莫特后立即接受γ分泌酶抑制剂(DAPT)10 mg/kg腹腔注射,每日1次;对照组仅每日外涂等剂量白凡士林.共处理6d,采用银屑病皮损严重程度指数(PASI)评估皮损变化.第7天麻醉小鼠心脏取血,取脾脏及皮肤组织,制备单细胞悬液,比较计算各组小鼠脾指数,苏木精-伊红染色观察皮肤组织病理学改变.流式细胞仪检测脾脏及皮肤组织中γδT17细胞比例,实时定量反转录PCR检测脾细胞悬液中Hes1 mRNA表达水平,酶联免疫吸附实验检测血清中白细胞介素17A(IL-17A)含量.采用单因素方差分析和重复测量的方差分析比较各组间指标差异,Pearson相关分析评价不同指标间的相关性.结果末次处理24h后,肉眼观察显示,干预组小鼠银屑病样皮炎改变明显轻于模型组,PASI显著低于模型组,且表皮增厚及真皮炎细胞浸润程度明显轻于模型组.模型组小鼠脾指数(12.534±1.636)、脾脏(24.659%±4.603%)及皮肤组织γδT17细胞比例(22.127%±5.670%)、脾脏Hes1 mRNA表达水平(4.867±0.543)、血清IL-17A含量[(22.478±2.776)ng/L]均明显高于对照组(P<0.01);干预组上述指标分别为9.449±1.040、14.966%±5.770%、13.631%±5.946%、2.541±0.347、(18.639±1.816)ng/L,均显著低于模型组(P<0.01).模型组及干预组小鼠脾脏γδT17细胞比例与血清IL-17A含量均呈正相关(r值分别为0.56和0.53,均P<0.05),皮损γδT17细胞比例与PASI均呈正相关(r值分别为0.56和0.52,均P<0.05),脾脏Hes1 mRNA表达水平与γδT17细胞比例(r值分别为0.61和0.58)、血清IL-17A含量(r值分别为0.60和0.54)均呈正相关(P<0.05).结论γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路能够明显抑制银屑病样皮炎小鼠γδT17细胞的表达,减轻银屑病样皮炎损害.

Fas、cFLIP及TGF-β_1在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的研究凋亡相关因子(Fas)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)及转化生长因子β_1(TGF-β_1)在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织和宫颈鳞癌组织中的表达,以及与宫颈鳞癌临床病理和分期的关系,探讨3者在宫颈鳞癌发生、发展中的作用,同时也为寻找宫颈癌的诊断和治疗新靶点提供理论依据。方法采用免疫组织化学法检测59例宫颈鳞癌、45例子宫颈上皮内瘤变(CIN)和15例正常宫颈组织中cFLIP、Fas及TGF-β_1的表达,并进行相关临床病理因素分析。结果在宫颈病变由良性到恶性的发展过程中,Fas和TGF-β_1的表达水平逐渐降低(P<0.05),cFLIP的表达水平逐渐升高(P<0.05)。在宫颈鳞癌发展过程中,Fas与cFLIP表达呈负相关(P<0.05),Fas与TGF-β_1的表达呈正相关(P<0.05)。结论Fas、TGF-β_1表达下调,以及cFLIP表达上调在宫颈鳞癌的发生、发展中发挥重要作用。

PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspse-1通路诱导大鼠子宫炎症反应

颗粒物(PM)对呼吸系统、心血管系统、神经系统和免疫系统均有损害,但目前关于吸入颗粒物对生殖损伤的研究较少。本研究旨在探讨细颗粒物(PM_(2.5))短期暴露对大鼠子宫炎症损伤及其作用机制。PM_(2.5)暴露30 d后,高剂量组大鼠的子宫脏器系数、内膜上皮细胞厚度和腺上皮高度均明显高于对照组(P<0.05),抑制剂MCC950则能明显降低PM_(2.5)对子宫的影响。子宫组织免疫荧光双染色结果显示,PM_(2.5)暴露组子宫内CD45白细胞和CD11b巨噬细胞均明显增加(P<0.05)。Elisa法检测子宫组织和血清中白介素1β(IL-1β)和转化生长因子-β1(TGF-β1),暴露组子宫组织和血清中IL-1β和TGF-β1含量明显升高(P<0.05)。Western印迹法检测结果显示,PM_(2.5)上调核苷酸结合低聚体结构域样受体3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白质(ASC)、pro-IL-1β、pro-Caspase-1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白质表达量(P<0.05)。与高剂量组相比,NLRP3抑制剂MCC950能明显降低NLRP3/Caspase-1通路中关键蛋白质表达水平(P<0.05)。综上,PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspase-1信号,诱导大鼠子宫炎症反应,为PM_(2.5)生殖毒性预防和治疗提供理论基础。

糖尿病足患者血清IGF-1、IL-12、TIMP-1的表达水平及其与Wanger分级的相关性

目的分析糖尿病足患者血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、白细胞介素-12(IL-12)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)的表达水平及其与Wanger分级的相关性。方法选取2017年7月至2019年6月十堰市太和医院收治的142例有糖尿病足的2型糖尿病患者作为观察组,选择同期收治的142例无糖尿病足的2型糖尿病患者作为对照组。比较两组患者及观察组不同病情程度患者血清IGF-1、IL-12、TIMP-1的水平,并分析各血清指标与Wanger分级的相关性。结果观察组患者血清IGF-1、TIMP-1低于对照组[(175.2±17.3)μg/L比(201.8±15.6)μg/L、(208.5±30.4)μg/L比(234.3±49.3)μg/L],IL-12高于对照组[(86.5±13.3)mg/L比(64.2±10.2)mg/L](P<0.01)。Wagner 2~3级和Wagner 4~5级的糖尿病足患者血清IGF-1、TIMP-1低于Wagner 0~1级患者[(173.6±13.3)μg/L、(161.8±11.4)μg/L比(187.3±15.4)μg/L,(209.4±15.1)μg/L、(195.4±14.9)μg/L比(217.4±12.5)μg/L],Wagner 4~5级低于Wagner 2~3级患者(P<0.01);Wagner 2~3级和Wagner 4~5级的血清IL-12水平高于Wagner 0~1级患者[(85.4±13.2)mg/L、(101.9±13.9)mg/L比(75.8±12.3)mg/L],Wagner 4~5级高于Wagner 2~3级(P<0.01)。糖尿病足患者血清IGF-1、TIMP-1水平与Wagner分级呈负相关(r=-0.431,P<0.01;r=-0.399,P<0.01),IL-12水平与Wagner分级呈正相关(r=0.695,P<0.01)。结论糖尿病足患者中血清IGF-1、TIMP-1呈低表达,与Wagner分级呈负相关,而IL-12呈高表达,与Wagner分级呈正相关,可为临床评估糖尿病足病情提供参考依据。

沉默cFLIP在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用机制研究

目的探讨沉默细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)对重症急性胰腺炎(SAP)导致的肺损伤的影响及其可能的作用机制。方法分别取12只SD大鼠,随机分为对照组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA1组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA2组和cFLIPL(或cFLIPS)siRNA3组,筛选抑制率最高的cFLIPL siRNA和cFLIPS siRNA。50只SD大鼠随机分成假手术组、模型对照组、cFLIP siRNA-NC组、cFLIPS siRNA组、cFLIPL siRNA组,每组各10只。通过胰胆管内逆行注射3%牛磺胆酸钠溶液建立SAP模型,建模成功后,cFLIPS siRNA、cFLIPL siRNA和cFLIP siRNA-NC组大鼠尾静脉注射对应siRNA溶液,其余组注射等量0.9%NaCl溶液。HE染色检测肺组织病理学变化;ELISA检测IL-6、IL-1β和TNF-α含量;全自动分析仪检测静脉血白细胞数、中性粒细胞数;流式细胞术检测中性粒细胞凋亡;Western blotting检测中性粒细胞RIP1和caspase-8蛋白表达。结果cFLIPL siRNA2组以及cFLIPS siRNA1组干扰效率最明显,因此选择这2组进行后续实验(后续称为cFLIPL siRNA组和cFLIPL siRNA组)。与模型对照组大鼠相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组大鼠肺泡结构损伤减轻,肺泡壁变薄,炎症细胞浸润减少;与模型对照组相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组IL-6、IL-1β和TNF-α含量均明显降低,静脉血白细胞数、中性粒细胞数明显降低,中性粒细胞凋亡率明显升高,cFLIPL、cFLIPS和RIP1蛋白表达量明显降低,caspase-8蛋白表达量明显升高;以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论本研究结果表明,靶向沉默cFLIP可能通过上调caspase-8和抑制RIP1的表达,促进中性粒细胞凋亡,减少炎症介质IL-6、IL-1β和TNF-α释放,抑制肺组织中的中性粒细胞浸润,缓解SAP导致的肺损伤,在SAP中发挥保护作用。

胃癌组织中c-FLIP、NF-κBp65的表达变化及意义

目的探讨细胞型Fas相关的死亡区域蛋白样白介素-1转换酶抑制蛋白(c-FLIP)、细胞核因子κB(NF-κB)在胃癌发生、发展中的作用。方法选择胃癌组织标本80份(胃癌组)和癌旁组织80份(癌旁组),采用免疫组化法检测两组的c-FLIP、NF-κB p65,分析其与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组c-FLIP、NF-κB p65阳性率明显高于癌旁组(P均<0.05);c-FLIP的表达与胃癌临床分期、分化程度、淋巴结转移、术后复发相关(P均<0.05),NF-κB p65的表达与浸润深度、分化程度、淋巴结转移、术后复发相关(P均<0.05);c-FLIP和NF-κB p65在胃癌组织中的表达呈正相关(r=0.303,P=0.006)。结论 c-FLIP、NF-κB p65的高表达可能在胃癌的发生、发展中起重要作用。

IGFBP-5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义

目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-5(IGFBP-5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)及高危型人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中的表达,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR及免疫组织化学SP法检测28例正常宫颈组织、37例CIN、40例宫颈癌组织中IGFBP-5、cFLIP表达,二代杂交捕获法检测上述患者宫颈分泌物中高危型HPV DNA。结果IGFBP-5蛋白在正常组织、CIN、宫颈癌中表达差异有统计学意义(P<0.05),在CINⅡ/Ⅲ组达高峰,在宫颈浸润癌中IGFBP-5表达下降,且与临床分期、病理分化程度及淋巴结转移有关。IGFBP-5 mRNA在宫颈癌中高于正常组织,但低于CIN组(P<0.05)。cFLIP蛋白及mRNA在正常组织未见表达,在CIN及宫颈癌中随病变程度加深而表达量增加,各组表达差异有统计学意义(P<0.05)。HPV阳性率在CIN及宫颈癌中高于正常组(P<0.05)。结论IGFBP-5及cFLIP与宫颈病变的发展有关,可用于判断患者病情变化及预后。

氨溴索联合仙璐贝治疗慢性鼻-鼻窦炎患儿的效果及对炎性因子、免疫功能的影响

目的探讨氨溴索联合仙璐贝治疗慢性鼻-鼻窦炎患儿的临床效果及对Toll样受体9(TLR-9)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及炎性因子水平的影响。方法选取2018年5月—2020年5月收治慢性鼻-鼻窦炎患儿100例,按照治疗方法分为对照组和观察组各50例,对照组给予氨溴索治疗,观察组在对照组基础上给予仙璐贝治疗。比较2组治疗后外周血参数变化情况、视觉模拟评分法(VAS)评分、鼻内镜检查量化系统(Lund-Lennedy)评分、鼻窦CT评分、TLR-9、白细胞介素-17(IL-17)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、鼻纤毛传输功能、HMGB1、TGF-β1水平,观察2组治疗效果及不良反应发生情况。结果治疗后观察组白细胞计数、中性粒细胞计数、中性粒细胞计数/淋巴细胞计数低于对照组,淋巴细胞计数高于对照组(P<0.01)。治疗后观察组VAS评分、Lund-Lennedy评分、鼻窦CT评分低于对照组(P<0.01)。观察组治疗后IL-17、CRP、TNF-α、HMGB1水平及鼻纤毛传输功能低于对照组,TLR-9、TGF-β1高于对照组(P<0.05,P<0.01)。观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论氨溴索联合仙璐贝可有效改善慢性鼻-鼻窦炎患儿的临床症状、鼻黏膜纤毛传输功能,增强机体免疫功能,减轻机体炎症反应。