大黄免煎颗粒通过miR-135a/FAM129A分子轴影响胰腺泡细胞损伤的作用机制

目的探讨大黄免煎颗粒通过miR-135a/FAM129A分子轴对胰腺泡细胞损伤的作用机制。方法采用牛胆酸钠诱导大鼠胰腺泡细胞(AR42J细胞),构建胰腺泡细胞损伤模型。实验分为空白对照组(NC组)、模型组(Model组)、大黄免煎颗粒组(DHG组)、miR-135a抑制物组(miR-135a inhibitor组)、过表达FAM129A组(pcDNA-FAM129A组)及miR-135a模拟物+过表达FAM129A组(miR-135a mimic+pcDNA-FAM129A组)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测AR42J细胞及损伤模型中微小RNAs(miRNAs)的表达水平。双荧光素酶报告基因验证miR-135a和FAM129A的靶向关系。CCK-8检测各组细胞活力。膜联蛋白(Annexin)V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)检测各组细胞凋亡水平。脂肪酶和淀粉酶试剂盒检测脂肪酶和淀粉酶活性。Western印迹检测各组细胞中FAM129A的表达水平。结果成功构建胰腺泡细胞损伤模型,且牛胆酸钠IC50为522.8μmol/L。miR-135a在胰腺泡细胞损伤模型中异常高表达,且大黄免煎颗粒能抑制其表达(P<0.05)。FAM129A是miR-135a的靶基因。大黄免煎颗粒通过抑制miR-135a表达上调FAM129A的表达水平,从而促进胰腺泡细胞损伤模型增殖并抑制其凋亡及脂肪酶和淀粉酶活性(P<0.05)。结论大黄免煎颗粒通过miR-135a/FAM129A分子轴促进胰腺泡细胞增殖并抑制其凋亡及脂肪酶和淀粉酶活性,从而保护胰腺泡细胞免受损伤。

甲状腺癌中miR-106b负性调控FAM129A基因表达的作用及机制

目的研究甲状腺癌中miR-106b的表达及其调控靶基因FAM129A表达的作用及分子机制。方法实时定量PCR法检测miR-106b及FAM129A基因的表达。将miR-106b的前体(agomiR-106b)转染甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,Western blot法检测FAM129A蛋白表达,荧光素酶实验验证miR-106b与FAM129A基因3'非翻译区的特异性结合。结果相对于癌旁组织,MiR-106b在甲状腺癌组织表达较癌旁组织下调明显,而FAM129A在甲状腺癌组织表达显著上调,二者呈明显的负性相关。AgomiR-106b能够显著抑制甲状腺癌TPC-1细胞中FAM129A蛋白的表达,miR-106b能够特异性地结合FAM129A基因的3'UTR,并抑制荧光素酶活性。结论 miR-106b与FAM129A基因的表达异常与甲状腺癌的发生相关,miR-106b在甲状腺癌细胞能靶向沉默FAM129A基因。