瑞芬太尼通过调控FAM96B表达对骨肉瘤细胞增殖、凋亡影响的机制

目的探讨瑞芬太尼对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响并探讨其机制。方法运用噻唑蓝(MTT)法检测瑞芬太尼(0.0、0.5、5.0、50.0、500.0 ng/ml)对骨肉瘤细胞SAOS-2的抑制率;流式细胞术检测瑞芬太尼对SAOS-2的凋亡率影响;Western印迹检测细胞中96序列相似的家庭成员(FAM96)B、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;qRT-PCR法检测细胞中FAM96B、Bcl-2、Bax的mRNA的表达。结果瑞芬太尼(0.0、0.5、5.0、50.0、500.0 ng/ml)可呈浓度依赖性提高SAOS-2的抑制率,最适浓度为50 ng/ml;与对照组相比,瑞芬太尼可促进SAOS-2细胞凋亡,上调FAM96B表达,且过表达FAM96B具有与瑞芬太尼相同的上调SAOS-2细胞抑制率和凋亡率的作用;抑制FAM96B可逆转瑞芬太尼对SAOS-2细胞的作用。结论瑞芬太尼具有抑制骨肉瘤细胞增殖,促进凋亡的作用,其机制可能与上调FAM96B表达有关,将可为瑞芬太尼临床用于骨肉瘤手术麻醉提供新的支持。

Fam96B基因rs3890213_A>G多态性与冠心病的关系

目的探讨广东地区汉族人群Fam96B基因单核苷酸多态位点rs3890213_A>G与冠心病的关系。方法利用聚合酶链式反应-连接酶检测反应分析技术,对274例健康对照个体(对照组)和294例冠心病患者(病例组)的Fam96B基因rs3890213_A>G多态位点进行分型,采用非条件逻辑回归分析统计该多态位点与冠心病易感的相关性。结果 AA、AG、GG基因型在病例组中的频率分别为2.0%、33.0%和65.0%,在对照组中分别是4.4%、24.5%和71.2%。非条件逻辑回归分析发现,以AA基因型作为参照,AG和GG基因型均没有显著增加个体患冠心病的风险(OR=2.74,95%CI为0.82～9.11,P=0.101;OR=1.80,95%CI为0.56～5.81,P=0.324)。结论 Fam96B基因rs3890213_A>G多态位点与广东汉族人群冠心病易感无相关性。

FAM96B基因在结肠癌组织中低表达且抑制癌细胞增殖并诱导其凋亡

目的观察96序列相似的家庭成员B(family with sequence similarity 96,member B,FAM96B)在56例结肠癌组织中的表达,并探讨其对结肠癌细胞系HCT-116细胞增殖及凋亡的影响。方法分别采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)及Western blot检测56例结肠癌肿瘤组织和癌旁组织中FAM96B的mRNA及蛋白表达水平。构建含人FAM96B全长序列的pcDNA3.1-myc-FAM96B重组质粒,并通过脂质体质粒转染人结肠癌细胞系HCT-116细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测FAM96B过表达对HCT-116增殖能力的影响,采用流式细胞技术检测其对细胞周期和凋亡的影响。结果在56例结肠癌组织中,FAM96BmRNA在肿瘤组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.05)。FAM96B蛋白在肿瘤组织中的表达同样低于癌旁组织(P<0.05)。MTT细胞实验结果表明FAM96B组吸光度(A)值显著低于对照组(P<0.05),即过表达FAM96B可抑制HCT-116细胞增殖。流式细胞仪检测结果显示过表达FAM96B组的细胞凋亡率高于对照组[(44.70±1.12)%vs.(4.30±0.91)%,P<0.05)。细胞周期分析显示,过表达FAM96B组在G_1期的细胞百分数[(51.58±0.97)%]显著低于对照组[(62.64±0.87)%,P<0.05],S期的细胞百分数[(35.35±0.58)%]显著高于对照组[(25.79±0.74)%,P<0.05]。结论 FAM96B在结肠癌组织中低表达,过表达FAM96B可抑制结肠癌细胞系HCT-116增殖且诱导其凋亡。FAM96B可能作为一个潜在抑癌基因直接参与结肠癌发生、发展过程,并有可能成为结肠癌新的抗癌靶点。

FAM96B在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察96序列相似的家庭成员B(family with sequence similarity 96,member B,FAM96B)在120例胃癌组织中的表达,分析其表达差异与胃癌临床病理特征的关系,并探讨FAM96B对胃癌细胞系SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法分别采用免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学技术检测FAM96B蛋白在120例胃癌组织及配对癌旁组织中的表达,并统计分析FAM96B蛋白表达差异与胃癌临床病理特征之间的相关性。采用脂质体转染法将含人FAM96B全长序列的pcDNA3.1-myc-FAM96B重组质粒转染至SGC7901细胞中,分别采用MTT法及流式细胞技术检测FAM96B过表达对SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。结果免疫组化检测结果显示FAM96B在胃癌组织中的蛋白表达定位于细胞质,且FAM96B蛋白在癌旁组织与胃癌组织中的阳性表达率分别为62.5%(75/120)和20.8%(25/120),两者差异具有统计学意义(χ2=45.067,P<0.05)。Western blot结果显示FAM96B蛋白在癌旁组织中的表达水平显著高于胃癌组织[(1.54±0.48)vs.(0.53±0.20),t=10.395,P<0.05)]。胃癌组织中FAM96B表达水平与胃癌浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关(均P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度及病理类型无明显相关(均P>0.05)。MTT细胞实验结果表明:FAM96B组吸光度值显著低于对照组(P<0.05)。细胞凋亡检测结果示:FAM96B组的细胞凋亡率高于对照组[(49.5±1.0)%vs.(6.7±0.8)%,P<0.05]。结论 FAM96B在人胃癌组织中表达显著下降,其表达水平与胃癌的发生发展、侵袭转移密切相关。过表达FAM96B可抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。

FAM96A和FAM96B结构与功能的研究进展

96序列相似的家庭成员A和B(family with sequence similarity 96 member A and B,FAM96A和FAM96B)是属于MIP18(MMS19-interacting protein of 18 kD)家族的2个高度保守的同源蛋白,MIP18是与有丝分裂纺锤体相关的MMDX(MMS19-MIP18-XPD)复合体的亚基。研究表明,FAM96A和FAM96B在人胃肠道间质瘤、结肠癌、肝癌、胃癌和乳腺癌等多种肿瘤组织中的表达显著降低,提示其可能是作为潜在的抑癌基因参与肿瘤的发生发展,但目前关于FAM96A和FAM96B在肿瘤发生发展过程中的作用机理并不十分清楚。此外,研究发现FAM96A和FAM96B可通过与其他不同的蛋白质相互作用在体内发挥多种不同的功能。因此,就目前对于FAM96A和FAM96B结构和功能的研究所取得的进展进行了回顾与总结,并对其在肿瘤发生发展中的分子机制和相互作用蛋白鉴定的研究前景进行了展望,以期为临床上将FAM96A和FAM96B作为新的肿瘤诊断标志物和治疗靶点奠定基础,并为揭示二者在体内更多的新功能提供依据。

结肠癌组织中FAM96B和TCF4的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨结肠癌组织中96序列相似的家庭成员B(FAM96B)及T细胞因子4(TCF4)蛋白的表达及其与结肠癌患者临床病理特征之间的关系。方法选取手术切除的结肠癌肿瘤组织标本60例作为观察组,同期癌旁正常组织标本20例作为对照组,采用免疫组织化学染色法检测2组标本中FAM96B及TCF4蛋白的表达,采用免疫组织化学评分(IHS)对2种蛋白表达进行定量评价,采用Spearman等级相关进行FAM96B阳性表达与TCF4蛋白阳性表达之间的相关性。结果FAM96B和TCF4蛋白在2组标本中均有表达,观察组标本FAM96B蛋白的IHS评分较对照组低,TCF4蛋白的IHS评分则较对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05);FAM96B蛋白在未侵及浆膜层结肠癌组织中的阳性表达率高于侵及浆膜层的结肠癌组织,在低分化结肠癌组织中的阳性表达率低于中、高分化结肠癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05);TCF4蛋白在低分化结肠癌中的阳性表达率高于中、高分化结肠癌组织,在Ⅰ~Ⅱ期结肠癌组织中的阳性表达率低于Ⅲ~Ⅳ期结肠癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman分析显示FAM96B阳性表达与TCF4蛋白阳性表达无相关性(r=0.052,P=0.692)。结论FAM96B和TCF 4蛋白可能参与了结肠癌的发生发展,有望成为结肠癌新的治疗靶点。

FAM96B对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响

目的观察96序列相似的家庭成员B(FAM96B)对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响.方法分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测FAM96B在L02和HepG2细胞中的mRNA及蛋白表达量并比较其差异.构建pcDNA3.1-FAM96B真核表达载体并转染至HepG2细胞中,采用噻唑蓝(MTT)检测各组细胞在0、24、48、72、96 h的增殖能力.分别采用流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡、划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell检测细胞侵袭能力.选取10只4~5周龄雄性BALB/c-nu/nu小鼠,构建肿瘤模型,随机分为对照组和FAM96B组.分别注入0.3ml 1×10^10个pcDNA3.1-HepG2细胞和pcDNA3.1-FAM96BHepG2细胞.每隔3d测量皮下瘤的重量和体积,观察30 d后处死.应用SPSS 21.0软件进行统计,计量资料采用均值±标准差(Mean±SD)表示,两组间均数比较采用t检验.结果 FAM96B在HepG2细胞中的mRNA表达量显著低于L02细胞(t=25.343,P<0.01),同时,FAM96B在HepG2细胞中的蛋白表达量显著低于L02细胞.与对照组比较,FAM96B组细胞增殖能力显著减弱(P<0.01).FAM96B组的凋亡率显著高于对照组[(8.61±1.05)%比(47.34±4.82)%,t=23.544,P<0.01].FAM96B组的迁移能力显著低于对照组[(222.33±32.78)μm比(284.13 ±46.18)μm,t=4.227,P<0.01].FAM96B组侵袭能力显著低于对照组[(45.47±4.05)个比(101.13±5.54)个,t=31.413,P<0.01].裸鼠皮下成瘤模型中,FAM96B组裸鼠瘤体重量及体积与对照组比较明显减小(t体积=0.610,t重量=7.186,P均<0.05).结论 FAM96B在肝癌HepG2细胞中低表达,上调FAM96B表达可抑制HepG2细胞增殖、侵袭及转移并诱导其凋亡,且可抑制裸鼠皮下成瘤模型中的肿瘤生长.

石榴皮多酚对食管癌EC9706细胞的增殖及凋亡影响

目的探讨石榴皮多酚对食管癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响,并探索其机制是否与调控96序列相似家庭成员B(FAM96B)表达有关。方法RT-qPCR检测FAM96B在食管癌组织和癌旁组织中的表达。将食管癌细胞EC9706分为对照组,石榴皮多酚低、中、高剂量组,pcDNA组,pcDNA-FAM96B组,石榴皮多酚+si-NC组,石榴皮多酚+si-FAM96B组。采用MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖抑制率和凋亡率,Western blot检测CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax表达。结果与对照组比较,食管癌组织中FAM96B的表达升高(P<0.05)。石榴皮多酚干预后EC9706细胞增殖抑制率,凋亡率,FAM96B、p21和Bax蛋白表达均升高(P<0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达均降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。过表达FAM96B后EC9706细胞增殖抑制率,凋亡率,p21和Bax蛋白表达均升高(P<0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达均降低(P<0.05)。干扰FAM96B表达可部分逆转石榴皮多酚对EC9706细胞增殖、凋亡及其相关蛋白表达的影响(P<0.05)。结论石榴皮多酚可抑制食管癌细胞EC9706增殖,诱导细胞凋亡,其机制与调控FAM96B表达有关。