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人抗菌肽FALL-39基因定点突变体的构建及其大肠杆菌表达产物的抗菌活性研究
被引量:
2
1
作者
杨云霞
冯云
王伯瑶
《四川大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期390-394,共5页
目的 构建人抗菌肽 FAL L - 3 9定点突变子及研究其抗菌活性。方法 采用 PCR体外定点突变技术( PCR- SDM) ,设计两对引物 ,引入一个突变点 ,通过重叠延伸法两次 PCR扩增 ,使 FAL L - 3 9第 3 2位密码子由AAT突变为 AAG,将扩增片段克隆...
目的 构建人抗菌肽 FAL L - 3 9定点突变子及研究其抗菌活性。方法 采用 PCR体外定点突变技术( PCR- SDM) ,设计两对引物 ,引入一个突变点 ,通过重叠延伸法两次 PCR扩增 ,使 FAL L - 3 9第 3 2位密码子由AAT突变为 AAG,将扩增片段克隆入 PGEXλ1T质粒中 ,转化大肠杆菌 JM10 9,并用 IPTG诱导 ,表达的 FAL L -3 9- lys3 2经纯化后与 FAL L - 3 9进行抗菌活性比较。结果 DNA测序结果表明在预期位点发生突变 ,突变后的FAL L - 3 9- lys3 2蛋白对大肠杆菌 ML - 3 5 p的抗菌活性明显增强 ,其最低抑菌浓度 ( MIC)和最低杀菌浓度 ( MBC)分别由 FAL L - 3 9蛋白的 18.75和 3 7.5 0μg/ m l降低为 FAL L - 3 9- L ys- 3 2的 10 .94和 2 1.88μg/ m l,对绿脓杆菌ATCC2 785 3的 MIC和 MBC值分别为 FAL L - 3 9蛋白的 3 1.2 5和 3 7.5 0μg/ m l降低为 FAL L - 3 9- L ys- 3 2的 18.75和 3 1.2 5μg/ ml。两种蛋白均在含 Medium E的 L B培养基中表现出较高活性 ,在 L B培养基中抗菌活性最低 ,但在同一种培养基中 FAL L - 3 9- L ys- 3 2蛋白抗菌活性要高于 FAL L - 3 9蛋白。结论 用两步 PCR定点突变技术获得一个 FAL L - 3 9- L ys3 2突变子 ,其表达分子的抗菌活性明显增强 ,提示在 FAL L - 3 9分子中增加碱性?
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关键词
人抗菌肽
fall-
39
基因
定点突变
大肠杆菌
表达
抗菌活性
研究
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职称材料
题名
人抗菌肽FALL-39基因定点突变体的构建及其大肠杆菌表达产物的抗菌活性研究
被引量:
2
1
作者
杨云霞
冯云
王伯瑶
机构
四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室
四川大学华西基础医学与法医学院感染与免疫研究室
出处
《四川大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期390-394,共5页
基金
美国纽约中华医学基金 ( 98-681)资助
文摘
目的 构建人抗菌肽 FAL L - 3 9定点突变子及研究其抗菌活性。方法 采用 PCR体外定点突变技术( PCR- SDM) ,设计两对引物 ,引入一个突变点 ,通过重叠延伸法两次 PCR扩增 ,使 FAL L - 3 9第 3 2位密码子由AAT突变为 AAG,将扩增片段克隆入 PGEXλ1T质粒中 ,转化大肠杆菌 JM10 9,并用 IPTG诱导 ,表达的 FAL L -3 9- lys3 2经纯化后与 FAL L - 3 9进行抗菌活性比较。结果 DNA测序结果表明在预期位点发生突变 ,突变后的FAL L - 3 9- lys3 2蛋白对大肠杆菌 ML - 3 5 p的抗菌活性明显增强 ,其最低抑菌浓度 ( MIC)和最低杀菌浓度 ( MBC)分别由 FAL L - 3 9蛋白的 18.75和 3 7.5 0μg/ m l降低为 FAL L - 3 9- L ys- 3 2的 10 .94和 2 1.88μg/ m l,对绿脓杆菌ATCC2 785 3的 MIC和 MBC值分别为 FAL L - 3 9蛋白的 3 1.2 5和 3 7.5 0μg/ m l降低为 FAL L - 3 9- L ys- 3 2的 18.75和 3 1.2 5μg/ ml。两种蛋白均在含 Medium E的 L B培养基中表现出较高活性 ,在 L B培养基中抗菌活性最低 ,但在同一种培养基中 FAL L - 3 9- L ys- 3 2蛋白抗菌活性要高于 FAL L - 3 9蛋白。结论 用两步 PCR定点突变技术获得一个 FAL L - 3 9- L ys3 2突变子 ,其表达分子的抗菌活性明显增强 ,提示在 FAL L - 3 9分子中增加碱性?
关键词
人抗菌肽
fall-
39
基因
定点突变
大肠杆菌
表达
抗菌活性
研究
Keywords
fall-39 mutation two-step pcr antibacterial activity
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人抗菌肽FALL-39基因定点突变体的构建及其大肠杆菌表达产物的抗菌活性研究
杨云霞
冯云
王伯瑶
《四川大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2003
2
下载PDF
职称材料
已选择
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参考文献
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