罗哌卡因抑制Rac1/JNK1/FAK通路的活化抑制黑色素瘤M21细胞生长、侵袭和迁移

目的:本文旨在探究罗哌卡因(ropivacaine,RPC)对黑色素瘤M21细胞生长,运动和上皮间质形态转换的影响。方法:采用0、0.25、0.5、1 mmol/L剂量罗哌卡因处理M21细胞,将细胞随机分为四组:RPC 0 mmol/L组、RPC 0.25 mmol/L组、RPC 0.5 mmol/L组和RPC 1 mmol/L组进行后续试验。EDU染色检测细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell检测侵袭细胞数;划痕试验检测细胞迁移;显微镜观察上皮间充质转化形态学变化;蛋白免疫印迹检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Rac1、JNK1、p-JNK1、FAK、p-FAK蛋白表达水平。结果:结果表明,与RPC 0 mmol/L组相比较,RPC 0.5、1 mmol/L组EDU阳性细胞数显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),侵袭细胞数显著降低(P<0.05),划痕愈合率显著降低(P<0.05),上皮间充质转化受到抑制,E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),Vimentin、N-cadherin、Rac1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),p-JNK1/JNK1、p-FAK/FAK比值显著降低(P<0.05)。结论:罗哌卡因抑制Rac1/JNK1/FAK通路的活化调节黑色素瘤M21细胞生长,运动和上皮间质形态转换。

电针联合阿仑膦酸钠对骨质疏松大鼠Integrinα2/FAK/Runx2通路的影响

目的探讨电针联合阿仑膦酸钠对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用及对Integrinα2/FAK/Runx2通路调节作用。方法选取30只大鼠随机分为假手术组(6只)及造模组(24只),采用手术切除卵巢法建立骨质疏松症大鼠模型。将造模后的大鼠随机分为骨质疏松模型组、电针治疗组、阿仑膦酸钠组及联合治疗组,每组6只。电针治疗组、阿仑膦酸钠组及联合治疗组分别按照相应干预方法干预8周。通过酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒测定大鼠血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)-5b、Ⅰ型胶原羧基末端肽(ICIP)、I型胶原氨基端延长肽(PINP)水平;双能X射线测定大鼠股骨骨密度及骨矿物含量;骨生物力学测定仪测定大鼠骨生物力学指标;苏木精-伊红(HE)染色法检查股骨组织病理学变化;实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定股骨组织Integrinα2、FAK及Runx2 mRNA水平;免疫印记法(Western blot)测定股骨组织Integrinα2、FAK及Runx2蛋白水平。结果与假手术组比较,骨质疏松模型组血清ALP、BGP、TRACP-5b、ICIP、PINP水平显著升高(P<0.05),骨密度、骨矿物含量、最大载荷、最大应力、刚度,股骨组织Integrinα2、FAK及Runx2 mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05);与骨质疏松模型组比较,电针治疗组、阿仑膦酸钠组及联合治疗组血清ALP、BGP、TRACP-5b、ICIP、PINP水平显著降低(P<0.05),骨密度、骨矿物含量、最大载荷、最大应力、刚度,股骨组织Integrinα2、FAK及Runx2 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05);与电针治疗组及阿仑膦酸钠组比较,联合治疗组血清ALP、BGP、TRACP-5b、ICIP、PINP水平显著降低(P<0.05),骨密度、骨矿物含量、最大载荷、最大应力、刚度,股骨组织Integrinα2、FAK及Runx2 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论电针联合阿仑膦酸钠能够显著提高绝经后骨质疏松症大鼠骨密度,抑制骨质疏松病理进展,改善大鼠骨代谢及骨生物力学改变,其机制可能与调节Integrinα2/FAK/Runx2通路有关。

咖啡因通过FAK/AKT/ROCK通路调控人脑胶质瘤U-373MG细胞的恶性生物学行为

目的:探讨咖啡因通过调节FAK/AKT/ROCK信号通路来影响人脑胶质瘤U-373MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力。方法:常规培养U-373MG细胞,将其分为对照组、咖啡因低剂量(1 mmol/L)组、咖啡因高剂量(2 mmol/L)组、PF573228组(FAK抑制剂,1μmol/L)、咖啡因高剂量+SC79组(AKT激活剂,8mg/L)。用CCK-8法、Transwell小室实验、流式细胞术和WB法分别检测各组U-373MG细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡,以及U-373MG细胞中p-FAK、p-AKT、p-ROCK、Ki67、MMP-9蛋白表达水平。建立U-373MG细胞裸鼠移植瘤模型,观察咖啡因对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中相关蛋白的表达。结果:咖啡因、PF573228可显著抑制U-373MG细胞的增殖、迁移、侵袭能力,促进U-373MG细胞凋亡,抑制p-FAK、p-AKT、p-ROCK、Ki67、MMP-9蛋白的表达(均P<0.05),SC79则可部分逆转咖啡因对U-373MG细胞的作用(均P<0.05)。咖啡因可显著抑制移植瘤的生长及移植瘤组织中上述相关蛋白的表达(均P<0.05)。结论:咖啡因可通过抑制FAK/AKT/ROCK信号通路抑制U-373MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡。

DCLK1激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路促进A549细胞的恶性行为

目的探讨双肾上腺素皮质样激酶1(DCLK1)对A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响,并探究可能涉及的相关分子机制。方法慢病毒感染法建立稳定表达DCLK1分子的A549细胞系,反转录-聚合酶链技术和蛋白质印记法进行鉴定。CCK-8与平板克隆实验检测过表达DCLK1后细胞增殖能力变化。Transwell实验观察过表达DCLK1对细胞迁移与侵袭能力的影响。癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析DCLK1对肺腺癌细胞的调控富集通路,蛋白质印记法进行验证。结果DCLK1在A549细胞中过表达可增加细胞的增殖、迁移与侵袭等能力,而抑制FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路可削弱DCLK1对A549细胞的恶性调控。结论DCLK1通过激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进A549细胞的恶性生物学行为。

雷公藤红素通过FAK/MEK/ERK信号通路对肝癌细胞耐药性的影响

目的探究雷公藤红素(CSL)对肝癌细胞耐药性的影响。方法采用仑伐替尼(Len)构建耐药人肝癌细胞Huh7/Len,分为对照组,CSL低、中、高浓度组(1、2.5、5μmol/L),CSL高浓度+Zn27[黏着斑激酶(FAK)激活剂]组(5μmol/L CSL+2 nmol/L Zn27),每组设置6个复孔。检测细胞增殖(以吸光度计)和克隆能力、凋亡率、侵袭数、迁移数,以及细胞中活性氧(ROS)水平和磷酸化FAK(p-FAK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(p-MEK)、磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,CSL低、中、高浓度组细胞的吸光度、克隆数、侵袭数、迁移数和p-FAK、p-MEK、p-ERK、Bcl-2蛋白相对表达量均显著降低,细胞凋亡率、ROS水平和Bax、caspase-3蛋白相对表达量均显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与CSL高浓度组比较,CSL高浓度+Zn27组细胞中上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。结论CSL能增强氧化应激,促进细胞凋亡,抑制肝癌细胞恶性进展和化疗耐药性,其机制可能与抑制FAK/MEK/ERK信号通路有关。

基于ITGB4/FAK/p38信号通路蒙药蓝盆花总黄酮提取物体内外抗肝纤维化的作用研究

目的探讨蒙药蓝盆花总黄酮提取物(total flavonoid extract of Scabiosa comosa,TFS)对肝纤维化体内外的影响,以及通过对ITGB4/FAK/p38信号通路的调控对肝纤维化的作用。方法体内实验:选取50只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,TFS高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50mg/kg)剂量组,除对照组外均给予2ml/kg CCl_(4)灌胃。期间对TFS各剂量组给药,而对照组和模型组不做处理,灌胃10周。检测血清丙氨酸氨基转移酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(glutamic-oxaloacetic transaminase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量及肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量;苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色、Masson染色观察肝组织病理学改变;肝组织经转录组测序筛选与肝纤维化相关的通路;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)与Western blot法分别检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、collagenⅠ及ITGB4/FAK/p38信号通路相关mRNA及蛋白表达情况。体外实验:MTT法检测TFS对HSC-T6细胞的抑制率;RT-qPCR与Western blot法分别检测HSC-T6细胞中α-SMA、collagenⅠ及ITGB4/FAK/p38信号通路相关mRNA及蛋白表达;流式细胞术检测不同浓度TFS对HSC-T6细胞凋亡的影响。结果与空白组比较,TFS显著增加了模型组中ALT、AST、ALP及HYP的含量(P<0.01);与模型组比较,TFS显著降低了TFS剂量组中ALT、AST、ALP、HYP的含量(P<0.01);肝组织病理变化显示,肝纤维化增生明显改善;GO、KEGG富集分析表明,ITGB4/FAK/p38信号通路在模型组相关性显著。不同剂量的TFS对HSC-T6细胞均有抑制作用;体内外RT-qPCR与Western blot法检测结果显示,TFS各剂量组α-SMA、collagenⅠ、ITGB4/FAK/p38信号通路相关的mRNA及蛋白表达显著下降(P<0.05);凋亡结果亦显示,TFS各剂量组细胞凋亡数明显增加(P<0.01)。结论蒙药蓝盆花总黄酮提取物可显著抑制肝纤维化进展,其调控机制可能与ITGB4/FAK/p38信号通路有关。

基于ciRS-7/miR-7/FAK通路研究掌叶半夏水提物对宫颈癌的抑制作用

目的:探讨掌叶半夏水提物(pinellia extract,PE)通过调节小脑变性相关蛋白1反义转录物(circular RNA sponge for microRNA-7,ciRS-7)/microRNA-7(miR-7)/着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)通路对宫颈癌细胞的抑制作用。方法:体外培养人宫颈癌细胞(HeLa),分为HeLa细胞对照组和HeLa细胞PE干预组(0.15 g·L^(-1)),Transwell小室实验检测HeLa细胞侵袭及迁移能力。18只雌性BALB/c-nu裸小鼠随机分为正常对照组、皮下移植瘤模型组和PE干预组,每组6只。取对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞,调整密度为1×10^(7) mL^(-1),除正常组外,其余组裸小鼠颈背部皮下注射接种人宫颈癌HeLa细胞0.2 mL建立移植瘤模型。当瘤体直径大约5 mm时,PE干预组裸鼠腹腔注射PE 10 mg·kg^(-1),其余组给予同等体积的生理盐水,每天1次,连续3周。检测小鼠的肿瘤体积,并计算抑瘤率;RT-qPCR法检测各组小鼠肿瘤组织中ciRS-7 mRNA及miR-7 mRNA的表达水平;Western Blot法检测各组小鼠肿瘤组织中FAK及p-FAK的蛋白表达水平。结果:与HeLa细胞对照组比较,HeLa细胞PE干预组HeLa细胞侵袭及迁移数目显著降低(P<0.01)。与正常对照组比较,皮下移植瘤模型组小鼠ciRS-7 mRNA、FAK蛋白表达水平显著升高(P<0.05),miR-7 mRNA、p-FAK蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与皮下移植瘤模型组比较,PE干预组荷瘤裸鼠肿瘤体积明显变小(P<0.01),肿瘤质量明显降低(P<0.01),ciRS-7 mRNA、FAK蛋白表达水平显著降低(P<0.05),miR-7 mRNA、p-FAK蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:PE可抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭及迁移,并抑制宫颈癌肿瘤的生长,其机制可能与调节ciRS-7/miR-7/FAK信号通路有关。

Lumican调控FAK信号通路对胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨光蛋白聚糖(lumican)调控FAK信号通路对胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测胃癌组织与正常胃组织中lumican的表达。通过转染小干扰RNA(siRNA)或过表达(OE)质粒下调或上调胃癌AGS细胞中lumican的表达,EDU检测细胞增殖,Transwell检测细胞侵袭、迁移,Western blotting检测lumican、粘着斑激酶(FAK)、磷酸化(p-)FAK蛋白表达量。结果:胃癌组织中lumican蛋白表达量明显高于正常胃组织(P<0.05)。与siRNA阴性对照(NC)组相比,siRNA组AGS细胞增殖、侵袭及迁移能力显著降低(P<0.05),而OE组AGS细胞增殖、侵袭及迁移能力明显增强(P<0.05);siRNA组FAK和p-FAK蛋白表达量下降(P<0.05),而OE组FAK和p-FAK相关蛋白表达量升高(P<0.05)。结论:Lumican在胃癌组织中的表达增强,其可能通过激活FAK/p-FAK通路促进胃癌AGS细胞侵袭、迁移及增殖。

肝复康对肝纤维化大鼠肝组织整合素α5β1/FAK信号通路的调节作用

目的研究整合素α5β1/FAK信号通路在肝纤维化中的作用以及中药肝复康对此通路的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、肝复康大剂量、中剂量和小剂量治疗组,皮下注射10%CCl4制备肝纤维化模型,自第9周起,给予肝复康灌胃治疗至第20周。采用免疫组化法检测大鼠肝组织整合素α5和整合素β1的表达情况;采用RT-PCR法检测FAK mRNA水平。结果模型组大鼠肝组织整合素α5表达水平(0.50±0.01)比正常对照组(0.23±0.13)明显增高(P<0.01),而肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.35±0.03、0.33±0.01、0.38±0.02)比模型组明显降低(P<0.01);模型组大鼠肝组织整合素β1表达水平(0.44±0.02)比正常对照组(0.27±0.01)明显增高(P<0.01),肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.37±0.01、0.34±0.01、0.39±0.01)表达水平较模型组明显降低(P<0.01);模型组动物FAK mRNA水平(0.73±0.01)比正常对照组(0.11±0.02)明显增高(P<0.01),而肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.33±0.03、0.28±0.01、0.18±0.01)比模型组明显降低(P<0.01)。结论整合素α5β1/FAK信号通路的激活在肝纤维化中发挥重要作用,肝复康治疗肝纤维化作用的机制可能与抑制整合素α5β1/FAK通路的信号转导有关。

ErbB2通过FAK-Src-MAPK信号通路诱导细胞转化和移动侵袭

目的:探讨表皮生长因子受体2(ErbB2)诱导肿瘤转化和侵袭的分子机制。方法:用表达ErbB2逆病毒颗粒感染FAK+/+细胞,Western印迹检测ErbB2在FAK+/+细胞中的表达,免疫沉淀检测ErbB2的功能。用Src阻断剂-PP2阻断Src,用MAPK阻断剂-UO126阻断MAPK,观察Src或MAPK被阻断后对ErbB2诱导的细胞移动和细胞转化的影响。结果:感染后ErbB2在FAK+/+细胞中稳定表达和激活。PP2抑制ErbB2诱导的FAK磷酸化以及ErbB2诱导的细胞移动。UO126阻断ErbB2诱导的MAPK磷酸化以及ErbB2诱导的细胞锚定依赖性生存-细胞转化。结论:ErbB2通过FAK-Src-MAPK信号转导通路诱导FAK+/+细胞转化和移动。

Cx32、Src/FAK信号通路在肝癌组织中的表达及其与肝癌术后患者预后的关系

目的 探讨肝细胞癌(肝癌)组织中连接蛋白Cx32、磷酸化Src(p-Src)Y416、总Src(total Src)、磷酸化局部黏着斑激素(p-FAK)Y925、总FAK(total FAK)蛋白表达水平对肝癌术后患者预后的影响。方法 收集97例接受根治性手术肝癌患者的肝癌组织标本和相应的癌旁组织标本,使用免疫组织化学(免疫组化)染色法测定Cx32、p-Src Y416、total Src、p-FAK Y925和total FAK的蛋白表达水平,并对肝癌患者术后随访5年,采用单因素和多因素Cox回归分析肝癌患者术后死亡的影响因素,并使用Kaplan-Meier法计算生存率。结果 免疫组化染色结果显示肝癌组织中Cx32的阳性表达率低于相应的癌旁组织,而p-Src Y416、total Src、p-FAK Y925、total FAK的蛋白阳性表达率均高于相应的癌旁组织(P均<0.05)。单因素Cox回归分析显示,年龄、肿瘤分化程度、肿瘤直径、Cx32、p-Src、total Src、p-FAK Y925、total FAK是肝癌患者术后死亡的8个可疑影响因素(P均<0.05);多因素Cox回归分析及生存分析显示,高表达Cx32可能是肝癌患者术后死亡风险的独立保护因素,而高表达p-Src Y416和p-FAK Y925可能是肝癌患者术后死亡风险的独立危险因素(P均<0.05)。结论 高表达Cx32提示肝癌患者术后死亡风险可能较低,而高表达p-Src Y416和p-FAK Y925提示肝癌患者术后死亡风险较高。

β咔啉类生物碱通过FAK/PI3K/AKT/mTOR通路对人胃癌SGC-7901荷瘤小鼠的影响

目的:探讨新疆地道药材骆驼蓬提取物β咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901荷瘤小鼠移植瘤组织中FAK、PI3K、AKT、mTOR、BCL-2和Bax表达的影响。方法:构建小鼠移植瘤模型,50只昆明小鼠随机分为5组,分别为空白对照组、氟尿嘧啶组、β-咔啉类生物碱低、中、高剂量组,每组10只,计算抑瘤率,HE染色检测瘤组织病理学变化,采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,RT-PCR法检测FAK、PI3K、AKT、mTOR、BCL-2和Bax的mRNA表达,Westernblot和免疫组化法检测FAK、PI3K、AKT、mTOR、BCL-2和Bax蛋白表达。结果:β咔啉类生物碱中剂量和高剂量能抑制胃癌SGC-7901小鼠瘤体的生长,降低瘤重(P<0.01),其效果优于β咔啉类生物碱低剂量(P<0.05)。HE染色和TUNEL结果显示,β咔啉类生物碱处理后能破坏胃瘤细胞组织,诱导胃瘤细胞的凋亡。RT-PCR、Western blot和免疫组化法结果表明β咔啉类生物碱中剂量和高剂量能显著降低FAK、PI3K、AKT、mTOR和BCL-2蛋白表达(P<0.01),提高Bax蛋白的表达(P<0.01),其效果优于β咔啉类生物碱低剂量(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:β咔啉类生物碱对胃癌的抑制作用与降低BCL-2、FAK、PI3K、AKT、mTOR蛋白表达,升高Bax蛋白表达相关,表明β咔啉类生物碱可能是一种潜在的胃癌的治疗药物。

FAK/mTOR信号通路在肿瘤细胞中的调控作用

粘附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一种胞质非受体酪氨酸激酶,是整合素信号通路里一个重要的调节因子,在肿瘤细胞中高表达,与细胞迁移、粘附和侵袭有关。mTOR(mammalian target of rapamycin)是非典型性的Ser/Thr激酶,属于PIKK(phosphatidylinositol kinase-related kinase)超家族,介导营养信号调控细胞生长、分化及代谢等生理过程。近年的研究发现FAK通过三条途径与mTOR相关联,组成FAK/mTOR信号通路,在肿瘤细胞的增殖、迁移及肿瘤微环境中发挥着重要的调控作用。本文综述了FAK、mTOR和FAK/mTOR信号通路的特点及对肿瘤细胞调控作用的研究概况,为肿瘤治疗提供参考。

相思藤总黄酮基于FAK/PI3K/Akt信号通路抗CCl4大鼠肝纤维化作用机制的研究

目的:研究相思藤总黄酮(XSTF)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠HF的保护作用及其机制。方法:雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.2 mg/kg),XSTF高、中、低剂量组(800 mg/kg、400 mg/kg、200 mg/kg),每组12只,除正常对照组外,其余各组大鼠灌胃给予剂量50%CCl4花生油混合液(1 mL/kg)制备肝纤维化(HF)模型,2次/周。确定大鼠形成HF后连续4周,每日给予大鼠秋水仙碱和XSTF相应剂量药物,正常对照组和模型组给予相应体积的生理盐水。给药期间,除正常对照组外,其余各组同时继续造模处理。末次给药24 h后,收集血清及肝组织,检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;制备肝脏匀浆,检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝组织FAK、PI3K、Akt mRNA表达情况;免疫组化法检测肝组织中PI3K、Akt蛋白表达水平。结果:XSTF干预后可明显抑制CCl4诱导的肝脏氧化应激反应,与模型组大鼠相比,XSTF给药组血清中TNF-α、IL-6含量显著降低(P<0.05或P<0.01);肝组织中MDA含量降低(P<0.05或P<0.01),SOD、GSH-px的活性升高(P<0.05或P<0.01);免疫组化结果显示,PI3K、Akt蛋白表达水平明显上升(P<0.01);qPCR结果显示,FAK、PI3K、Akt的mRNA表达水平明显提升(P<0.01)。结论:XSTF对CCl4诱导的大鼠HF具有明显改善作用,可以明显减小肝组织损伤,其保护机制可能与减轻炎症反应,抑制FAK/PI3K/Akt信号传导通路有关。

β咔啉类生物碱对SGC-7901荷瘤裸鼠HGF/c-MET通路中FAK、PI3K、AKT信号通路影响

目的通过观察β-咔啉类生物碱对SGC-7901荷瘤裸鼠HGF/c-MET通路中PI3K/AKT、FAK信号分子的变化,探讨β-咔啉类生物碱抗胃癌信号通路的可能靶点。方法建立荷瘤裸鼠80只。采用随机数字表法将模型随机分为4组。分别为β咔啉类生物碱高、中、低组,空白对照组(给药方式:每天1次,连续14 d;空白对照组给予等体积的生理盐水,灌胃,每天1次,连用14 d)。5-FU组给予5 mg/L,每周1次,累计2周。记录各组裸鼠瘤体质量变化。使用HE染色,免疫组织化学染色细胞结构,Tunnel染色法观察细胞凋亡情况。RT-PCR方法检测PI3K/AKT、FAK的mRNA表达水平。Western Blot法检测PI3K/AKT、FAK蛋白表达水平。结果β咔啉类生物碱能抑制SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤细胞的增殖,诱导SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤凋亡,不同浓度的β-咔啉类生物碱作用于SGC-7901荷瘤裸鼠各组14 d后。随着浓度增加,瘤块质量均有降低(高剂量组和阳性对照组对比空白对照组差异有统计学意义P<0.05)。5-FU组,β咔啉类生物碱组中,低剂量组均有坏死,高剂量组肿瘤细胞坏死较为明显。FAK、Grb2、PI3Kp85a、p-PI3Kp85a、AKT、p-AKT的免疫组化结果显示随着β-咔啉类生物碱浓度的增加而蛋白表达逐渐降低,5-FU组和β咔啉类生物碱组对比空白对照组差异有统计学意义(P<0.05)。Tunnel染色镜结果显示:空白对照组肿瘤细胞凋亡最少,阳性组、中、低剂量组均有细胞凋亡,高剂量组肿瘤细胞凋亡率最高。5-FU组、β-咔啉类生物碱组Grb2、PI3Kp85a、FAKmRNA表达水平较空白对照组显著降低。β-咔啉类生物碱高剂量组和5-FU组Grb2、PI3Kp85a对比空白对照组mRNA水平降低(P<0.05)。β-咔啉类生物碱高剂量组p-PI3Kp85a、p-AKT表达对比空白对照组降低(P<0.05)。结论5-FU与β-咔啉类生物碱相比具有更有效的抑制SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤细胞增殖能力,可能与β-咔啉类生物碱抑制PI3Kp85a、AKT相关蛋白表达水平有关。

异钩藤碱调节EGFR/FAK信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和5-FU耐药性的影响

目的探讨异钩藤碱调节表皮生长因子受体(EGFR)/局部黏着斑激酶(FAK)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药性的影响。方法取对数生长期的HepG2细胞,分为对照组,异钩藤碱低、中、高浓度(32.5、65.0、130.0μmol·L^(-1))组,异钩藤碱(130μmol·L^(-1))+EGFR激活剂NSC228155(2μmol·L^(-1))组;对数生长期的5-FU耐药肝癌细胞系HepG2/5-FU分为对照组、异钩藤碱(130μmol·L^(-1))组、5-FU(60μmol·L^(-1))组、异钩藤碱(130μmol·L^(-1))+5-FU(60μmol·L^(-1))组、异钩藤碱(130μmol·L^(-1))+5-FU(60μmol·L^(-1))+NSC228155(2μmol·L^(-1))组。给药处理24 h,对照组不给药。EdU染色、CCK-8检测HepG2或HepG2/5-FU细胞增殖;划痕实验检测HepG2或HepG2/5-FU细胞迁移;Western blotting检测细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、迁移侵袭增强子因子1(MIEN1)、P-糖蛋白(P-gp)、p-EGFR、p-FAK蛋白表达。结果与对照组相比,异钩藤碱低、中、高浓度组EdU阳性率、吸光度(A450)值、划痕愈合率、CyclinD1、MIEN1、p-EGFR、p-FAK蛋白表达显著降低,且呈浓度相关性(P<0.05);与异钩藤碱130.0μmol·L^(-1)组相比,异钩藤碱+NSC228155组HepG2细胞EdU阳性率、A450值、划痕愈合率、CyclinD1、MIEN1、p-EGFR、p-FAK蛋白表达显著升高(P<0.05)。与对照组相比,5-FU组HepG2/5-FU细胞EdU阳性率、A450值、划痕愈合率、P-gp、p-EGFR、p-FAK蛋白表达显著降低(P<0.05);与异钩藤碱组、5-FU组相比,异钩藤碱+5-FU组HepG2/5-FU细胞EdU阳性率、A450值、划痕愈合率、P-gp、p-EGFR、p-FAK蛋白表达降低(P<0.05);与异钩藤碱+5-FU组相比,异钩藤碱+5-FU+NSC228155组HepG2/5-FU细胞EdU阳性率、A450值、划痕愈合率、P-gp、p-EGFR、p-FAK蛋白显著上调(P<0.05)。结论异钩藤碱抑制HepG2细胞增殖、迁移及降低5-FU耐药性的机制可能与阻断EGFR/FAK通路有关。

JAM-A通过调控FAK/ERK信号通路对宫颈癌细胞进展的影响

目的 探讨连接黏附分子A(JAM-A)在宫颈癌细胞进展中的作用及其潜在分子机制。方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测JAM-A在宫颈癌患者癌组织中的表达水平。将Vector、pcDNA-JAM-A、NC-siRNA、JAM-A-siRNA质粒分别转染至宫颈癌细胞中,CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Western blotting分别检测细胞中JAM-A、PCNA、MMP-2、E-cadherin及FAK/ERK通路蛋白的水平。进行裸鼠皮下成瘤实验,检测JAM-A对宫颈癌细胞体内肿瘤生长的影响。结果 与癌旁组织比较,宫颈癌组织中JAM-A mRNA和蛋白水平均显著上调。过表达JAM-A可显著增强细胞增殖、侵袭和迁移能力,升高JAM-A、PCNA、MMP-2蛋白表达,降低E-cadherin蛋白表达。敲低JAM-A可显著抑制细胞增殖、侵袭和迁移能力,降低JAM-A、PCNA、MMP-2蛋白表达,升高E-cadherin蛋白表达。pcDNA-JAM-A+PF-562271组细胞中p-ERK2蛋白表达较pcDNA-JAM-A+Vehicle组显著降低。pcDNA-JAM-A组裸鼠皮下肿瘤的质量和体积较Vector组显著增加。结论 过表达JAM-A通过调控FAK-ERK2信号通路促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移。

LASP1基因对人结直肠癌LOVO细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的探讨LASP1基因表达对人结肠癌(LOVO)细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响及其作用机制。方法分别构建LASP1过表达质粒和LASP1干扰质粒转染LOVO细胞,qRT-PCR验证LASP1mRNA转染结果。MTT法、Tunel染色分别检测细胞增殖活性和细胞的凋亡情况,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。Westernblot测定细胞LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达。结果质粒转染成功。LASP1过表达的LOVO细胞的增殖、迁移和侵袭能力增加,细胞凋亡率降低,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达升高(P<0.01)。而敲减LOVO细胞中LASP1的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,细胞凋亡率增加,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P<0.01)。结论LASP1可正向调控FAK/AKT信号通路,促进LOVO细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。

淫羊藿次苷Ⅱ对舌鳞状细胞癌上皮⁃间质转化的抑制作用

目的观察淫羊藿次苷Ⅱ(icariinⅡ,ICSⅡ)对舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)上皮⁃间质转化(epithelial⁃mesenchymal transition,EMT)的抑制作用,及其通过Notch1/PTEN/FAK通路的调控机制。方法取对数期Tca⁃8113细胞,随机分为空白组,ICSⅡ低、中、高剂量组。测定各组增殖抑制率,迁移、侵袭能力,Notch1、PTEN、FAK、p⁃FAK蛋白相对表达量。结果ICSⅡ低、中、高剂量组24、48、72 h增殖抑制率均呈上升趋势(P<0.05);空白组,ICSⅡ低、中、高剂量组迁移率呈降低趋势(P<0.05),每个视野穿膜细胞数呈减少趋势(P<0.05),Notch1蛋白相对表达量及p⁃FAK/FAK呈降低趋势(P<0.05),PTEN蛋白相对表达量呈升高趋势(P<0.05)。结论ICSⅡ可抑制TSCC EMT,且呈剂量依赖性,推测与该药物可下调Notch1表达、上调PTEN表达、抑制FAK磷酸化有关。

青娥方含药血清对破骨细胞前体RAW 264.7细胞FAK/Src/p130Cas通路及上清液炎症因子的影响

目的观察青娥方含药血清对破骨细胞前体RAW 264.7细胞FAK/Src/p130Cas通路相关基因蛋白表达及上清液炎症因子的影响。方法制备青娥方含药血清和生理盐水血清,分别干预体外培养的破骨细胞前体RAW 264.7细胞。干预12 h和24 h后,提取mRNA和蛋白,荧光定量PCR(q PCR)检测FAK/Src/p130Cas及下游信号关键因子CRK、C3G和RAS mRNA表达的变化,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测FAK/Src/p130Cas及下游信号关键因子CRK、C3G和RAS蛋白表达的变化;应用ELISA法检测细胞上清液IL-6、TNF-α、PGE2含量。结果与同期生理盐水血清组比较,青娥方含药血清组FAK、Src、p130Cas、CRK、C3G和RAS的RNA和蛋白表达均明显减少(P<0.05,P<0.01),以FAK、Src、p130Cas下降最为显著,而细胞上清液炎症因子IL-6,TNF-α和PGE2含量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论青娥方含药血清能够下调FAK/Src/p130Cas及其下游信号分子的表达,抑制RAW 264.7细胞分泌炎症因子,从而抑制RANKL+MCSF诱导的破骨细胞分化。