肝复康对肝纤维化大鼠肝组织整合素α5β1/FAK信号通路的调节作用

目的研究整合素α5β1/FAK信号通路在肝纤维化中的作用以及中药肝复康对此通路的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、肝复康大剂量、中剂量和小剂量治疗组,皮下注射10%CCl4制备肝纤维化模型,自第9周起,给予肝复康灌胃治疗至第20周。采用免疫组化法检测大鼠肝组织整合素α5和整合素β1的表达情况;采用RT-PCR法检测FAK mRNA水平。结果模型组大鼠肝组织整合素α5表达水平(0.50±0.01)比正常对照组(0.23±0.13)明显增高(P<0.01),而肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.35±0.03、0.33±0.01、0.38±0.02)比模型组明显降低(P<0.01);模型组大鼠肝组织整合素β1表达水平(0.44±0.02)比正常对照组(0.27±0.01)明显增高(P<0.01),肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.37±0.01、0.34±0.01、0.39±0.01)表达水平较模型组明显降低(P<0.01);模型组动物FAK mRNA水平(0.73±0.01)比正常对照组(0.11±0.02)明显增高(P<0.01),而肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.33±0.03、0.28±0.01、0.18±0.01)比模型组明显降低(P<0.01)。结论整合素α5β1/FAK信号通路的激活在肝纤维化中发挥重要作用,肝复康治疗肝纤维化作用的机制可能与抑制整合素α5β1/FAK通路的信号转导有关。

Cx32、Src/FAK信号通路在肝癌组织中的表达及其与肝癌术后患者预后的关系

目的 探讨肝细胞癌(肝癌)组织中连接蛋白Cx32、磷酸化Src(p-Src)Y416、总Src(total Src)、磷酸化局部黏着斑激素(p-FAK)Y925、总FAK(total FAK)蛋白表达水平对肝癌术后患者预后的影响。方法 收集97例接受根治性手术肝癌患者的肝癌组织标本和相应的癌旁组织标本,使用免疫组织化学(免疫组化)染色法测定Cx32、p-Src Y416、total Src、p-FAK Y925和total FAK的蛋白表达水平,并对肝癌患者术后随访5年,采用单因素和多因素Cox回归分析肝癌患者术后死亡的影响因素,并使用Kaplan-Meier法计算生存率。结果 免疫组化染色结果显示肝癌组织中Cx32的阳性表达率低于相应的癌旁组织,而p-Src Y416、total Src、p-FAK Y925、total FAK的蛋白阳性表达率均高于相应的癌旁组织(P均<0.05)。单因素Cox回归分析显示,年龄、肿瘤分化程度、肿瘤直径、Cx32、p-Src、total Src、p-FAK Y925、total FAK是肝癌患者术后死亡的8个可疑影响因素(P均<0.05);多因素Cox回归分析及生存分析显示,高表达Cx32可能是肝癌患者术后死亡风险的独立保护因素,而高表达p-Src Y416和p-FAK Y925可能是肝癌患者术后死亡风险的独立危险因素(P均<0.05)。结论 高表达Cx32提示肝癌患者术后死亡风险可能较低,而高表达p-Src Y416和p-FAK Y925提示肝癌患者术后死亡风险较高。

DCLK1激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路促进A549细胞的恶性行为

目的探讨双肾上腺素皮质样激酶1(DCLK1)对A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响,并探究可能涉及的相关分子机制。方法慢病毒感染法建立稳定表达DCLK1分子的A549细胞系,反转录-聚合酶链技术和蛋白质印记法进行鉴定。CCK-8与平板克隆实验检测过表达DCLK1后细胞增殖能力变化。Transwell实验观察过表达DCLK1对细胞迁移与侵袭能力的影响。癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析DCLK1对肺腺癌细胞的调控富集通路,蛋白质印记法进行验证。结果DCLK1在A549细胞中过表达可增加细胞的增殖、迁移与侵袭等能力,而抑制FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路可削弱DCLK1对A549细胞的恶性调控。结论DCLK1通过激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进A549细胞的恶性生物学行为。

雷公藤红素通过FAK/MEK/ERK信号通路对肝癌细胞耐药性的影响

目的探究雷公藤红素(CSL)对肝癌细胞耐药性的影响。方法采用仑伐替尼(Len)构建耐药人肝癌细胞Huh7/Len,分为对照组,CSL低、中、高浓度组(1、2.5、5μmol/L),CSL高浓度+Zn27[黏着斑激酶(FAK)激活剂]组(5μmol/L CSL+2 nmol/L Zn27),每组设置6个复孔。检测细胞增殖(以吸光度计)和克隆能力、凋亡率、侵袭数、迁移数,以及细胞中活性氧(ROS)水平和磷酸化FAK(p-FAK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(p-MEK)、磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,CSL低、中、高浓度组细胞的吸光度、克隆数、侵袭数、迁移数和p-FAK、p-MEK、p-ERK、Bcl-2蛋白相对表达量均显著降低,细胞凋亡率、ROS水平和Bax、caspase-3蛋白相对表达量均显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与CSL高浓度组比较,CSL高浓度+Zn27组细胞中上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。结论CSL能增强氧化应激,促进细胞凋亡,抑制肝癌细胞恶性进展和化疗耐药性,其机制可能与抑制FAK/MEK/ERK信号通路有关。

熊果酸通过抑制FAK信号通路抑制成纤维细胞的增殖和迁移

目的探讨熊果酸(ursolic acid,UA)是否能够通过影响FAK信号通路影响成纤维细胞的增殖和迁移。方法将成纤维细胞分为四组,分别为对照组(0.9%NaCl)、10μmol/L UA组、20μmol/L UA组和40μmol/L UA组,分别于0、12、24、36、48 h应用MTT法检测细胞的增殖情况。使用20μmol/L和40μmol/L UA作用成纤维细胞24 h后,Transwell实验和WB实验检测UA对细胞迁移和细胞中p-FAK和FAK的调节作用。沉默成纤维细胞中的FAK后,使用20μmol/L UA作用成纤维细胞,MTT实验检测细胞的增殖情况,WB实验检测细胞中p-FAK和FAK的表达情况。结果与对照组相比,10、20μmol/L和40μmol/L UA组均可以显著抑制细胞的增殖,其差异具有统计学意义(P<0.05)。20μmol/L和40μmol/L UA能够抑制成纤维细胞的迁移能力,下调成纤维细胞中p-FAK的表达。沉默FAK后,UA对成纤维细胞中p-FAK的抑制作用减弱。结论UA可以通过抑制FAK磷酸化水平来抑制成纤维细胞的增殖和迁移。

β咔啉类生物碱对SGC-7901荷瘤裸鼠HGF/c-MET通路中FAK、PI3K、AKT信号通路影响

目的通过观察β-咔啉类生物碱对SGC-7901荷瘤裸鼠HGF/c-MET通路中PI3K/AKT、FAK信号分子的变化,探讨β-咔啉类生物碱抗胃癌信号通路的可能靶点。方法建立荷瘤裸鼠80只。采用随机数字表法将模型随机分为4组。分别为β咔啉类生物碱高、中、低组,空白对照组(给药方式:每天1次,连续14 d;空白对照组给予等体积的生理盐水,灌胃,每天1次,连用14 d)。5-FU组给予5 mg/L,每周1次,累计2周。记录各组裸鼠瘤体质量变化。使用HE染色,免疫组织化学染色细胞结构,Tunnel染色法观察细胞凋亡情况。RT-PCR方法检测PI3K/AKT、FAK的mRNA表达水平。Western Blot法检测PI3K/AKT、FAK蛋白表达水平。结果β咔啉类生物碱能抑制SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤细胞的增殖,诱导SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤凋亡,不同浓度的β-咔啉类生物碱作用于SGC-7901荷瘤裸鼠各组14 d后。随着浓度增加,瘤块质量均有降低(高剂量组和阳性对照组对比空白对照组差异有统计学意义P<0.05)。5-FU组,β咔啉类生物碱组中,低剂量组均有坏死,高剂量组肿瘤细胞坏死较为明显。FAK、Grb2、PI3Kp85a、p-PI3Kp85a、AKT、p-AKT的免疫组化结果显示随着β-咔啉类生物碱浓度的增加而蛋白表达逐渐降低,5-FU组和β咔啉类生物碱组对比空白对照组差异有统计学意义(P<0.05)。Tunnel染色镜结果显示:空白对照组肿瘤细胞凋亡最少,阳性组、中、低剂量组均有细胞凋亡,高剂量组肿瘤细胞凋亡率最高。5-FU组、β-咔啉类生物碱组Grb2、PI3Kp85a、FAKmRNA表达水平较空白对照组显著降低。β-咔啉类生物碱高剂量组和5-FU组Grb2、PI3Kp85a对比空白对照组mRNA水平降低(P<0.05)。β-咔啉类生物碱高剂量组p-PI3Kp85a、p-AKT表达对比空白对照组降低(P<0.05)。结论5-FU与β-咔啉类生物碱相比具有更有效的抑制SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤细胞增殖能力,可能与β-咔啉类生物碱抑制PI3Kp85a、AKT相关蛋白表达水平有关。

FAK/mTOR信号通路在肿瘤细胞中的调控作用

粘附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一种胞质非受体酪氨酸激酶,是整合素信号通路里一个重要的调节因子,在肿瘤细胞中高表达,与细胞迁移、粘附和侵袭有关。mTOR(mammalian target of rapamycin)是非典型性的Ser/Thr激酶,属于PIKK(phosphatidylinositol kinase-related kinase)超家族,介导营养信号调控细胞生长、分化及代谢等生理过程。近年的研究发现FAK通过三条途径与mTOR相关联,组成FAK/mTOR信号通路,在肿瘤细胞的增殖、迁移及肿瘤微环境中发挥着重要的调控作用。本文综述了FAK、mTOR和FAK/mTOR信号通路的特点及对肿瘤细胞调控作用的研究概况,为肿瘤治疗提供参考。

相思藤总黄酮基于FAK/PI3K/Akt信号通路抗CCl4大鼠肝纤维化作用机制的研究

目的:研究相思藤总黄酮(XSTF)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠HF的保护作用及其机制。方法:雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.2 mg/kg),XSTF高、中、低剂量组(800 mg/kg、400 mg/kg、200 mg/kg),每组12只,除正常对照组外,其余各组大鼠灌胃给予剂量50%CCl4花生油混合液(1 mL/kg)制备肝纤维化(HF)模型,2次/周。确定大鼠形成HF后连续4周,每日给予大鼠秋水仙碱和XSTF相应剂量药物,正常对照组和模型组给予相应体积的生理盐水。给药期间,除正常对照组外,其余各组同时继续造模处理。末次给药24 h后,收集血清及肝组织,检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;制备肝脏匀浆,检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝组织FAK、PI3K、Akt mRNA表达情况;免疫组化法检测肝组织中PI3K、Akt蛋白表达水平。结果:XSTF干预后可明显抑制CCl4诱导的肝脏氧化应激反应,与模型组大鼠相比,XSTF给药组血清中TNF-α、IL-6含量显著降低(P<0.05或P<0.01);肝组织中MDA含量降低(P<0.05或P<0.01),SOD、GSH-px的活性升高(P<0.05或P<0.01);免疫组化结果显示,PI3K、Akt蛋白表达水平明显上升(P<0.01);qPCR结果显示,FAK、PI3K、Akt的mRNA表达水平明显提升(P<0.01)。结论:XSTF对CCl4诱导的大鼠HF具有明显改善作用,可以明显减小肝组织损伤,其保护机制可能与减轻炎症反应,抑制FAK/PI3K/Akt信号传导通路有关。

基于ITGB4/FAK/p38信号通路蒙药蓝盆花总黄酮提取物体内外抗肝纤维化的作用研究

目的探讨蒙药蓝盆花总黄酮提取物(total flavonoid extract of Scabiosa comosa,TFS)对肝纤维化体内外的影响,以及通过对ITGB4/FAK/p38信号通路的调控对肝纤维化的作用。方法体内实验:选取50只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,TFS高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50mg/kg)剂量组,除对照组外均给予2ml/kg CCl_(4)灌胃。期间对TFS各剂量组给药,而对照组和模型组不做处理,灌胃10周。检测血清丙氨酸氨基转移酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(glutamic-oxaloacetic transaminase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量及肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量;苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色、Masson染色观察肝组织病理学改变;肝组织经转录组测序筛选与肝纤维化相关的通路;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)与Western blot法分别检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、collagenⅠ及ITGB4/FAK/p38信号通路相关mRNA及蛋白表达情况。体外实验:MTT法检测TFS对HSC-T6细胞的抑制率;RT-qPCR与Western blot法分别检测HSC-T6细胞中α-SMA、collagenⅠ及ITGB4/FAK/p38信号通路相关mRNA及蛋白表达;流式细胞术检测不同浓度TFS对HSC-T6细胞凋亡的影响。结果与空白组比较,TFS显著增加了模型组中ALT、AST、ALP及HYP的含量(P<0.01);与模型组比较,TFS显著降低了TFS剂量组中ALT、AST、ALP、HYP的含量(P<0.01);肝组织病理变化显示,肝纤维化增生明显改善;GO、KEGG富集分析表明,ITGB4/FAK/p38信号通路在模型组相关性显著。不同剂量的TFS对HSC-T6细胞均有抑制作用;体内外RT-qPCR与Western blot法检测结果显示,TFS各剂量组α-SMA、collagenⅠ、ITGB4/FAK/p38信号通路相关的mRNA及蛋白表达显著下降(P<0.05);凋亡结果亦显示,TFS各剂量组细胞凋亡数明显增加(P<0.01)。结论蒙药蓝盆花总黄酮提取物可显著抑制肝纤维化进展,其调控机制可能与ITGB4/FAK/p38信号通路有关。

JAM-A通过调控FAK/ERK信号通路对宫颈癌细胞进展的影响

目的 探讨连接黏附分子A(JAM-A)在宫颈癌细胞进展中的作用及其潜在分子机制。方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测JAM-A在宫颈癌患者癌组织中的表达水平。将Vector、pcDNA-JAM-A、NC-siRNA、JAM-A-siRNA质粒分别转染至宫颈癌细胞中,CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Western blotting分别检测细胞中JAM-A、PCNA、MMP-2、E-cadherin及FAK/ERK通路蛋白的水平。进行裸鼠皮下成瘤实验,检测JAM-A对宫颈癌细胞体内肿瘤生长的影响。结果 与癌旁组织比较,宫颈癌组织中JAM-A mRNA和蛋白水平均显著上调。过表达JAM-A可显著增强细胞增殖、侵袭和迁移能力,升高JAM-A、PCNA、MMP-2蛋白表达,降低E-cadherin蛋白表达。敲低JAM-A可显著抑制细胞增殖、侵袭和迁移能力,降低JAM-A、PCNA、MMP-2蛋白表达,升高E-cadherin蛋白表达。pcDNA-JAM-A+PF-562271组细胞中p-ERK2蛋白表达较pcDNA-JAM-A+Vehicle组显著降低。pcDNA-JAM-A组裸鼠皮下肿瘤的质量和体积较Vector组显著增加。结论 过表达JAM-A通过调控FAK-ERK2信号通路促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移。

新风胶囊通过抑制FAK/PI3K信号通路减轻佐剂性关节炎大鼠肺功能损伤

目的:探讨新风胶囊(XFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠肺功能及FAK/PI3K信号通路的影响。方法:将SPF级SD大鼠随机分为正常(NC)组、模型(MC)组、雷公藤多苷(TPT)组、新风胶囊(XFC)组。除NC组外,其余组采用弗氏完全佐剂建立AA模型,第30天开始给药,每天1次,连续30 d。采用肺功能仪检测大鼠肺功能参数,HE染色观察大鼠肺组织病理形态学变化,ELISA检测血清白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-27、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,RT-qPCR检测肺组织肺组织ColⅠα、ColⅢmRNA水平,Western Blot法检测肺组织PI3K、p-PI3K、FAK、p-FAK蛋白水平,免疫组织化学染色法观察肺组织PI3K、FAK蛋白的表达。结果:与NC组比较,MC组大鼠肺功能参数FVC、FEF25、FEF50、FEF75、PEF显著降低(P<0.01),肺组织ColⅠα、ColⅢmRNA及IL-6、IL-8、TGF-β1、p-PI3K、p-FAK表达显著升高(P<0.05,P<0.01),IL-27显著降低(P<0.01);与MC组比较,XFC组和TPT组FVC、PEF25、FEF50、FEF75、PEF均显著升高(P<0.01),ColⅠα、ColⅢmRNA及p-PI3K、p-FAK表达显著降低(P<0.05,P<0.01);XFC组细胞因子IL-8、TGF-β1表达量降低,IL-27表达升高(P<0.05,P<0.01);而TPT组IL-6、IL-8、TGF-β1降低,IL-27升高(P<0.05,P<0.01);与TPT组比较,XFC组肺功能参数FEF75显著升高(P<0.01),ColⅠα、ColⅢmRNA及IL-8、TGF-β1、p-PI3K、p-FAK表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。XFC组大鼠肺组织炎症细胞明显减少,胶原纤维蛋白沉积减少,肺间隔缩窄,肺泡腔较完整。结论:XFC可能通过调节细胞因子的表达水平调控FAK/PI3K信号通路活化,改善RA肺功能损伤。

IGSF10通过抑制FAK/PI3K/AKT信号通路降低右美托咪定对乳腺癌促进作用的研究

目的探讨免疫球蛋白超家族成员10(IGSF10)对右美托咪定(DEX)干预的乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭、上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响及作用机制。方法以人正常乳腺上皮细胞MCF-10A,人乳腺癌细胞MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231和MDA-MB-415为研究对象,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测IGSF10在细胞中的表达。选取IGSF10表达最低的细胞株为后续实验的研究对象。分为空白对照组、过表达阴性对照组和IGSF10过表达组,用于研究IGSF10对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响;分为空白对照组、DEX组、DEX+过表达阴性对照组和DEX+IGSF10过表达组,用于研究IGSF10对DEX诱导的乳腺癌细胞的影响。IGSF10过表达质粒载体转染乳腺癌细胞;细胞计数盒8(CCK8)、克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室实验分别检测IGSF10对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响;蛋白质印迹法检测IGSF10对增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、E-钙黏蛋白(E-cadberin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、黏着斑激酶(FAK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)表达的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞系MCF-7(0.66±0.06和0.76±0.07)、ZR-75-1(0.60±0.04和0.69±0.05)、MDA-MB-231(0.31±0.04和0.38±0.06)和MDA-MB-415(0.39±0.03和0.43±0.05)中IGSF10 mRNA和蛋白表达水平降低(F值分别为105.80和66.41,均P<0.001),选择IGSF10表达最低的MDA-MB-231细胞株进行后续实验。与空白对照组和过表达阴性对照组相比,IGSF10过表达组24和48 h细胞活力(F_(24 h)=35.84,F_(48 h)=28.30,均P<0.001)、克隆数量(F=57.42,P<0.001)、细胞迁移和侵袭能力(F_(迁移)=67.81,F_(侵袭)=84.22,均P<0.001)降低,PCNA、Ki-67、MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin、磷酸化(p-)FAK/FAK、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT蛋白表达下调(F值分别为20.68、22.58、38.49、31.93、35.49、28.33、78.22、52.17和10.60,均P<0.05),且E-cadherin蛋白表达上调,F=17.15,P=0.003。与空白对照组相比,DEX组24和48 h细胞活力、克隆数量、细胞迁移和侵袭能力均增加,PCNA、Ki-67、MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin、磷酸化(p-)FAK/FAK、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT蛋白表达上调,且E-cadherin蛋白表达下调。IGSF10过表达部分逆转了DEX对MDA-MB-231细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT的影响。结论IGSF10可能通过调节FAK/PI3K/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并且逆转了DEX对乳腺癌细胞恶性行为的促进作用。

化瘀消癥颗粒对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo侵袭迁移的影响

目的研究化瘀消癥颗粒对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo侵袭迁移的影响。方法 CCK8检测不同浓度化瘀消癥颗粒处理HTR-8/SVneo细胞不同时间对细胞增殖的影响;细胞划痕、Transwell分别检测化瘀消癥颗粒对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移、侵袭的影响;qRT-PCR检测integrinβ3、E-cadherin mRNA表达;Western blot检测integrinβ3、FAK、p-FAK、Scr、p-Src、E-cadherin蛋白表达。结果化瘀消癥颗粒对HTR-8/SVneo细胞活性的抑制作用呈时间和浓度依赖性。与对照组比较,化瘀消癥颗粒(0.4、0.5 g/L)组穿膜细胞数显著减少(P<0.05),0.5 g/L组细胞划痕面积减小;化瘀消癥颗粒(0.4,0.5 g/L)组E-cadherin mRNA和蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01),integrinβ3 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01),p-FAKp-Src蛋白表达下调(P<0.05, P<0.01)。结论化瘀消癥颗粒可能通过调节integrinβ3/FAK通路抑制HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移。

和厚朴酚抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨和厚朴酚抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法采用MTT法、Transwell法,检测和厚朴酚(5、10、15μg/mL)治疗的宫颈癌细胞的抑制率和迁移侵袭。将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-THBS2组(转染pcDNA-THBS2)、honokiol+pcDNA组(转染pcDNA并用honokiol处理)、honokiol+pcDNA-FAK组(转染pcDNAFAK并用honokiol处理),转染至siha细胞,Western blot检测细胞中THBS2、MMP-9的蛋白表达。结果与对照组比较,和厚朴酚(5、10、15μg/mL)治疗的siha细胞中细胞增殖、迁移和侵袭均明显降低,MMP-9、THBS2表达均明显升高;过表达THBS2具有与和厚朴酚相同的抑制siha细胞增殖、迁移和侵袭的作用;和厚朴酚、过表达THBS2均可明显的下调siha细胞中的FAK信号通路中FAK的表达,失活FAK信号通路,且过表达FAK可逆转和厚朴酚联合THBS2对siha细胞的增殖、迁移和侵袭抑制作用。结论和厚朴酚可抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与上调THBS2失活FAK信号通路有关,将可为和厚朴酚用于治疗宫颈癌奠定理论基础。

LASP1基因对人结直肠癌LOVO细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的探讨LASP1基因表达对人结肠癌(LOVO)细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响及其作用机制。方法分别构建LASP1过表达质粒和LASP1干扰质粒转染LOVO细胞,qRT-PCR验证LASP1mRNA转染结果。MTT法、Tunel染色分别检测细胞增殖活性和细胞的凋亡情况,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。Westernblot测定细胞LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达。结果质粒转染成功。LASP1过表达的LOVO细胞的增殖、迁移和侵袭能力增加,细胞凋亡率降低,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达升高(P<0.01)。而敲减LOVO细胞中LASP1的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,细胞凋亡率增加,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P<0.01)。结论LASP1可正向调控FAK/AKT信号通路,促进LOVO细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。

基于FAK/Src/ERK通路探讨西黄丸对前列腺癌血管生成、侵袭和转移的影响

基于局部黏着斑激酶(FAK)/类固醇受体共激活因子(Src)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路,探讨西黄丸对前列腺癌血管生成、侵袭、转移的影响。利用液相色谱串联质谱技术对西黄丸的活性成分进行分析与鉴定。利用R语言和Perl语言程序等生物信息学技术分析前列腺癌相关靶点与西黄丸潜在靶点之间的相互作用。利用PC3细胞制备裸小鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,验证西黄丸的疗效和分子机制。体外细胞实验分别采用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)法、Transwell、划痕实验、实时定量逆转录PCR和蛋白免疫印记实验检测西黄丸萃取液对前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移以及FAK/Src/ERK通路相关靶点的影响。液相色谱串联质谱技术鉴定出没食子酸、龙胆酸、青蒿烯、柯里拉京、苯基丁酮-葡萄糖苷、苏木酸、arecoic acid B等在内的西黄丸99种活性成分。基于西黄丸活性成分的网络药理学分析显示,FAK/Src/ERK信号通路为其抗前列腺癌的关键途径。体内外实验结果验证,西黄丸能够抑制PC3、LNCaP细胞的增殖、侵袭与迁移,并抑制PC3皮下移植瘤的生长,降低FAK/Src/ERK信号通路相关蛋白表达水平。综上,通过调节FAK/Src/ERK通路抑制血管生成、侵袭、迁移是西黄丸抗前列腺癌机制之一。

细胞表面热休克蛋白90在人前列腺癌细胞中的表达及其对侵袭能力的影响

目的 观察细胞表面热休克蛋白90（HsPgo）在高侵袭性人前列腺癌细胞PC3中的表达,及其对细胞侵袭能力的影响,探讨其可能的作用机制.方法 采用免疫荧光染色和膜蛋白生物素标记法,检测HSPgO在PC3细胞表面的表达;采用Boyden小室侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变;采用Western blot和免疫共沉淀法,检测局部黏着斑激酶（FAK）、c-Src蛋白磷酸化水平及其两者相互作用的变化;采用RNA干扰技术下调FAK蛋白表达,应用抑制剂PP2抑制Src激酶活性,观察细胞FAK/Src信号通路及其侵袭能力的改变.结果 PC3细胞表面表达HSP00.HSPg0特异性抗体可显著降低PC3细胞体外侵袭能力,且伴有FAK tyr 397、576、577、925及c-Src tyr 416磷酸化水平的显著下降,以及FAK与c-Src蛋白相互结合的明显减弱.经小分子干扰RNA（siRNA）有效干扰FAK表达,或采用PP2抑制Src激酶活性,均可显著抑制PC3细胞的侵袭性,但同时联合应用抗HSPg0抗体,未有协同作用.小室侵袭实验结果显示,PC3细胞经抗HSPg0抗体作用后,穿膜细胞数为（39.57 4±7.54）个,而对照组和lgG对照组分别为（105.70±12.16）个和（110.60 4±11.61）个,差异均有统计学意义（P〈0.001）.结论 细胞表面HSP90可经FAK/c-Src信号通路促进体外培养前列腺癌细胞的侵袭,提示其可能是潜在的对肿瘤转移实施防治的一个靶点.

半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中PMN-MDSCs迁移侵袭的影响

目的:观察半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中多形核髓系来源抑制细胞(PMN-MDSCs)迁移侵袭的影响。方法:制备含生药量0.63 g·mL^(-1)的半夏泻心汤含药肠吸收液,以Transwell小室将胃癌细胞与PMN-MDSCs非接触共培养建立胃癌微环境模型,采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法筛选半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的最佳干预浓度及时间,用于后续实验,分为空白组、模型组、FAK抑制剂组及半夏泻心汤组(26%、18%、10%半夏泻心汤含药肠吸收液),采用细胞划痕实验和Transwell实验检测PMN-MDSCs的迁移和侵袭能力,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤微环境中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)细胞因子表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PMN-MDSCs通路相关蛋白局部黏着斑激酶(FAK)、磷酸化(p)-FAK、蛋白酪氨酸激酶(Src)、磷酸化(p)-Src蛋白表达水平。结果:与24 h比较,作用48 h 5%、50%、75%、100%半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率均有升高(P<0.05,P<0.01),与作用48 h比较,培养72 h 50%半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率低于48 h(P<0.01),5%、100%半夏泻心汤含药肠吸收液略高于48 h(P<0.05,P<0.01),其余浓度抑制率差异无统计学意义,且48 h半数抑制浓度(IC_(50))为18.09%,说明18%半夏泻心汤含药肠吸收液在48 h为最佳干预浓度及时间;与空白组比较,模型组PMN-MDSCs迁移距离显著增大(P<0.01),迁移及侵袭数量显著增多(P<0.01);与模型组比较,FAK抑制剂组、半夏泻心汤含药肠吸收液组PMN-MDSCs的迁移距离均显著减小(P<0.01),迁移及侵袭数量显著减少(P<0.01),以26%含药肠吸收液组最为显著(P<0.01);与空白组比较,模型组PMNMDSCs通路相关蛋白FAK、p-FAK、Src、p-Src表达显著升高(P<0.01),VEGF、MMP-9细胞因子表达均显著上升(P<0.01)。与模型组比较,FAK抑制剂组、半夏泻心汤含药肠吸收液组(26%、18%、10%)PMN-MDSCs FAK、p-FAK、Src蛋白表达降低(P<0.01),FAK抑制剂组、半夏泻心汤含药肠吸收液组(18%)p-Src蛋白表达显著降低(P<0.01),VEGF、MMP-9细胞因子表达显著降低(P<0.01)。结论:半夏泻心汤含药肠吸收液通过下调胃癌微环境PMN-MDSCs FAK信号通路蛋白FAK、p-FAK、Src、p-Src的表达,抑制PMN-MDSCs迁移侵袭。