RNA干扰抑制FANCD2基因对多药耐药骨髓瘤细胞株药物敏感性的影响

目的:探讨FA/BRCA(fanconi anemia/BRCA)中siRNA干扰对多药耐药骨髓瘤细胞株的影响。方法:体外培养多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞系,通过相应渐增浓度的马法兰药物处理,选择性获得多药耐药的子代肿瘤细胞株RPMI-8226/R细胞。MTT法检测RPMI-8226和RPMI-8226/R细胞马法兰、ADM、VCR、CTX、Ara-C、VP-16及DDP的敏感性。siRNA干扰抑制FA/BRCA途径FANCD2蛋白表达,观察多发性骨髓瘤多药耐药细胞株对烷化剂药物敏感性的变化。结果:成功构建针对FANCD2基因的siRNA,将其转染多药耐药骨髓瘤细胞株,可以抑制细胞中FANCD2基因表达,转染细胞较转染前细胞FANCD2基因表达降低,对烷化剂的敏感性升高。结论:人多发性骨髓瘤多药耐药细胞株RPMI-8226/R其多药耐药性的产生可能与FA/BRCA途径中FANCD2表达增强有关,可通过抑制FANCD2表达而逆转细胞的耐药性达到增强烷化剂对耐药肿瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。沉默FANCD2表达可以提高多药耐药MM细胞对烷化剂的敏感性,而RNA干扰是一种沉默FANCD2表达的理想方法,因此它可能是一种有潜力的耐药MM辅助治疗新方法。

沉默FANCD2对人头颈鳞癌SIHN-005A细胞化疗敏感度的影响及其机制

目的研究FANCD2 sh RNA干扰对人头颈鳞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)细胞SIHN-005A化疗敏感度的影响,并初步探讨其可能机制。方法应用前期实验获得的FANCD2基因沉默效应稳定的人HNSCC SIHN-005A细胞,以嘌呤霉素持续筛选;Western blot检测沉默效应;CCK-8法检测顺铂作用后细胞增殖抑制率;Hoechst法检测细胞凋亡;Western blot检测Cyclin D1、Bax/Bcl-2、HIF-1α蛋白的表达。结果实验组细胞FANCD2蛋白表达明显下降,FANCD2蛋白沉默效率达60.5%。实验组细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组,且具有浓度及时间依赖性,实验组细胞对CDDP的IC50值明显低于阴性对照组和空白对照组。FANCD2基因沉默后实验组细胞凋亡率明显增高。加用CDDP后,Cyclin D1、Bcl-2、HIF-1α蛋白表达水平较加用CDDP前明显下调,Bax蛋白明显增强。结论沉默FANCD2可增加SIHN-005A细胞对化疗药物CDDP的敏感度,其机制可能与FANCD2 sh RNA干扰引起Bax/bcl-2、Cyclin D1、HIF-1α的表达变化有关。