咖啡因通过FAK/AKT/ROCK通路调控人脑胶质瘤U-373MG细胞的恶性生物学行为

目的:探讨咖啡因通过调节FAK/AKT/ROCK信号通路来影响人脑胶质瘤U-373MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力。方法:常规培养U-373MG细胞,将其分为对照组、咖啡因低剂量(1 mmol/L)组、咖啡因高剂量(2 mmol/L)组、PF573228组(FAK抑制剂,1μmol/L)、咖啡因高剂量+SC79组(AKT激活剂,8mg/L)。用CCK-8法、Transwell小室实验、流式细胞术和WB法分别检测各组U-373MG细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡,以及U-373MG细胞中p-FAK、p-AKT、p-ROCK、Ki67、MMP-9蛋白表达水平。建立U-373MG细胞裸鼠移植瘤模型,观察咖啡因对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中相关蛋白的表达。结果:咖啡因、PF573228可显著抑制U-373MG细胞的增殖、迁移、侵袭能力,促进U-373MG细胞凋亡,抑制p-FAK、p-AKT、p-ROCK、Ki67、MMP-9蛋白的表达(均P<0.05),SC79则可部分逆转咖啡因对U-373MG细胞的作用(均P<0.05)。咖啡因可显著抑制移植瘤的生长及移植瘤组织中上述相关蛋白的表达(均P<0.05)。结论:咖啡因可通过抑制FAK/AKT/ROCK信号通路抑制U-373MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡。

DCLK1激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路促进A549细胞的恶性行为

目的探讨双肾上腺素皮质样激酶1(DCLK1)对A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响,并探究可能涉及的相关分子机制。方法慢病毒感染法建立稳定表达DCLK1分子的A549细胞系,反转录-聚合酶链技术和蛋白质印记法进行鉴定。CCK-8与平板克隆实验检测过表达DCLK1后细胞增殖能力变化。Transwell实验观察过表达DCLK1对细胞迁移与侵袭能力的影响。癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析DCLK1对肺腺癌细胞的调控富集通路,蛋白质印记法进行验证。结果DCLK1在A549细胞中过表达可增加细胞的增殖、迁移与侵袭等能力,而抑制FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路可削弱DCLK1对A549细胞的恶性调控。结论DCLK1通过激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进A549细胞的恶性生物学行为。

FAK-PI3K/AKT信号通路在新生大鼠颅盖骨生长发育过程中作用机制的研究

目的通过对不同时期的SD大鼠颅盖骨进行检测,探究大鼠颅盖骨的生长特点。方法选取同窝1、4、7、10、12周SD大鼠颅盖骨(每周3只),使用Real-time PCR和Western blot技术检测颅盖骨中局部粘着斑激酶(FAK)-磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路的表达情况,并通过相关性分析FAK-PI3K/AKT在颅盖骨生长发育过程中的作用情况。结果大鼠脑容积的增长与颅盖骨厚度的变化是同步增长;FAK的表达变化与大鼠各经线的变化呈正相关;FAK的表达变化与PI3K/AKT的表达变化呈正相关。结论FAK的表达变化与大鼠头颅的生长发育规律具有相关性,FAK通过激活PI3K/AKT信号通路在颅盖骨中发挥作用,FAK可能作为颅骨快速生长发育期的标志物,为临床上的颅骨缺损修复治疗中时机的选择提供基础理论依据。

结直肠癌中FAK、FAK pY397、Akt、NF-κB表达及相关性研究

目的:检测黏着斑激酶(FAK)、磷酸化FAK(FAK pY397)、Akt和细胞核因子(NF-κB)在结直肠癌组织中的表达,并探讨其相关性。方法:采用免疫组织化学SP法,检测74例结直肠癌组织与10例正常结肠组织中FAK、FAK pY397、Akt和NF-κB的表达。结果:结直肠癌组织标本中FAK、FAK pY397、Akt和NF-κB的阳性率分别为82.43%、45.95%、52.70%和59.46%,除FAK pY397外,FAK、Akt、NF-κB均与正常结肠壁组织表达的差异显著(P<0.05)。FAK表达与分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),但不受患者性别、年龄、肿瘤的大小及位置、Dukes分期的影响。Akt阳性表达与分化程度显著相关(P<0.05),NF-κB表达与淋巴结转移显著有关(P<0.05),并且Akt、NF-κB表达与FAK表达呈显著正相关(P<0.05)。结论:FAK、Akt、NF-κB在结直肠癌组织中均高表达,且Akt、NF-κB表达与FAK有显著正相关性,提示生存信号传导通路FAK/Akt/NF-κB在结直肠癌的发生、演进中起重要作用。

FAK及pAKT在乳腺癌中的表达及预后分析

目的探讨黏着斑激酶(FAK)及磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)在乳腺癌组织中的表达情况及临床价值。方法收集从1997至2008年于我院行乳腺癌根治手术的271例有完整存档蜡块标本,采用组织微阵列芯片和免疫组化SP法检测FAK和p-AKT在乳腺癌组织中的表达,并对两者的表达情况及其与乳腺癌临床病理因素和患者生存情况的关系进行分析。结果 FAK、p-AKT的高表达率分别为53.9%(146/271)、36.2%(98/271),两者的表达水平呈正相关(r=0.397,P<0.01)。FAK/p AKT同时均高表达的比率为29.2%(79/271)。FAK高表达与孕激素受体(PR)呈负相关(P=0.046),p AKT高表达与组织学分级(P=0.024)、淋巴结转移(P=0.016)呈正相关,FAK与p AKT共同高表达的患者更倾向于出现淋巴结转移、骨/软组织转移(P=0.019,P=0.022)。FAK高表达人群中,p-AKT高表达者的总生存期(OS)明显短于低表达者(P=0.047)。单独分析FAK及p-AKT表达与总体人群预后无关,将两者联合分析后,FAK/p AKT均高表达患者的OS明显缩短(P=0.027)。亚组分析显示:HER2阳性患者,FAK/p AKT高表达者的OS缩短(P=0.015),FAK/p AKT高表达是HER2阳性乳腺癌的独立预后因素(HR=3.352,P=0.021)。结论在乳腺癌组织中FAK和p-AKT两者密切相关,FAK/p AKT联合检测能够预测乳腺癌患者的预后,并能够成为HER2阳性乳腺癌的独立预后指标。

悬浮培养GLC-82肺肿瘤细胞积聚体与蛋白激酶FAK、AKT、ERK和SRC活化的关系

背景与目的:蛋白激酶FAK部分介导肿瘤细胞在悬浮培养下细胞积聚体的形成,从而阻止细胞发生凋亡和促进细胞增殖,但是参与细胞积聚体形成的FAK下游通路尚不清楚。本研究旨在研究蛋白激酶FAK及其可能的下游分子ERK、AKT和SRC活化在悬浮状态肺癌GLC-82细胞积聚中的作用。方法:用polyHEMA悬浮培养观察肺正常细胞HBE和肿瘤细胞GLC-82积聚体形态;细胞凋亡用DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状DNA分析;细胞转化能力用软琼脂糖集落形成实验分析;磷酸化蛋白激酶水平用免疫印迹实验检测;RNA干扰实验降低FAK蛋白水平的表达。结果:GLC-82肺腺癌细胞在polyHEMA悬浮状态下能够存活和形成积聚体,肺正常细胞HBE在polyHEMA悬浮状态下发生凋亡和不形成积聚体。磷酸化FAK、ERK、AKT和SRC的水平和GLC-82积聚体有关。沉默FAK蛋白的表达,能够部分地阻断肿瘤细胞积聚体的形成,降低磷酸化ERK和AKT水平,以及降低软琼脂集落形成能力。FAKRNA干扰前后的GLC-82细胞软琼脂集落形成率分别为(12.2±1.1)%和(3.6±0.7)%(P=0.001)。结论:GLC-82肺癌细胞积聚体的形成部分由FAK信号通路介导,ERK和AKT是FAK的下游通路蛋白。

刺芒柄花素通过FAK/AKT/Bcl-2通路促进外阴鳞癌SW962细胞凋亡

目的探讨刺芒柄花素(FMN)对外阴鳞癌SW962细胞凋亡的影响及其相关机制。方法通过CCK8方法和流式细胞仪检测FMN对SW962细胞增殖和凋亡的影响;Westernblot方法检测FMN对细胞凋亡和FAK通路相关蛋白表达的影响;通过EGF激活FAK通路,检测FMN对激活后FAK通路和凋亡相关蛋白表达的影响。结果FMN呈浓度依赖性抑制SW962细胞增殖,促进SW962细胞凋亡;FMN上调Bax、Cleaved-caspase3表达,下调pFAK、p-AKT、Bcl-2表达。EGF处理后p-FAK、p-AKT、Bcl-2表达上调,Bax、Cleaved-caspase3表达下调,FMN可逆转EGF的作用。结论刺芒柄花素通过FAK/AKT/Bcl-2通路促进外阴鳞癌SW962细胞凋亡。

β咔啉类生物碱通过FAK/PI3K/AKT/mTOR通路对人胃癌SGC-7901荷瘤小鼠的影响

目的:探讨新疆地道药材骆驼蓬提取物β咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901荷瘤小鼠移植瘤组织中FAK、PI3K、AKT、mTOR、BCL-2和Bax表达的影响。方法:构建小鼠移植瘤模型,50只昆明小鼠随机分为5组,分别为空白对照组、氟尿嘧啶组、β-咔啉类生物碱低、中、高剂量组,每组10只,计算抑瘤率,HE染色检测瘤组织病理学变化,采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,RT-PCR法检测FAK、PI3K、AKT、mTOR、BCL-2和Bax的mRNA表达,Westernblot和免疫组化法检测FAK、PI3K、AKT、mTOR、BCL-2和Bax蛋白表达。结果:β咔啉类生物碱中剂量和高剂量能抑制胃癌SGC-7901小鼠瘤体的生长,降低瘤重(P<0.01),其效果优于β咔啉类生物碱低剂量(P<0.05)。HE染色和TUNEL结果显示,β咔啉类生物碱处理后能破坏胃瘤细胞组织,诱导胃瘤细胞的凋亡。RT-PCR、Western blot和免疫组化法结果表明β咔啉类生物碱中剂量和高剂量能显著降低FAK、PI3K、AKT、mTOR和BCL-2蛋白表达(P<0.01),提高Bax蛋白的表达(P<0.01),其效果优于β咔啉类生物碱低剂量(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:β咔啉类生物碱对胃癌的抑制作用与降低BCL-2、FAK、PI3K、AKT、mTOR蛋白表达,升高Bax蛋白表达相关,表明β咔啉类生物碱可能是一种潜在的胃癌的治疗药物。

FAK/PI3K/AKt/mTOR信号通路相关蛋白在胃癌中的表达及意义

目的:探讨FAK、PI3K、AKT、mTOR蛋白在胃癌组织中表达与临床病理及生存的关系。方法:应用免疫组化的方法检测50例胃癌组织、48例癌旁组织、20例正常胃组织中FAK、PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白的表达。结果:FAK、p-AKt、p-mTOR在胃癌组织中的表达高于癌旁组织、正常胃组织(P < 0.01),其表达水平与浸润深度、临床分期、淋巴结转移呈正相关(P < 0.01, r = 0.81),与组织分化类型呈负相关(P < 0.01, r = ?0.85),与患者的性别、年龄、胃癌的部位无相关(P > 0.05);PI3K在胃癌组织中的表达高于癌旁组织、正常胃组织(P > 0.05),其表达水平与患者的性别、年龄、胃癌的部位、浸润深度、临床分期、淋巴结转移无相关(P > 0.05);生存分析显示,p-AKt、p-mTOR阳性表达与阴性表达患者的生存时间比较差异有统计意义(P < 0.01);FAK、PI3K阳性表达与阴性表达患者的生存时间比较差异无统计意义(P > 0.05)。结论:AKT、mTOR的异常表达参与了胃癌的演进过程,可能是胃癌患者预后的一个独立指标之一。

相思藤总黄酮基于FAK/PI3K/Akt信号通路抗CCl4大鼠肝纤维化作用机制的研究

目的:研究相思藤总黄酮(XSTF)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠HF的保护作用及其机制。方法:雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.2 mg/kg),XSTF高、中、低剂量组(800 mg/kg、400 mg/kg、200 mg/kg),每组12只,除正常对照组外,其余各组大鼠灌胃给予剂量50%CCl4花生油混合液(1 mL/kg)制备肝纤维化(HF)模型,2次/周。确定大鼠形成HF后连续4周,每日给予大鼠秋水仙碱和XSTF相应剂量药物,正常对照组和模型组给予相应体积的生理盐水。给药期间,除正常对照组外,其余各组同时继续造模处理。末次给药24 h后,收集血清及肝组织,检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;制备肝脏匀浆,检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝组织FAK、PI3K、Akt mRNA表达情况;免疫组化法检测肝组织中PI3K、Akt蛋白表达水平。结果:XSTF干预后可明显抑制CCl4诱导的肝脏氧化应激反应,与模型组大鼠相比,XSTF给药组血清中TNF-α、IL-6含量显著降低(P<0.05或P<0.01);肝组织中MDA含量降低(P<0.05或P<0.01),SOD、GSH-px的活性升高(P<0.05或P<0.01);免疫组化结果显示,PI3K、Akt蛋白表达水平明显上升(P<0.01);qPCR结果显示,FAK、PI3K、Akt的mRNA表达水平明显提升(P<0.01)。结论:XSTF对CCl4诱导的大鼠HF具有明显改善作用,可以明显减小肝组织损伤,其保护机制可能与减轻炎症反应,抑制FAK/PI3K/Akt信号传导通路有关。

EGF通过激活FAK—PI3K／AKT途径促进肺癌细胞增殖

目的探讨在EGF处理下，FAK—PI3K／AKT途径促进A549细胞增殖的作用。方法应用MTr法检测细胞的增殖，使用Western印迹检测FAK397位点及AKT的磷酸化水平，并应用RNAi干涉技术探讨各途径间的关系。结果MTT法证明EGF可以通过PI3K／AKT途径促进A549细胞的增殖，Westem印迹检测显示EGF处理可以促进FAK397位点和AKT的磷酸化。FAKRNAi结果表明EGF通过磷酸化FAK激活PI3K／AKT途径。结论EGF可以通过激活FAK—PI3K／AKT途径促进A549细胞增殖。

华蟾酥毒基通过FAK/PI3K/Akt通路抑制食管癌Kyse-520细胞迁移和侵袭

目的探讨华蟾酥毒基抑制食管癌Kyse-520细胞迁移和侵袭的相关机制。方法 CCK-8法检测Kyse-520细胞经不同浓度华蟾酥毒基作用12、24、48 h后的增殖活性;划痕愈合实验和Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭过程;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析Kyse-520细胞中FAK、Akt、PTEN、VEGF-A、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达;Western blot检测FAK、p-FAK(Tyr397)、Akt、p-Akt(Ser473)、PTEN、VEGF-A、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。结果 CCK-8结果显示,华蟾酥毒基可以抑制Kyse-520细胞增殖,呈现时间和浓度依赖性,划痕实验和Transwell小室实验结果表明,华蟾酥毒基可以抑制食管癌细胞迁移和侵袭;RT-qPCR和Western blot结果显示,华蟾酥毒基对FAK、Akt mRNA及总蛋白无明显影响,但可以下调p-FAK、p-Akt、VEGF-A、MMP-2、MMP-9表达,上调PTEN的表达。结论华蟾酥毒基通过诱导PTEN表达,下调FAK/PI3K/Akt信号通路,抑制食管癌Kyse-520细胞的迁移和侵袭。

PEG10基因对FAK介导的肝癌CAM-DR耐药模型中PI3K/Akt通路的影响

目的研究化疗药物顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、阿霉素(ADM)对PEG10基因稳定表达细胞LO2中FAK介导的肝癌CAM-DR耐药模型中PI3K/Akt通路的影响。方法选择PEG10基因稳定表达LO2细胞株,并构建细胞黏附介导的耐药LO2细胞模型(LO2/CAM-DR细胞),采用不同剂量的顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、阿霉素(ADM)作用LO2细胞、LO2/CAM-DR细胞,以及用FAK抑制剂预先干预的LO2/CAM-DR细胞,采用MTT法检测细胞存活率,比较各细胞组中药物的IC50及RI。Western blotting法检测药物作用后细胞中PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达水平;RT-PCR法检测药物处理后细胞中PI3K mRNA水平。结果 LO2细胞、LO2/CAM-DR细胞,以及用FAK抑制剂预先干预的LO2/CAM-DR细胞的存活率均与药物浓度呈负相关,LO2/CAM-DR细胞对药物的敏感性降低,各药作用后IC50均高于LO2细胞,DPP、5-FU和ADM的RI分别为1.345、2.551和2.643。采用FAK抑制剂预先干预的LO2/CAM-DR细胞对药物的敏感性高于LO2/CAM-DR细胞,差异有统计学意义(P<0.05),与LO2细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting检测结果:药物作用后LO2/CAM-DR细胞PI3K、p-AKT的表达水平均高于LO2细胞,差异有统计学意义(P<0.05),采用FAK抑制剂干预后,PI3K、p-AKT的表达水平下降,PI3K mRNA也下降。结论化疗药物与FAK抑制剂的联合使用可以提高化疗药物对肝癌耐药细胞的杀伤作用,下调FAK介导的肝癌CAM-DR耐药模型中PI3K/Akt通路。

β咔啉类生物碱对SGC-7901荷瘤裸鼠HGF/c-MET通路中FAK、PI3K、AKT信号通路影响

目的通过观察β-咔啉类生物碱对SGC-7901荷瘤裸鼠HGF/c-MET通路中PI3K/AKT、FAK信号分子的变化,探讨β-咔啉类生物碱抗胃癌信号通路的可能靶点。方法建立荷瘤裸鼠80只。采用随机数字表法将模型随机分为4组。分别为β咔啉类生物碱高、中、低组,空白对照组(给药方式:每天1次,连续14 d;空白对照组给予等体积的生理盐水,灌胃,每天1次,连用14 d)。5-FU组给予5 mg/L,每周1次,累计2周。记录各组裸鼠瘤体质量变化。使用HE染色,免疫组织化学染色细胞结构,Tunnel染色法观察细胞凋亡情况。RT-PCR方法检测PI3K/AKT、FAK的mRNA表达水平。Western Blot法检测PI3K/AKT、FAK蛋白表达水平。结果β咔啉类生物碱能抑制SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤细胞的增殖,诱导SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤凋亡,不同浓度的β-咔啉类生物碱作用于SGC-7901荷瘤裸鼠各组14 d后。随着浓度增加,瘤块质量均有降低(高剂量组和阳性对照组对比空白对照组差异有统计学意义P<0.05)。5-FU组,β咔啉类生物碱组中,低剂量组均有坏死,高剂量组肿瘤细胞坏死较为明显。FAK、Grb2、PI3Kp85a、p-PI3Kp85a、AKT、p-AKT的免疫组化结果显示随着β-咔啉类生物碱浓度的增加而蛋白表达逐渐降低,5-FU组和β咔啉类生物碱组对比空白对照组差异有统计学意义(P<0.05)。Tunnel染色镜结果显示:空白对照组肿瘤细胞凋亡最少,阳性组、中、低剂量组均有细胞凋亡,高剂量组肿瘤细胞凋亡率最高。5-FU组、β-咔啉类生物碱组Grb2、PI3Kp85a、FAKmRNA表达水平较空白对照组显著降低。β-咔啉类生物碱高剂量组和5-FU组Grb2、PI3Kp85a对比空白对照组mRNA水平降低(P<0.05)。β-咔啉类生物碱高剂量组p-PI3Kp85a、p-AKT表达对比空白对照组降低(P<0.05)。结论5-FU与β-咔啉类生物碱相比具有更有效的抑制SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤细胞增殖能力,可能与β-咔啉类生物碱抑制PI3Kp85a、AKT相关蛋白表达水平有关。

LASP1基因对人结直肠癌LOVO细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的探讨LASP1基因表达对人结肠癌(LOVO)细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响及其作用机制。方法分别构建LASP1过表达质粒和LASP1干扰质粒转染LOVO细胞,qRT-PCR验证LASP1mRNA转染结果。MTT法、Tunel染色分别检测细胞增殖活性和细胞的凋亡情况,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。Westernblot测定细胞LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达。结果质粒转染成功。LASP1过表达的LOVO细胞的增殖、迁移和侵袭能力增加,细胞凋亡率降低,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达升高(P<0.01)。而敲减LOVO细胞中LASP1的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,细胞凋亡率增加,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P<0.01)。结论LASP1可正向调控FAK/AKT信号通路,促进LOVO细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。

P38/AKT通路调控骨髓间充质干细胞在不同空间结构纳米纤维环支架中的定向分化

背景:以往研究表明多种材料可用于组织工程支架的构建,支架表面的拓扑结构特征对干细胞增殖、分化等生物学行为有调节作用,但其具体机制尚不明确。目的:研究骨髓间充质干细胞在纳米结构支架中定向分化过程中P38、AKT通路的作用。方法:构建3种结构不同的纳米纤维支架,即取向纳米纤维支架AFS、取向纳米纱支架AYS、三维多孔纳米纤维支架3-DPS;将大鼠骨髓间充质干细胞分别接种于3种纳米纤维支架表面,成软骨诱导培养后,分别进行细胞形态、黏附、增殖检测,利用qRT-PCR检测细胞关键表型分子(Ⅱ型胶原α1、Ⅰ型胶原α1、蛋白聚糖、Sox-9)mRNA的表达水平,Western blot测定细胞内P38、AKT、ERK1/2、JNK的蛋白表达水平。结果与结论:①3-DPS支架组培养4,8 h的细胞黏附率高于其余两组支架(P<0.05),培养7 d的细胞增殖快于其余两组支架(P<0.05);②骨髓间充质干细胞在3种材料表面均贴附牢固,生长状态良好,其中在AFS、AYS支架上呈类成纤维细胞样生长,在3-DPS支架上呈类软骨细胞样生长;③成软骨诱导3周后,3-DPS支架组Ⅱ型胶原α1、蛋白聚糖、Sox9 mRNA表达高于其余两组支架(P<0.05),Ⅰ型胶原α1 mRNA表达低于其余两组支架(P<0.05);AFS支架组、AYS支架组中Ⅱ型胶原α1、蛋白聚糖、Sox9 mRNA表达无明显差异(P>0.05);④成软骨诱导3周后,3-DPS支架组p-AKT、p-P38蛋白相对表达量高于其余两组支架(P<0.05),3组间AKT总蛋白表达量及ERK1/2、JNK、P38、p-ERK1/2、p-JNK、p-P38蛋白表达量比较均无显著性意义;⑤结果表明,不同结构支架形貌可通过Integrin-FAK信号通路下游的P38、AKT通路诱导骨髓间充质干细胞的的定向分化。

淫羊藿素通过调控黏着斑激酶及下游细胞外信号调节激酶/细胞周期蛋白D1和蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素蛋白信号通路抑制肝癌细胞增殖的作用机制研究

目的探究淫羊藿素(icaritin,ICA)抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法以Huh7肝癌细胞为研究对象并在体外培养;设置200、100、50、20、10、5、2、1、0.5μmol/L不同浓度的ICA给药干预72小时之后,采用0.5%结晶紫染色分析ICA对Huh7肝癌细胞生存的影响;将Huh7肝癌细胞给与ICA高(10μmol/L)、中(5μmol/L)、低(2.5μmol/L)三个浓度,每个浓度设置三个复孔,通过克隆形成实验检测ICA对Huh7肝癌细胞增殖能力的影响;Huh7肝癌细胞给与ICA IC 50值浓度,对照孔及ICA给药孔分别在0、6、12、24小时在倒置显微镜下拍照,通过细胞划痕分析ICA对肝癌细胞迁移能力的影响;并且用流式细胞术对细胞周期进行分析。另外,通过蛋白印迹对增殖相关蛋白,如增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、磷酸化黏着斑激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,p-FAK)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)等蛋白的表达水平进行分析。结果ICA可以明显抑制肝癌细胞的增殖及迁移能力,并且使肝癌细胞的细胞周期在G1期发生阻滞(P<0.05)。另外,研究发现ICA可以下调p-FAK及其下游调节蛋白p-ERK、cyclin D1以及p-Akt、p-mTOR、p-S6的表达水平。结论ICA可能通过调控FAK及下游ERK/cyclin D1和Akt/mTOR信号通路从而抑制肝癌细胞的增殖生长。

肺癌细胞系A549抗失巢凋亡的研究

目的研究FAK调节肺癌细胞系A549抗失巢凋亡的功能和信号通路。方法应用光镜观察，Hoechst33342染核、电镜、Western印迹、RNA干涉技术、P13K的抑制剂，对FAK调节肺癌细胞A549抗失巢凋亡的功能和信号通路进行研究。结果发现肺癌细胞系A549具有抗失巢凋亡的能力；A549细胞悬浮培养时，FAKtyr-397／861／925的活性随时间的延长逐渐增加后降低，磷酸化的P13K和AKT表现出与其一致的活性变化；通过RNA干涉实验发现干涉组比对照组细胞出现明显的凋亡现象，同时P13K／AKT的磷酸化水平下降；P13K的抑制剂组比对照组出现更多的凋亡细胞。结论FAK在肺癌细胞A549抗失巢凋亡中发挥了重要作用，其抗失巢凋亡的机制是通过激活下游P13K／AKT通路来实现的。

PTEN诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡机制研究

目的研究抑癌基因PTEN对人膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的影响,并探讨其相关机制。方法将携带野生型PTEN基因及两种突变型基因C124A-PTEN和G129E-PTEN的真核表达载体转染BIU-87细胞,Western blot检测PTEN蛋白表达及蛋白激酶B(PKB/Akt)、焦点黏附激酶(FAK)磷酸化水平的变化;应用流式细胞仪技术和激光共聚焦显微镜技术,分析转染和对照细胞在黏附状态下的凋亡情况。结果与对照组细胞相比,转染野生型PTEN的BIU-87细胞(WT-PT/87)FAK和Akt的磷酸化水平分别降低了59%(P<0.01)和89%(P<0.01),G129E-PT/87细胞内磷酸化FAK和磷酸化Akt的水平分别下降了62%(P<0.01)和46%(P<0.05),而C124APT/87细胞中FAK和Akt的磷酸化水平均无明显变化。WT-PT/87与G129E-PT/87细胞凋亡率分别升至(18.5±2.1)%(t=17.34,P<0.01)和(10.1±0.5)%(t=14.58,P<0.01),明显高于对照细胞,而C124A-PT/87与GFP/87细胞凋亡率无明显升高。结论抑癌基因PTEN诱导膀胱癌细胞的凋亡与其脂质磷酸酶抑制Akt的磷酸化有关。其蛋白磷酸酶活性参与调节Akt磷酸化,其机制可能与调节FAK的磷酸化有关。

MicroRNA-181d-5p通过PTEN参与睾丸支持细胞间紧密连接损伤

目的:探讨miR-181d-5p通过与人第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源的基因(PTEN)mRNA 3'UTR区相互作用,参与小鼠睾丸支持细胞TM4细胞间紧密连接损伤及其可能机制。方法:通过网站预测miR-181d-5p的靶基因为PTEN mRNA,采用双荧光素酶报告基因分析实验在293T细胞上验证其与靶基因3'UTR区的结合;在TM4细胞上采用mimic过表达miR-181d-5p,引起PTEN蛋白表达降低,再进行p-FAK-Tyr397、p-Akt-Thr308等相关信号分子检测以及细胞间跨膜电阻(TER)值的测定。结果:MiR-181d-5p能与PTEN mRNA的3'UTR区结合,并降低其表达;在TM4细胞上过表达miR-181d-5p后,致使p-FAK-Tyr397和p-Akt-Thr308水平升高,以及TER值降低。结论:MiR-181d-5p通过与PTEN mRNA 3'UTR区结合降低其表达,引起p-FAK-Tyr397水平升高,以及PI3K/Akt信号通路激活,导致睾丸支持细胞间紧密连接损伤。