异甘草素通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移的机制研究

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤。最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性。因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制。方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性。随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs, lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LUSC细胞中lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭。蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)和转移相关蛋白的表达。RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)实验和双萤光素酶实验验证lncRNA MIR22HG与miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系。结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭。生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞的恶性行为。此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达。miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达。过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用。结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物。

FASLG蛋白的序列分析及结构研究

为分析FASLG的序列特征,结构特征及与受体FAS的结合位点,为后续研究作用机制提供理论基础和实验思路,从NCBI蛋白质数据库中获取FASLG的序列信息,并使用生物信息学软件Prot Param、Prot Scale、Signal P 4.1、TMHMM Server v.2.0、Clustal X、SWISS-MODEL和Auto Dock等进行序列分析。结果表明:FASLG序列全长为281个氨基酸,偏碱性,为不稳定的亲水性蛋白;为跨膜蛋白,不含信号肽;有一个FAS受体结合域。FASLG的三维结构包含74个α螺旋,20个β折叠,56个延展片段,其余131个则全为无规则卷曲。FASLG蛋白通过15个氨基酸与其受体FAS蛋白相互耦合,从而形成FAS/FASLG信号通路来诱导凋亡。可见得到的FASLG的序列特征、结构及受体结合位点,将对后续研究FAS/FASLG信号通路及miR-21和FASLG在结肠癌细胞中的作用提供新思路和方向。

FAS/FASLG基因多态性与鞍山地区汉族人群患斑秃的相关性研究

目的探讨FAS/FASLG基因多态性与鞍山地区汉族人群患斑秃(alopecia areata,AA)的相关性。方法选取我院皮肤科自2019年5月至2020年11月就诊的112例AA患者作为病例组,另选124例既往无过敏史且身体健康的体检人群作为对照组。统计两组基本临床信息,哈德-温伯格平衡(HWE)定律检测各基因型在两组中是否达到遗传平衡,采用实时荧光定量PCR分析FAS/FASLG mRNA表达,凝胶电泳观察基因分型,采用多因素Logistic回归分析探讨AA的危险因素。结果FAS/FASLG基因位点rs2234767和rs763110在病例组和对照组中均符合HWE定律;病例组有AA家族病史、rs2234767位点G/G基因型和FAS mRNA水平均显著高于对照组(P<0.05),两组rs2234767和rs763110位点G/A、A/A、C/C、C/T、T/T基因型及FASLG mRNA水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,有家族斑秃病史[OR及95%CI:4.12(1.60~10.57)]、有rs2234767位点G/G基因型[OR及95%CI:3.34(1.64~6.80)]和FAS mRNA水平≥0.72[OR及95%CI:3.75(1.78~7.88)]是发生AA的危险因素(P<0.05)。结论FAS基因rs2234767位点G/G基因型可能会促进FAS mRNA的表达,从而增加AA的患病风险。

系统性红斑狼疮患者FAS和FASLG mRNA的表达及其与临床特征的关系

目的探讨系统性红斑狼疮患者FAS和FAS配体基因(FAS ligand,FASLG)m RNA的表达情况,及其与系统性红斑狼疮临床特征的关系。方法选取2015年1月-2015年12月于吉林大学第一医院风湿免疫科诊断为系统性红斑狼疮患者47例作为系统性红斑狼疮组,健康者47例作为对照组,系统性红斑狼疮组又分为活动性系统性红斑狼疮组和非活动性系统性红斑狼疮组。观察各组FAS和FASLG m RNA的表达,以及FAS和FASLG m RNA的表达与系统性红斑狼疮患者临床特点的关系。结果系统性红斑狼疮组FAS m RNA相对表达量高于对照组(P<0.05),活动期系统性红斑狼疮组FAS m RNA相对表达量高于非活动期系统性红斑狼疮组(P<0.05)。FASLG m RNA相对表达量在各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。系统性红斑狼疮有发热和无发热者FAS m RNA表达差异有统计学意义(P<0.05);有面部红斑和无面部红斑者FAS和FASLG m RNA表达差异有统计学意义(P<0.05);有皮疹和无皮疹者FASLG m RNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞中FAS m RNA水平升高,且与疾病活动期有关,系统性红斑狼疮患者的部分临床特点与FAS和FASLG m RNA的表达有关。

人脑胶质瘤中miR-21调控FASLG基因表达的作用及机制

目的研究mi R-21在人脑胶质瘤细胞中调控FASLG基因表达的作用效果及分子机制。方法应用实时定量PCR方法检测人脑胶质瘤及其癌旁组织中mi R-21及FASLG基因的表达。转染mi R-21的前体(mi R-21precursor)至人脑胶质瘤U87MG细胞,然后应用Western blot法检测FASLG蛋白的表达。应用荧光素酶报告基因表达分析实验分析mi R-21能否与FASLG基因的3'非翻译区(3'UTR)特异性结合。结果人脑胶质瘤组织中的mi R-21m RNA的表达水平明显比癌旁组织少,而FASLG m RNA则增加显著,二者的表达水平呈明显的负性相关。转染mi R-21 precursor能够显著上调胶质瘤U87MG细胞中mi R-21的表达,而在mi R-21高表达的胶质瘤U87MG细胞中,FASLG的蛋白表达下调显著。mi R-21能够特异性地与FASLG基因的3'UTR中的种子区结合,负性调节荧光素酶报告基因的表达。结论 mi R-21与FASLG基因与人脑胶质瘤的发生相关,mi R-21在胶质瘤细胞中能够靶向沉默FASLG基因。

基于“方证相关”理论的治“痹”经方调控TLR/TRAF信号通路的比较研究

目的:在方证相关理论指导下,比较乌头汤、桂枝芍药知母汤和白虎加桂枝汤调控佐剂性关节炎大鼠脾脏TLR2,TRAF6,Faslg基因表达的差异。方法:建立佐剂性关节炎大鼠模型,采用实时荧光定量PCR技术,以18 sRNA为内参基因,用SYBR G reen I染料法检测脾脏TLR2,TRAF6,Faslg基因相对表达,2-ΔΔCT法进行进行计算和数据分析。结果:佐剂性关节炎大鼠脾脏TLR2,TRAF6,Faslg基因均较空白组显著高表达,乌头汤、桂枝芍药知母汤和白虎加桂枝汤各剂量均能显著抑制或降低模型TLR2,TRAF6,Faslg基因的异常高表达,临床等效剂量时降低的TLR2和Faslg基因表达作用由强到弱依次是乌头汤>桂枝芍药知母汤>白虎加桂枝汤,但降低TRAF6作用强度趋势刚好与TLR2和Faslg基因相反。结论:乌头汤、桂枝芍药知母汤和白虎加桂枝汤均对佐剂性关节炎大鼠脾脏异常高表达TLR2,TRAF6,Faslg基因有下调作用,但强度存在差异,与药效学和调节T细胞亚群趋势较为一致,提示对TLR2/TRAF6信号通路和凋亡受体Faslg基因下调可能是3个经方药效学及对外周T细胞亚群的不同调节强度的原因之一。