黄芪建中汤对小鼠脾气虚证肺癌转移FAK基因表达的影响

目的:通过检测FAK基因的表达探讨脾气虚对肺癌转移的影响及黄芪建中汤的干预作用。方法:成功复制小鼠脾气虚证Lewis肺癌转移模型后,按实验设计方案进行干预,RT-PCR方法检测各组小鼠肿瘤组织中FAK基因表达。结果:与肿瘤对照组比较,模型对照组表达升高(P<0.05),黄芪建中汤中、高剂量及CTX组呈低表达(P<0.01);与模型对照组比较,各治疗组均明显下降(P<0.01)。结论:脾气虚可促进FAK-mRNA的表达,而黄芪建中汤可下调FAK-mRNA的表达,从而抑制肿瘤转移。

FAK基因靶向miRNA表达质粒的构建及鉴定

目的构建靶向黏着酶(FAK)基因的miRNA真核表达质粒,为其在胃癌相关研究中的应用奠定基础。方法设计合成两条针对FAK基因的特异性miRNA干扰序列,定向克隆到pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体上,经鉴定后转染胃癌BGC-823细胞,实时定量PCR及Western-blot技术鉴定重组体对细胞FAK基因表达的干扰效果。结果针对FAK基因的两组miRNA干扰质粒构建成功,转染BGC-823细胞后,细胞FAK mRNA及FAK蛋白表达均明显降低。结论针对FAK基因的miRNA真核表达质粒成功构建,该质粒可用于miRNA进行靶向FAK的相关研究。

鸡局部黏着斑激酶基因5′UTR及启动子的克隆鉴定

为了研究鸡局部黏着斑激酶(FAK)基因表达调控的分子机制,运用cDNA末端快速扩增技术确定了鸡胚成纤维细胞FAK基因的转录起始位点,并发现FAK基因mRNA的5′非翻译区(5′UTR)存在4种剪切形式。分析这4种剪切形式的5′端序列,发现它们都不影响蛋白的编码,但可能影响mRNA的翻译效率。另外,将启动子序列935 bp片段克隆构建到荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic中,转染鸡胚成纤维细胞,测定启动子的转录活性。通过启动子序列系列缩短的克隆,将核心启动子区定位在转录起始位点上游-662至+7的669 bp片段内,该启动子的典型特征是:没有TATA盒,而富含"GC"碱基。以上结果为FAK基因的表达调控研究提供了分子基础。

EFFECTS OF INTEGRIN ALPHAⅡb^(R995A) MUTATION ON RECEPTOR AFFINITY AND pp125 (FAK) PHOSPHORYLATION

Objective To investigate the role of cytoplasmic domain of integrin alphaⅡb in platelet signal transduction. Methods Binding capacity of integrin alphaⅡb R995A to antibody platelet activation complex-1 (PAC-1) and pp125 focal adhesion kinase (FAK) phosphorylation of cells were detected by flow cytometry, immune precipitation, and Western blotting. Results Without activation, wild-type alphaⅡbbeta3 Chinese hamster ovary (CHO) cells failed to bind to PAC-1, but mutant chimera alphaⅡb R995A beta3 CHO cells were able to bind with PAC-1. Furthermore, phosphorylation of pp125 (FAK) in wild-type alphaⅡbbeta3 CHO cells occured only when cells were adhered to fibrinogen, but could not be detected in bovine serum albumin suspension. However in the mutant chimera group, it could be detected in both conditions. Conclusion The mutation in integrin alphaⅡb R995A alters its affinity state as a receptor, thus also mediating cytoplasmic signal transduction leading to the phosphorylation of pp125 (FAK) without ligand binding.

胸水细胞FAK和MMP-9表达在良恶性胸腔积液鉴别中的意义

目的：探讨胸水细胞黏着斑激酶（focaladhesionkinaseFAK）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）检测对良、恶性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法：用荧光实时定量RT—PCR和免疫组化方法检测39例恶性、31例良性胸水细胞FAK和MMP-9基因mRNA和蛋白表达，并与胸水细胞学诊断结果进行比较。结果：恶性胸水组FAK和MMP-9mRNA表达水平较良性胸水组和对照明显增加，较良性胸水组分别增加71．9％（P〈0．01）和67．8％（P〈0．01）。免疫组化检测结果显示39例恶性胸水组中FAK基因表达阳性30例（76．9％），MMP-9基因表达阳性33例（84．6％），而31良性胸水组FAK基因表达阳性8例（25．8％），MMP-9基因表达阳性5例（16．1％）（P〈0．01）。结论：胸水细胞MMP-9和FAK基因检测可作为细胞学检查的辅助手段，提高恶性胸腔积液的诊断率。