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不同制备方式的FAdV-4疫苗免疫效果评价
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作者 陈红秀 刘学 +3 位作者 张立霞 康福忠 朱秀同 任培森 《现代畜牧兽医》 2024年第9期17-21,共5页
研究旨在评估对比禽腺病毒4型(FAdV-4)悬浮培养、贴壁培养、亚单位蛋白(杆状表达)疫苗的免疫效果,为生产工艺选择合适技术路线提供参考。试验分别制备悬浮培养腺病毒、贴壁培养腺病毒、杆状表达亚单位蛋白疫苗,分别使用3种疫苗免疫SPF... 研究旨在评估对比禽腺病毒4型(FAdV-4)悬浮培养、贴壁培养、亚单位蛋白(杆状表达)疫苗的免疫效果,为生产工艺选择合适技术路线提供参考。试验分别制备悬浮培养腺病毒、贴壁培养腺病毒、杆状表达亚单位蛋白疫苗,分别使用3种疫苗免疫SPF鸡进行免疫效果评价。结果显示,悬浮毒液组鸡群血清中和抗体、ELISA抗体效价均最高,贴壁毒液组鸡群两种抗体效价与其相近;亚单位蛋白组鸡群抗体效价最低,尤其是中和抗体效价明显低于其他两组。攻毒后除亚单位蛋白组有1只死亡外,其他免疫组均无死亡情况。免疫8W后进行攻毒,悬浮毒液组、贴壁毒液组中和抗体效价和攻毒保护率均优于亚单位蛋白组。研究表明,综合各项指标,悬浮毒和贴壁培养毒免疫效果较好。 展开更多
关键词 fadv-4 禽腺病毒 悬浮培养 杆状病毒表达 免疫效果
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亮斑扁角水虻幼虫生物转化对鸡粪中FAdV-4的消减作用研究
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作者 陈帅 严婷婷 +8 位作者 董梦瑶 周煜琛 佘望军 李月 蔡珉敏 黄凤 张吉斌 喻子牛 郑龙玉 《化学与生物工程》 CAS 北大核心 2024年第1期21-27,共7页
将亮斑扁角水虻幼虫(black soldier fly larvae,BSFL)接入含禽腺病毒血清4型(FAdV-4)的鸡粪中(0~18 d),采用TaqMan qPCR和16S rDNA高通量测序分析了BSFL转化过程中FAdV-4含量的动态变化和微生物区系演化。结果表明,BSFL转化能够显著消... 将亮斑扁角水虻幼虫(black soldier fly larvae,BSFL)接入含禽腺病毒血清4型(FAdV-4)的鸡粪中(0~18 d),采用TaqMan qPCR和16S rDNA高通量测序分析了BSFL转化过程中FAdV-4含量的动态变化和微生物区系演化。结果表明,BSFL转化能够显著消减鸡粪中的FAdV-4群体载量,转化18 d时FAdV-4减少率达到了99.63%,明显高于对照组(64.74%),并且增加BSFL接种量和日龄能增强对FAdV-4的消减作用;BSFL转化使得物料中的细菌多样性显著降低;厚壁菌门、假单胞菌属受到抑制,而拟杆菌门、异常球菌-栖热菌门丰度则明显提高;居绿藻菌属、特吕珀菌属在BSFL转化体系中与FAdV-4消减密切相关。 展开更多
关键词 亮斑扁角水虻 鸡粪 禽腺病毒血清4型 生物转化 16S rDNA测序
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鹌鹑源FAdV4 Fiber 2、ORF29区序列分析及其致病性研究 被引量:4
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作者 卢琴 罗青平 +7 位作者 张腾飞 罗玲 汪宏才 王红琳 温国元 张蓉蓉 商雨 邵华斌 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期36-42,共7页
本实验室前期在鹌鹑中分离到了1株4型禽腺病毒(FAdV-4)HB1812株,为了解该病毒全基因组序列和致病性,进行了全基因组测序和致病性实验。结果显示:HB1812株与国内的FAdV-4型流行毒株HN151025和JSJ13株的同源性最高,Fiber 2序列中G219A/D、... 本实验室前期在鹌鹑中分离到了1株4型禽腺病毒(FAdV-4)HB1812株,为了解该病毒全基因组序列和致病性,进行了全基因组测序和致病性实验。结果显示:HB1812株与国内的FAdV-4型流行毒株HN151025和JSJ13株的同源性最高,Fiber 2序列中G219A/D、E230Q、S260T、I299V、S304A、P307A、V319I、A380T、S389T、A400G、Q403Q、S406I、T412S、T434S、D438E、S452A、A458N和V477L位点存在点突变,ORF29区缺失了RMITPLYTRPP共11个氨基酸;致病性试验结果,HB1812株对SPF鸡具有致病性,可见典型的心包积液及肝脏发黄等临床症状,HE镜检可见心肌纤维排列紊乱及部分心肌断裂,心肌间隙可见大量红细胞,肝脏可见炎性细胞浸润并伴随少量肝细胞坏死。该研究是国内首次报道鹌鹑源禽腺病毒,为我国FAdV-4的传播方式、灭活疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 鹌鹑源 fadv-4 Fiber 2 ORF29 致病性
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绿原酸对FAdV-4的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响 被引量:6
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作者 崔淹鸽 李京帅 +1 位作者 李银聚 张春杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第12期4718-4724,共7页
试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4... 试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4感染组均经尿囊腔接种0.2 mL ELD_(50)为1.36×10^(7)拷贝的FAdV-4病毒,对照组注射等体积的生理盐水。用MTT法检测绿原酸的安全浓度(IC_(50)),计算每枚鸡胚接种绿原酸的含量;接种病毒后72 h后,剖检并无菌收集鸡胚肝脏进行病理观察,实时荧光定量PCR法检测病毒载量,ELISA法测定肝脏细胞因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及信号分子磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、核转录因子-κB(NF-κB)和NF-κBp65含量。MTT法测定结果表明,绿原酸对鸡胚成纤维细胞的IC_(50)为28.6μg/mL,每枚鸡胚接种0.2 mL的绿原酸含量分别为858、429、214.5(≈215)、107.25(≈107)和53.125(≈53)μg。FAdV-4病毒接种72 h后,FAdV-4感染组鸡胚肝脏边缘钝圆、肿大,变脆,呈土黄色或黄色,甚至出现坏死;随着绿原酸浓度增加,绿原酸组鸡胚肝脏肿胀渐不明显,坏死灶和出血瘀点减少;肝脏内病毒明显增殖,载量为7.8 log_(2)拷贝/mg,107μg绿原酸即可显著抑制FAdV-4在鸡胚肝脏中的增殖(P<0.05)。炎性细胞因子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加鸡胚肝脏中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量(P<0.01);53μg绿原酸组IL-1β和TNF-α含量极显著增加(P<0.01),107μg绿原酸组IL-6和TNF-α的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,107μg绿原酸组IL-1β和TNF-α的含量均极显著降低(P<0.01),215和429μg绿原酸组IL-6的含量显著降低(P<0.05),858μg绿原酸组IL-6的含量极显著降低(P<0.01)。细胞信号分子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量(P<0.01);53μg绿原酸组PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,53μg绿原酸PI3K和NF-κBp65的含量均显著降低(P<0.05);215μg绿原酸组NF-κB的含量显著降低(P<0.05),NF-κBp65的含量极显著降低(P<0.01);当绿原酸达429μg时,PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均极显著降低(P<0.01)。本试验结果表明,绿原酸能够抑制FAdV-4的增殖,且剂量依赖性地抑制炎性因子和信号分子的表达,说明绿原酸可用于鸡抗病毒和炎性相关疾病的防控。 展开更多
关键词 绿原酸 禽腺病毒血清4型(fadv-4) 炎性因子 信号分子 鸡胚
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FAdV-4感染对SPF鸡血清生化指标的影响
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作者 张桂枝 赵晓阳 +2 位作者 李新正 张晓战 靳双星 《家畜生态学报》 北大核心 2022年第6期71-75,共5页
由Ⅰ群禽腺病毒C种4型(FAdV-4)引起的鸡安卡拉病是近年来在中国广泛流行的一种急性、烈性传染病。为了解FAdV-4感染对鸡血清生化指标的影响,将分离鉴定的FAdV-4肝病毒液接种于易感日龄SPF鸡复制病理模型,同时设立对照,观察临床症状和病... 由Ⅰ群禽腺病毒C种4型(FAdV-4)引起的鸡安卡拉病是近年来在中国广泛流行的一种急性、烈性传染病。为了解FAdV-4感染对鸡血清生化指标的影响,将分离鉴定的FAdV-4肝病毒液接种于易感日龄SPF鸡复制病理模型,同时设立对照,观察临床症状和病理变化,采集血液测定血清生化指标。结果表明:感染组与对照组相比,血液中总胆红素、直接胆红素、间接胆红素均极显著升高(P<0.01),总蛋白和白蛋白显著下降(P<0.05),葡糖糖含量和谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性以及肌酐与尿酸水平均极显著上升(P<0.01)。说明FAdV-4感染可引起鸡肝功能、肾功能受损,导致血清生化指标发生明显变化。 展开更多
关键词 fadv-4 血清生化指标
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GPV·MDPV和FAdV-4三重PCR检测方法的建立
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作者 戴银 胡晓苗 +6 位作者 赵瑞宏 张丹俊 潘孝成 沈学怀 尹磊 周学利 侯宏艳 《安徽农业科学》 CAS 2021年第15期183-184,187,共3页
[目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法。[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核... [目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法。[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核酸为模板,进行PCR特异性、敏感性和重复性试验。[结果]采用所建立的方法能够扩增出GPV、MDPV和FAdV-4特异性片段,且不能检出鸭黄病毒(DFV)、鸭I型肝炎病毒(DVH-Ⅰ)和禽呼肠孤病毒(ARV);GPV、MDPV和FAdV-4核酸模板的最低检测量分别为20、2、2 pg;对8份阳性临床病料进行检测,可见MDPV、GPV和FAdV-4的检出率均为100%。[结论]建立的三重PCR检测方法能够对MDPV、GPV和FAdV-4这3种病毒进行快速、准确的诊断。 展开更多
关键词 鹅细小病毒(GPV) 番鸭细小病毒(MDPV) 禽腺病毒4型(fadv-4) 三重PCR检测
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饲粮精氨酸水平对肉仔鸡免疫功能及其抗FAdV-4影响的研究 被引量:15
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作者 林智鑫 周嘉鑫 +3 位作者 陈立圳 高玉云 王全溪 王长康 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期772-782,共11页
本试验旨在研究饲粮精氨酸水平对肉仔鸡免疫功能及其抗禽腺病毒I群4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的影响。选取1日龄罗斯(Ross)308肉仔鸡300只,随机分为5组(每组5个重复,每个重复12只),设置5个饲粮精氨酸水平组,分别为0.96%、1... 本试验旨在研究饲粮精氨酸水平对肉仔鸡免疫功能及其抗禽腺病毒I群4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的影响。选取1日龄罗斯(Ross)308肉仔鸡300只,随机分为5组(每组5个重复,每个重复12只),设置5个饲粮精氨酸水平组,分别为0.96%、1.20%、1.44%、1.68%和1.92%,试验鸡饲养至21日龄,各重复随机选取4只测定血清免疫指标和免疫相对器官指数。随后各重复再次随机选取6只,并分为感染组和对照组,感染组肌肉注射FAdV-4 NP毒株0.2 mL(TCID50=10-6.23/0.01 mL),对照组肌肉注射等量灭菌生理盐水,感染2 d后,统计死亡率、发病率,ELISA测定肝组织iNOS水平、qPCR测定肝iNOS mRNA表达量及病毒载量。结果表明:1)饲粮精氨酸水平为1.44%、1.68%和1.92%时,均能显著提高脾脏指数(P<0.05)且精氨酸水平为1.68%能显著提高胸腺指数(P<0.05),而精氨酸水平为0.96%会显著降低脾脏、胸腺和法氏囊指数(P<0.05)。2)1.68%精氨酸水平组能显著提高血清球蛋白(GLO)、IgG水平和球蛋白/白蛋白(G/A)比值(P<0.05);精氨酸水平为0.96%显著降低血清球蛋白和IgG水平(P<0.05)。3)精氨酸水平为0.96%可显著降低肉仔鸡血清中IL-1β、TNF-α、iNOS和NO水平(P<0.05),而1.68%和1.92%精氨酸水平组均能显著提高肉仔鸡血清中IL-1β、TNF-α、IFN-γ和iNOS水平(P<0.05)。4)肉鸡感染FAdV-4后,0.96%精氨酸水平组的死亡率会显著高于1.20%、1.44%、1.68%和1.92%组(P<0.05)。5)ELISA测定结果显示,1.44%、1.68%和1.92%精氨酸水平组能显著提高感染后的肝组织iNOS水平。6)1.44%、1.68%和1.92%精氨酸水平组均能显著提高肝iNOS mRNA表达水平(P<0.05);肉鸡感染FAdV-4,iNOS mRNA水平均会显著降低(P<0.05),1.44%、1.68%和1.92%精氨酸水平组能提高感染FAdV-4后肝iNOS mRNA水平(P<0.05)并显著降低肝的病毒载量(P<0.05)。由此可见,肉仔鸡饲粮中精氨酸的不足会降低其机体的免疫功能及抗FAdV-4病毒能力。提高肉仔鸡饲粮中精氨酸水平不仅能提高免疫器官指数、血清免疫因子水平及肝iNOS mRNA表达水平,降低肝的病毒载量,从而提高机体免疫功能和抗病毒能力。 展开更多
关键词 精氨酸 免疫功能 INOS fadv-4
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麻黄鸡ALV-J、FAdV-4、FWPV混合感染的诊断 被引量:2
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作者 张小波 温贵兰 +4 位作者 张喜懿 陈广 刘蔓蔓 胡璇 孙芸 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第3期82-87,共6页
为了确定贵州省某规模养殖场病鸡发病的原因,本试验对发病鸡进行了临床剖检,取其鸡冠、肝脏、心脏、脾脏和肾脏等病料组织进行了细菌分离培养,并进行了鸡痘病毒(FWPV)、J亚型禽白血病病毒(ALV-J)和血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的PCR检测。... 为了确定贵州省某规模养殖场病鸡发病的原因,本试验对发病鸡进行了临床剖检,取其鸡冠、肝脏、心脏、脾脏和肾脏等病料组织进行了细菌分离培养,并进行了鸡痘病毒(FWPV)、J亚型禽白血病病毒(ALV-J)和血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的PCR检测。结果显示:实验室剖检可见病鸡存在鸡冠痘状结痂、肝脏肿瘤结节、心包积液、脾脏肿大等症状;细菌分离培养无菌落形成;基于ALV-J gp85、FAdV-4 penton、FWPV TK基因片段的PCR检测均呈阳性;随后的ALV-J gp85、FAdV-4 penton、FWPV TK基因克隆及序列分析进一步揭示了3种病毒的遗传进化状况。因此,送检病鸡确诊为ALV-J、FAdV-4、FWPV混合感染,依据确诊结果向有关养殖场提出了合理的防治措施建议。 展开更多
关键词 麻黄鸡 ALV-J fadv-4 FWPV 混合感染 PCR检测
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高致病性FAdV-4分离株fiber2结构蛋白表达和细胞内定位的分析 被引量:1
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作者 李梅珍 洪琴 +1 位作者 邓翔飞 陈芳芳 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2022年第2期259-264,共6页
初步鉴定一株高致病性4型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)并研究其生物学特性。应用PCR、动物实验、免疫印迹技术和激光共聚焦鉴定其致病性和传播途径,分析fiber2蛋白的表达特性及其在细胞内定位。结果显示,所分离的毒株... 初步鉴定一株高致病性4型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)并研究其生物学特性。应用PCR、动物实验、免疫印迹技术和激光共聚焦鉴定其致病性和传播途径,分析fiber2蛋白的表达特性及其在细胞内定位。结果显示,所分离的毒株为FAdV-4型强毒株,对鸡的致死率达100%,对鸭无明显致病性;病毒可以经过滴鼻点眼感染而非经过口腔感染;PCR扩增的fiber2基因的大小为1 440 bp,所构建的含fiber2基因的重组真核和原核表达质粒均可正确表达;共聚焦结果显示,fiber2蛋白主要定位于细胞核。结果可为进一步研究安徽省地区高致病性禽腺病毒的感染和疫苗制备提供基础。 展开更多
关键词 fadv-4 分离鉴定 fiber2 蛋白表达 细胞定位
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2015-2020年我国禽腺病毒流行病学调查及高致病性FAdV-4分离株遗传变异性分析 被引量:16
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作者 冯敬敬 牛登云 +3 位作者 马利芳 段宝敏 史秋颖 李颖 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第5期92-98,共7页
为了解目前我国Ⅰ群禽腺病毒的流行情况,本中心以临床诊断、分子生物学检测、血清学检测和LMH细胞病毒分离等方法对全国重点养殖家禽和水禽的区域进行跟踪检测。本实验室于2015-2020年,从北京、天津、河北、山东等30余个省份共收集到709... 为了解目前我国Ⅰ群禽腺病毒的流行情况,本中心以临床诊断、分子生物学检测、血清学检测和LMH细胞病毒分离等方法对全国重点养殖家禽和水禽的区域进行跟踪检测。本实验室于2015-2020年,从北京、天津、河北、山东等30余个省份共收集到7098份疑似样品,hexon基因测序成功1668份,其中FAdV-1型129份、FAdV-2型89份、FAdV-3型34份、FAdV-4型638份、FAdV-5型36份、FAdV-6型5份、FAdV-7型13份、FAdV-8a型177份、FAdV-8b型193份、FAdV-9型8份、FAdV-10型135份和FAdV-11型211份。将FAdV阴性样品全部接种LMH细胞进行病毒分离,共得到分离株703株,其中FAdV-4型分离株439株。高致病性FAdV-4型437株,与高致病性FAdV-4参考株同源性为99.1%~100%,非致病性分离株2株,与ON1参考株同源性为99.6%~100%。hexon基因的188、193、195、238和240位氨基酸也出现变异。 展开更多
关键词 高致病性fadv-4 禽腺病毒 hexon基因
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高致病性FAdV-4传代中的毒力和Fiber2基因的比对分析
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作者 洪琴 邓翔飞 +2 位作者 周香 徐彬 陈芳芳 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第2期249-254,共6页
为筛选禽腺病毒疫苗株和制备亚单位疫苗提供科学依据,探明高致病性禽腺病毒C亚型4血清型(FAdV-4)毒株在传代中的毒力变化以及不同感染方式对雏鸡死亡率的影响,首先制备2~15代的高致病性FAdV-4尿囊液,用LMH细胞检测第2、4、8和15代尿囊... 为筛选禽腺病毒疫苗株和制备亚单位疫苗提供科学依据,探明高致病性禽腺病毒C亚型4血清型(FAdV-4)毒株在传代中的毒力变化以及不同感染方式对雏鸡死亡率的影响,首先制备2~15代的高致病性FAdV-4尿囊液,用LMH细胞检测第2、4、8和15代尿囊液的半数细胞感染量(TCID_(50));其次选取的4个代次尿囊液分别通过黏膜(点眼)和颈背部皮下途径接种SPF雏鸡,观察动物的死亡率;最后应用PCR方法扩增主要结构蛋白Fiber2基因序列并进行比对分析。结果表明:所有制备的2~15代FAdV-4毒株均在5~7 d内致鸡胚死亡(100%),4个代次毒株的TCID_(50)为10^(6.5±0.2)/0.1 mL,不同代次毒株间的毒力差异不显著(P>0.05);选取的4个代次毒株经颈背部皮下接种雏鸡的死亡率为100%,死亡雏鸡出现典型的心包积液综合征。而经黏膜接种的雏鸡死亡率呈下降趋势,分别为80%、50%、30%和30%;不同代次毒株Fiber2基因序列没有发生变化。总之,不同代次毒株通过皮下接种后对雏鸡的致病力没有差异,但黏膜接种的死亡率则逐代下降,而主要结构蛋白Fiber2基因则没有出现碱基变异。 展开更多
关键词 强毒株fadv-4 毒力 致病性 Fiber2
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不同处理方式对外源病毒检测中FAdV-I检出限量的影响
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作者 侯力丹 刘丹 +5 位作者 薛麒 苏佳 翟天舒 李俊平 陈晓春 杨承槐 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期114-119,共6页
据报道Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-I)在禽活疫苗中的污染是其可能的传播途径之一,加强对活疫苗中FAdV-I检测至关重要。为探索建立FAdV-I检测标准,本研究参照《中华人民共和国兽药典》中外源病毒检测相关疫苗处理措施,对不同方式处理后FAdV-I检... 据报道Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-I)在禽活疫苗中的污染是其可能的传播途径之一,加强对活疫苗中FAdV-I检测至关重要。为探索建立FAdV-I检测标准,本研究参照《中华人民共和国兽药典》中外源病毒检测相关疫苗处理措施,对不同方式处理后FAdV-I检测的影响进行了摸索。结果显示:当离心力不大于8000×g时,4℃离心10 min不会引起FAdV-I病毒含量下降,10000×g和12000×g分别离心10 min,病毒含量分别下降50%和68%,8000×g离心后再经0.45、0.22μm滤膜各滤过一次,病毒含量下降68%;8000×g离心后0.45、0.22、0.1μm滤膜各滤过1次后,病毒含量下降90%,12000×g离心后0.45、0.22、0.1μm滤膜各滤过1次后,病毒含量下降95%;SPF鸡血清及检验中常用的抗血清中和疫苗过程中在4℃或37℃作用1 h均不会引起FAdV-I病毒含量降低。上述指标为疫苗中FAdV-I污染的检测方法建立提供了参考数据。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 活疫苗 外源病毒
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鸡cGAS基因的克隆、表达特性分析及FAdV-4感染前后亚细胞定位变化
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作者 曹影丽 刘琪 +6 位作者 柴震震 杨侃侃 梁月巧 宋祥军 邵颖 涂健 祁克宗 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期453-460,共8页
cGAS作为一种新型的胞质DNA受体,在宿主抵抗DNA病毒而触发的天然免疫中起着至关重要的作用。血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是无囊膜的一种双链DNA病毒,可引起鸡肝炎-心包积液综合征。为明确鸡cGAS(chcGAS)基因功... cGAS作为一种新型的胞质DNA受体,在宿主抵抗DNA病毒而触发的天然免疫中起着至关重要的作用。血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是无囊膜的一种双链DNA病毒,可引起鸡肝炎-心包积液综合征。为明确鸡cGAS(chcGAS)基因功能,探究在鸡肝癌(LMH)细胞中过表达chcGAS以及FAdV-4感染前后细胞定位的变化情况。本研究针对chcGAS序列设计引物进行PCR扩增,并分析该基因序列与其他物种之间的同源性以及预测该基因的结构域,构建重组质粒pET-32a-chcGAS进行原核表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定,利用激光共聚焦观察FAdV-4感染LMH细胞前后chcGAS细胞定位变化。结果表明,本试验克隆得到大小为1317 bp的chcGAS基因,与其他物种同源性为50.5%~84.4%,SDS-PAGE分析结果显示,chcGAS蛋白主要以可溶性蛋白质的形式在上清液处表达,目的蛋白质相对分子质量为75000,与预期大小相符。亚细胞定位结果显示,FAdV-4感染可导致定位于细胞核膜上的chcGAS蛋白转移到细胞质中。本研究结果为进一步研究FAdV-4与cGAS-STING信号通路的关联调控机制提供了科学依据。 展开更多
关键词 cGAS 血清4型禽腺病毒(fadv-4) 序列分析 原核表达 亚细胞定位
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全悬浮培养LMH细胞制备FAdV-4灭活疫苗的研究
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作者 秦红刚 韩兴 +7 位作者 秦伟 李晶梅 熊亮 余继钦 谢红玲 漆世华 李凌峰 石宝兰 《中国兽药杂志》 2023年第9期7-13,共7页
通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10^(6)/mL~1×10^(6)/mL接种,细胞密度最高达6×10^(6)/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-... 通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10^(6)/mL~1×10^(6)/mL接种,细胞密度最高达6×10^(6)/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-S细胞制备FAdV-4抗原的最优参数为:接毒时细胞密度2×10^(6)/mL~3×10^(6)/mL、接毒量0.1MOI~1MOI、接毒后48h~72h收毒,所获抗原病毒含量不低于10^(9.25)TCID_(50)/mL。试验鸡分别免疫0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.3mL疫苗,攻毒保护率分别为9/10、10/10、10/10、10/10,表明疫苗有效性良好。本试验成功建立了LMH全悬浮培养细胞株,确定了FAdV-4抗原的生物反应器悬浮培养工艺,验证了悬浮培养抗原的免疫原性,为高效FAdV-4灭活疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 LMH细胞 悬浮培养 fadv-4
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FADV-4环介导等温扩增-HNB可视化检测方法的建立和应用 被引量:5
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作者 姜朕元 赵艳 +6 位作者 王婷 张静 周海洋 李佳康 黄雪琳 黄勇 韩新锋 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第24期65-69,76,175,共7页
为了建立简便、快速的FADV-4环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法,试验以FADV-4高度保守的基因序列hexon基因为靶基因设计了6条引物,对反应体系的Mg^2+浓度、Bst DNA聚合酶用量、反应温度、反应持续时间进行优化,考察了优化体系的灵敏... 为了建立简便、快速的FADV-4环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法,试验以FADV-4高度保守的基因序列hexon基因为靶基因设计了6条引物,对反应体系的Mg^2+浓度、Bst DNA聚合酶用量、反应温度、反应持续时间进行优化,考察了优化体系的灵敏度及特异性。同时用建立的FADV-4 LAMP及LAMP-HNB可视化的检测方法对临床模拟样品进行检测。结果表明:当Mg^2+浓度为6 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为320 U/mL、反应温度为65℃、反应时间为60 min、HNB使用浓度为120μmol/L时反应最优。LAMP最低DNA检测浓度为1.46 pg/μL,灵敏度是PCR的100倍,临床模拟样品LAMP、LAMP-HNB检测结果与普通PCR检测结果完全符合。说明所建立的FADV-4 LAMP-HNB可视化检测方法适用于临床的快速诊断。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒血清4型 六邻体蛋白基因 环介导等温扩增 羟基萘酚蓝 可视化 检测
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DF-1细胞中TLR7编码基因的敲除及其抗FAdV-4感染的天然免疫应答
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作者 恽君雯 陈丽 +3 位作者 徐悦 鲍熹 冯磊 高崧 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第2期80-90,共11页
旨在构建高质量的禽源细胞系,应用CRISPR/Cas9技术实现鸡胚成纤维细胞(DF-1)的Toll样受体7(TLR7)编码基因的敲除,构建稳定的细胞培养禽腺病毒4型(FAdV-4)增殖体系。采用荧光定量PCR的方法对FAdV-4感染DF-1细胞后先天性免疫信号通路中效... 旨在构建高质量的禽源细胞系,应用CRISPR/Cas9技术实现鸡胚成纤维细胞(DF-1)的Toll样受体7(TLR7)编码基因的敲除,构建稳定的细胞培养禽腺病毒4型(FAdV-4)增殖体系。采用荧光定量PCR的方法对FAdV-4感染DF-1细胞后先天性免疫信号通路中效应分子进行检测,选择转录水平显著上调的基因TLR7作为研究对象;构建sgRNA载体与Cas9表达载体共转染DF-1细胞,经绿色荧光蛋白(GFP)阳性特征分选单克隆,PCR验证及增毒试验筛选后获得TLR7编码序列敲除的DF-1-TLR7-KO#3单克隆细胞系,命名为DF-1-TLR7-KO细胞。对敲除前后DF-1细胞的天然免疫系统对FAdV-4感染的拮抗效应和病毒在不同细胞中增殖效率的差异进行了研究。结果表明:成功构建的TLR7编码序列敲除的DF-1细胞系,与原始细胞相比病毒增殖能力提高。试验对细胞的天然免疫系统与FAdV-4感染的互作机理进行了初步探索,为更好地研究宿主对病毒入侵的应答机制,提高疫苗生产效能提供了研究基础和生物材料储备。 展开更多
关键词 免疫应答 DF-1细胞 禽腺病毒4型 CRISPR/Cas9 TOLL样受体7
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血清1型FAdV TaqMan探针荧光定量PCR方法的建立及应用
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作者 刘琳 宋亚鹏 +5 位作者 刘明洋 高文明 陶明月 宋晓楠 张宜娜 李新生 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期881-886,共6页
为特异性地检测家禽中血清1型禽腺病毒(fowl adenovirus, FAdV)的感染,本研究以血清1型FAdV保守的52K基因为模板设计引物和探针,通过矩阵法优化后建立了针对该病毒的TaqMan探针实时荧光定量PCR方法,并用该方法检测1日龄SPF鸡攻毒后咽、... 为特异性地检测家禽中血清1型禽腺病毒(fowl adenovirus, FAdV)的感染,本研究以血清1型FAdV保守的52K基因为模板设计引物和探针,通过矩阵法优化后建立了针对该病毒的TaqMan探针实时荧光定量PCR方法,并用该方法检测1日龄SPF鸡攻毒后咽、肛拭子排毒量及组织病毒载量。结果显示,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,只能检测出血清1型FAdV,对其他血清型FAdV和其他禽类病毒均无阳性扩增;最低检测限度低至10拷贝/μL;组间和组内离散度均小于2%;标准曲线为y=-3.836x+41.791,相关系数R2=0.996,具有良好的线性关系;对SPF鸡攻毒结果显示,在攻毒后第1~14日的咽、肛拭子均可检测到血清1型FAdV,在攻毒后第8日的肝脏、肾脏、肌胃、回肠中也可检测到病毒,而腺胃和盲肠中未检出病毒。本研究为血清1型FAdV的定量检测提供了方法。 展开更多
关键词 血清1型fadv TAQMAN探针 荧光定量PCR
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Ⅰ群禽腺病毒FAdV-4和FAdV-8灭活疫苗的制备及免疫效果 被引量:6
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作者 张林吉 迟兰 +4 位作者 李心海 王玉燕 任士飞 张小荣 吴艳涛 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1715-1719,共5页
为提高鸡心包积液-肝炎综合征(hydropericardium hepatitis syndrome,HHS)和鸡包涵体肝炎(inclusion body hepatistis,IBH)疾病的防控能力,研制有效防控Ⅰ群禽腺病毒(FAdV)疫苗。本研究将实验室分离鉴定的FAdV-4 SN2016株和FAdV-8标准毒... 为提高鸡心包积液-肝炎综合征(hydropericardium hepatitis syndrome,HHS)和鸡包涵体肝炎(inclusion body hepatistis,IBH)疾病的防控能力,研制有效防控Ⅰ群禽腺病毒(FAdV)疫苗。本研究将实验室分离鉴定的FAdV-4 SN2016株和FAdV-8标准毒株,采用鸡胚增殖方式,优化最佳接种剂量、收获时间及甲醛的灭活条件,病毒抗原以3∶1比例混合,制备双价油乳剂灭活疫苗,检验疫苗性状、监测免疫后雏鸡的抗体水平及对其免疫保护效果。病毒采用卵黄囊接种,尿囊液中病毒粒子含量分别达到4.6×10^8和7.8×10^7拷贝/mL;灭活条件为终浓度1.5‰的甲醛灭活24 h;制备的疫苗为油包水剂型,物理性状稳定,无菌检测合格,4℃保存期可达12个月;雏鸡免疫抗体水平监测结果显示,免疫后3~4周抗体水平达到高峰,第6周依然维持较高水平,制备的双价油乳剂灭活疫苗可以有效抵抗单病毒和双病毒的攻击。研究结果显示制备的FAdV-4 SN2016和FAdV-8双价油乳剂灭活疫苗性状稳定、保存期长,免疫效果好,能有效抵抗病毒攻击,为HHS和IBH疫病的防控提供有效手段。 展开更多
关键词 HHS IBH fadv-4 SN2016 FAV-8 双价油乳剂灭活疫苗
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Pathogenicity of an FAdV-4 isolate to chickens and its genomic analysis 被引量:11
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作者 Kai-kun MO Chen-fei LYU +6 位作者 Shang-shang CAO Xia LI Gang XING Yan YAN Xiao-juan ZHENG Min LIAO Ji-yong ZHOU 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2019年第9期740-755,共16页
Fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4)strain SD1511 was isolated from chickens with severe inclusion body hepatitis and hydropericardium syndrome in Shandong Province,China.The isolate was cultured in primary chicken embr... Fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4)strain SD1511 was isolated from chickens with severe inclusion body hepatitis and hydropericardium syndrome in Shandong Province,China.The isolate was cultured in primary chicken embryo kidney cells.A study of pathogenicity indicated that SD1511 readily infected 7–35-d-old chickens by intramuscular injection and intranasal and oral routes,causing 50%–100%mortality.The 35-d-old chickens suffered more severe infection than 7-and 21-d-old chickens with mortality highest in the intramuscular injection group.The serum from surviving chickens showed potent viral neutralizing capability.The complete genome of SD1511 was sequenced and analyzed.The strain was found to belong to the FAdV-4 cluster with more than 99%identity with the virulent FAdV-4 strains isolated in China in recent years except for some distinct variations,including deletions of open reading frame 27(ORF27),ORF48,and part of ORF19.Our findings suggest that SD1511 might be used as a prototype strain for the study of pathogenesis and vaccine development. 展开更多
关键词 Fowl adenovirus serotype 4(fadv-4) PATHOGENICITY Infection way Virus neutralization activity Genome analysis
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一株鹅源禽腺病毒4型的分离及致病性
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作者 王艳 高亚东 +1 位作者 蒋成辉 曾巧英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4232-4240,共9页
2023年,昆明一朗德鹅场部分雏鹅出现软脖子症状,伴有零星死亡,病变疑似禽心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)。本研究旨在对本次雏鹅病因进行分子病毒学诊断和病原的致病性研究。采集肝病料接种鸡肝癌细胞(leghorn male hep... 2023年,昆明一朗德鹅场部分雏鹅出现软脖子症状,伴有零星死亡,病变疑似禽心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)。本研究旨在对本次雏鹅病因进行分子病毒学诊断和病原的致病性研究。采集肝病料接种鸡肝癌细胞(leghorn male hepatocellular cells,LMH):1)观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),取培养液负染、电镜观察病毒粒子形态;2)靶标4型禽腺病毒(serotype 4 fowl adenovirus,FAdV-4)的衣壳蛋白编码基因hexon基因进行PCR诊断,对扩增基因序列进行遗传演化分析;3)以5×10^(5.5)TCID_(50)/羽的剂量皮下注射感染10日龄健康泰州鹅,进行动物回归感染以确证其致病性。结果显示,将病料上清接种LMH细胞48~72 h后CPE明显,细胞圆缩、间隙变大、随后碎裂、逐渐脱落,电镜观察见二十面体无囊膜病毒粒子;PCR检测FAdV-4阳性,分离纯化病毒,命名为YNKM2023株;hexon基因的遗传演化分析显示,分离株与国内已有的鸡、鸭FAdV-4流行毒株相似性高达99.8%~99.9%,与印度分离株相似性为99.5%~99.6%。接种感染后,泰州鹅未出现典型的临床症状,但感染后3 d开始出现HPS的特征性病变,感染后6 d检测到中和抗体。综上,本研究成功分离到鹅源FAdV-4/YNKM2023株,该毒株与国内已有的鸡鸭流行毒株高度同源,尚未发生明显的基因漂移。分离株可以感染鹅,病毒可以在雏鹅体内复制引起组织器官病变并产生免疫应答,对鹅表现出一定的致病性,这有助于了解FAdV-4在鹅群的流行情况及其对雏鹅的致病性。 展开更多
关键词 鹅源 禽腺病毒4型(fadv-4) 分离 致病性
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