FAM19A4基因启动子DNA甲基化对宫颈病变的诊断价值研究

目的探讨序列相似家族19成员A4(FAM19A4)基因启动子DNA甲基化水平在不同宫颈病变中的差异以及对宫颈癌和癌前病变的诊断价值。方法收集188例不同阶段宫颈病变的宫颈细胞样本,其中正常宫颈组65例,低度鳞状上皮内病变(LSIL)组33例,高度鳞状上皮内病变(HSIL)组56例,宫颈癌组34例。用靶向二代测序法检测FAM19A4基因启动子DNA甲基化的表达水平,分析不同组别甲基化水平差异及对宫颈病变的诊断价值。结果宫颈癌组、HSIL组、LSIL组及正常宫颈组FAM19A4基因启动子DNA甲基化水平的中位数分别为18.89、11.39、9.72、8.89,宫颈癌组明显高于HSIL组、LSIL组及正常宫颈组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。FAM19A4基因启动子DNA甲基化水平与宫颈病变程度呈正相关,相关系数为0.521(P<0.05)。FAM19A4基因启动子DNA甲基化诊断宫颈癌的灵敏度为82.35%,特异度为86.15%,ROC曲线下面积为0.91。结论宫颈癌和HSIL患者的FAM19A4基因启动子DNA甲基化水平异常增高,该指标对宫颈癌具有一定诊断价值。

FAM19A4基因启动子甲基化在高危型HPV阴性宫颈癌诊断中的作用

目的探讨FAM19A4基因启动子甲基化在高危型HPV(hr-HPV)阴性宫颈癌诊断中的作用。方法收集2013年6月至2017年12月在广东省妇幼保健院妇科治疗的宫颈癌患者共490例,其中术前宫颈刷液荧光定量PCR检测HPV结果为hr-HPV阴性的患者共25例,提取石蜡包埋标本中的DNA,依次经荧光定量PCR、HC-II、高通量靶向测序3种检测方式检测HPV型别,并评估hr-HPV阴性宫颈癌的临床特征,进一步检测标本中FAM19A4基因甲基化的表达情况。结果 25例样本中经荧光定量PCR及HC-II方法检测结果为hr-HPV阴性共12例(48.0%,12/25),将12例样本进行高通量测序,仍为阴性有9例(36%,9/25);hr-HPV阴性宫颈癌标本的FAM19A4基因甲基化检出率为100%(9/9);hr-HPV阴性宫颈癌与hr-HPV阳性宫颈癌相比,在组织病理学有统计学差异(P <0.05)。结论 hr-HPV阴性宫颈癌一种临床病理较为特殊的宫颈癌,经过更加敏感的检测方法检测后,发病率将进一步下降,结合FAM19A4基因启动子甲基化检测将对hr-HPV阴性宫颈癌的诊断有重要的辅助意义。

FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌组织中的临床意义

目的探讨FAM19A4基因启动子甲基化状态在不同病变级别的宫颈石蜡组织中的差异及其临床价值。方法随机选取31例、22例及23例经病理确诊为宫颈癌、宫颈HSIL及正常宫颈的石蜡包埋标本,采用双探针荧光定量PCR检测三组标本中FAM19A4基因甲基化的表达差异及进行分析。结果 FAM19A4基因甲基化阳性检出率在宫颈癌、宫颈HSIL及正常宫颈组织中分别为96.8%(30/31)、72.7%(16/22)和8.7%(2/23),三组间差异具有统计学意义(P<0.05);且随着宫颈病变严重程度增加,FAM19A4甲基化检出率也升高(P<0.05);宫颈癌不同临床病理特征与FAM19A4基因甲基化阳性检出率间均无统计学差异(P>0.05)。结论 FAM19A4基因启动子甲基化可能是宫颈癌变的特异性分子标志物,可能在宫颈癌的发生发展中起着一定作用,但可能不参与宫颈癌的侵袭转移。

FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌组织中的临床价值

目的:探讨FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌组织中的临床价值。方法:选取2017年1月至2018年12月广东医科大学顺德妇女儿童医院病理科采集的宫颈病理样本,其中宫颈癌样本32例,高度鳞状上皮内病变(HSIL)样本28例,正常宫颈样本24例,通过荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测对三组样本中FAM19A4基因启动子甲基化检出情况进行分析。结果:宫颈癌甲基化检出率高于HSIL组以及正常宫颈组,差异具有统计学意义(P < 0.05),HSIL组甲基化检出率高于正常宫颈组,差异具有统计学意义(P < 0.05);在患者年龄、组织学类型、临床分期、肿瘤大小以及淋巴结转移等方面,FAM19A4基因启动子甲基化检出情况差异无统计学意义(P > 0.05)。结论:FAM19A4基因启动子甲基化可能是宫颈癌特异性诊断标志物,可能与宫颈癌的发生以及发展存在一定相关性。

CHD5基因启动子甲基化调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进急性髓系白血病发病的研究

目的:探讨急性髓系白血病患者(AML)骨髓中CHD5基因甲基启动子甲基化状态及其调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进AML发病的机制。方法:采用MSP检测AML组及对照组CHD5基因甲基化状态,应用实时定量RT-PCR和Westernblot检测CHD5、p19Arf、p53及p21Cip1的表达水平。结果:AML患者骨髓中CHD5基因甲基化率(39.06%)较对照组(6.67%)明显增高(P<0.05);CHD5基因甲基化与AML不同染色体核型相关(P=0.009),但与性别、年龄及临床分型无显著相关(P>0.05);AML患者CHD5相对表达水平明显低于对照组(P<0.05);存在CHD5甲基化AML患者p19Arf、p53及p21Cip1基因和蛋白表达水平较对照组降低。结论:AML患者CHD5基因启动子的高甲基化可导致CHD5、p19Arf、p53和p21Cip1表达水平下降,从而可能通过调控p19Arf/p53/p21Cip1途径减弱对白血病细胞增殖抑制作用,促进AML的发生。

白血病患者ID4、WT1、GLIPR1基因启动子区异常甲基化及mRNA表达的研究

DNA甲基化(methylation)作为最早发现的修饰途径一直属于生命科学的前沿课题之一,其能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因表达⑴。研究显示:白血病抑癌基因启动子异常甲基化与白血病的发病机制密切相关,抑癌基因启动子高甲基化抑制相关mRNA的表达水平可能为白血病发病的重要分子机制。

肝癌组织IGF-Ⅱ启动子P4甲基化分析及意义

目的探讨人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因启动子P4的甲基化状态与肝细胞癌的关系。方法提取手术切除的原发性肝癌及相应癌旁肝组织各12例、慢性乙型肝炎肝穿刺活检组织10例、正常肝组织7例以及三株肝癌细胞系(BEL7402,SMMC7721,HepG2)的基因组DNA,分析肝癌组织IGF-Ⅱ启动子P4序列,检测各组织、细胞的IGF-Ⅱ启动子P4的甲基化状态。结果肝癌组织IGF-Ⅱ启动子P4序列与MEDLINE提供的正常序列(NT-009308)一致;肝癌、癌旁、慢性乙型肝炎以及正常肝组织IGF-Ⅱ基因启动子P4甲基化率的差别有统计学意义(χ2=26.207,P=0.000)。结论本组原发性肝癌组织IGF-Ⅱ基因启动子P4无序列缺失、突变;IGF-Ⅱ基因胚胎型启动子P4的去甲基化与肝癌发生相关。

HPV DNA与FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌筛查中的应用探讨

目的探讨高危型HPV(hr-HPV)与FAM19A4基因启动子甲基化检测在筛查宫颈癌中的临床应用价值。方法选取2016—2018年在咸宁市中心医院就诊的210例患者拭子样本,其中正常及良性宫颈炎65例,CIN147例、CIN232例、CIN346例、宫颈癌20例。所有患者样本均接受高危型HPV检测及FAM19A4甲基化检测,对比单独HPV检测、单独甲基化检测以及两者联合检测在宫颈癌筛查中的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果在正常及良性宫颈炎、CIN1、CIN2、CIN3及宫颈癌患者中,hr-HPV检测、FAM19A4基因启动子甲基化检测在不同程度宫颈病变患者阳性率均逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌早期病变诊断中的灵敏度低于hr-HPV检测,差异有统计学意义(P<0.05),特异度高于hr-HPV检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论hr-HPV检测具有高灵敏度和低特异度的特点,FAM19A4基因启动子甲基化具有低灵敏度和高特异度的特点,两者联合在宫颈癌早期病变筛查中具有较高的应用价值,可为宫颈癌早期病变筛查诊断提供参考依据,提高诊断准确性,改善疾病预后。

宫颈脱落细胞中FAM19A4基因启动子甲基化的检测分析

目的探讨宫颈脱落细胞中FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌筛查中的临床价值。方法收集2017年8至12月间在广东省妇幼保健院就诊,经病理学确诊为不同宫颈病变的高危型HPV(HR-HPV)感染患者,共162例。采取双探针荧光定量PCR检测不同级别宫颈病变的宫颈脱落细胞中的FAM19A4基因启动子甲基化表达情况,并通过诊断试验计算该基因甲基化在预测宫颈HSIL及以上病变的价值。结果(1)宫颈脱落细胞中FAM19A4甲基化阳性率随着宫颈病变严重程度增加,在正常宫颈/宫颈炎、宫颈低度鳞状上皮内病变(LSIL)、宫颈高分化鳞状上皮内病变(HSIL)和宫颈癌中分别为:7.69%(4/52),34.62%(9/26),55.56%(20/36),95.83%(46/48)(P<0.05)。(2)FAM19A4甲基化检出率在宫颈癌不同年龄段、病理学类型、临床分期、肿瘤大小及淋巴结转移状态间差异均无统计学意义(均P>0.05)。(3)FAM19A4甲基化在检测宫颈HSIL和≥HSIL病变时的特异度及阳性预测值最佳,曲线下面积分别为0.69和0.84;联合HPV16/18分型检测明显提高灵敏度。结论宫颈脱落细胞FAM19A4基因启动子甲基化检测在发现宫颈≥HSIL病变中具有较高的临床价值;当联合HPV16/18分型检测后,能更灵敏地检测出宫颈≥HSIL病变。

FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌及其癌前病变筛查的研究

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一。目前人乳头瘤病毒(HPV)检测及细胞学检查是宫颈癌及其癌前病变(CCPL)的主要筛查手段。由于上述传统筛查方法,仍然存在对CCPL漏诊的风险,因此寻找有效识别CCPL的特异性分子标志物,具有重要临床意义。对具有序列相似性家族19成员A4(FAM19A4)基因启动子甲基化定量检测,可有效检出CCPL组织,较传统筛查方法有较高特异度,有望成为CCPL筛查的特异性分子标志物。笔者拟就FAM19A4基因启动子甲基化定量检测,在CCPL筛查中应用的最新研究现状进行阐述,旨在为进一步推进CCPL筛查方法的开发,提供思路。

系统性硬化病患者外周血CD4＋T细胞CD40LDNA甲基化研究

目的探讨系统性硬化病（SSc）患者外周血CD4＋T细胞中CD40L基因调控序列的甲基化状态。方法密度梯度离心法分离SSc患者（女16例，男10例）和健康对照组（女15例，男10例）外周血单一核细胞，磁珠分选CD4＋T细胞，提取DNA，亚硫酸氢钠处理DNA，巢式PCR扩增CD40L基因调控序列片段（包括启动子和增强子），转化进入大肠杆菌，每个样本挑取8个克隆进行测序。结果亚硫酸盐基因组测序结果显示，健康女性CD40L基因调控序列一半为甲基化，一半为去甲基化，女性SSc患者CD40L基因启动子和增强子区域平均甲基化水平均显著低于女性健康对照（P值均〈0．01）；男性SSc患者和男性健康对照CD40L基因启动子和增强子区域几乎全部为去甲基化，两组平均甲基化水平差异无统计学意义（P值均〉0．05）。结论女性SSc患者CD4＋T细胞中失活的X染色体上CD40L调控序列低甲基化，可能是导致CD40L在女性SSc患者CD4＋T细胞中过度表达的原因之一。

DNA甲基化在急性冠脉综合征患者CD4＋CD28-T细胞CD28表达缺失中的作用

目的 通过研究急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）患者外周血CD4＋T细胞CD28 mRNA水平和CD28基因启动子调节序列的甲基化状态，旨在探讨DNA甲基化在ACS患者CD4＋CD28－T细胞CD28表达缺失中的作用。方法 免疫磁珠分离CD4＋T细胞经逆转录后，实时定量PCR（real time-PCR）技术检测CD4＋T细胞CD28mRNA的表达水平，亚硫酸氢钠测序检测CD28基因启动子调节序列的甲基化状态。 结果 与正常对照组相比，ACS患者CD4＋T细胞CD28mRNA表达水平显著减低，差异具有统计学意义[正常对照组比ACS组：（1.066±0.162）比（0.401±0.069），P〈0.05]。CD28基因启动子区域的甲基化水平显著增高，差异有统计学意义[正常对照组比ACS组：（24.47±3.17）%比（43.33±1.52）%，P〈0.05]。CD28基因启动子区域DNA甲基化水平与CD28mRNA表达水平呈显著负相关（P＝0.01，r＝－0.579）。结论 ACS患者CD4＋T细胞CD28基因启动子区域高甲基化调控了CD28基因转录抑制。DNA甲基化参与了CD4＋CD28－T细胞的形成。