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FaSPS1基因对草莓果实成熟调控的分子机理 被引量:1
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作者 王媛花 颜志明 +2 位作者 解振强 贾思振 冯英娜 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期857-866,共10页
该研究以草莓品种‘红颜’(Fragaria×ananassa‘Benihoppe’)为试材,分析了草莓果实发育不同阶段蔗糖磷酸合成酶基因(FaSPS1)的表达量变化,采用PCR方法克隆FaSPS1基因,构建带有报告基因的e-GFP植物表达载体,通过瞬时转基因方法转... 该研究以草莓品种‘红颜’(Fragaria×ananassa‘Benihoppe’)为试材,分析了草莓果实发育不同阶段蔗糖磷酸合成酶基因(FaSPS1)的表达量变化,采用PCR方法克隆FaSPS1基因,构建带有报告基因的e-GFP植物表达载体,通过瞬时转基因方法转化草莓果实,采用观察绿色荧光和检测目的基因表达量的方法鉴定转基因植物,并分析FaSPS1基因超表达和反义表达后草莓果实的成熟发育以及与成熟相关的基因表达量变化,探究FaSPS1基因在果实成熟发育中的特殊作用,为深入了解草莓果实发育和成熟调控的分子机理提供思路。结果显示:(1)成功克隆得到FaSPS1基因(GenBank登录号AB267868.1);成功构建带有报告基因e-GFP的FaSPS1基因超表达载体和反义基因表达载体,通过瞬时转基因方法转化并经荧光和目的基因表达量检测的方法鉴定获得转FaSPS1基因草莓植株。(2)与空载对照和非转基因果实相比,FaSPS1基因过表达可促进草莓果实成熟,能够使草莓果实成熟期提前,且果实中蔗糖果糖含量升高;但反义表达后会抑制草莓果实成熟,果实中苹果酸含量升高。(3)基因超表达或者反义表达后,草莓果实成熟相关基因的表达量受到不同程度调控,其中糖代谢基因FaSPS2/3、FaSUT1,果实成软化基因FaEXP1、FaEXP3、FaXYL1以及激素代谢基因FaJAZ1、FaJAZ2、FaJAZ8、FaOPR3、FaPYL1、FaPYL8、FaPYL9、FaNCED1表达量变化最明显。研究推测,FaSPS1基因可能通过影响草莓果实中和成熟相关的糖代谢基因、果实软化基因以及激素代谢基因来调控草莓果实成熟。 展开更多
关键词 草莓'红颜’ faspS1基因 果实成熟
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Aspera-fasp技术在视频CDN系统中的应用与研究
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作者 陈璟远 朱民耀 《电视技术》 北大核心 2015年第20期59-63,78,共6页
研究、设计了一个基于HTTP Live Streaming视频流媒体技术的视频直播和点播的CDN系统,并在此基础上对其进行优化。目前,传统的CDN系统虽适用于目前国内大部分的网络环境,但在某些极端恶劣的环境条件下,比如无专线网络情况下的跨国数据传... 研究、设计了一个基于HTTP Live Streaming视频流媒体技术的视频直播和点播的CDN系统,并在此基础上对其进行优化。目前,传统的CDN系统虽适用于目前国内大部分的网络环境,但在某些极端恶劣的环境条件下,比如无专线网络情况下的跨国数据传输,还是无法满足正常的业务需求。因此,该设计引入了Aspera-fasp传输技术,这是一项突破性的传输协议,能充分利用现有的WAN基础设施和通用硬件,让其为传统的CDN系统提供全球数据的快速传输。 展开更多
关键词 CDN系统 流媒体 全球数据传输 Aspera-fasp
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FASP——中小企业实现网络财务的一种可行模式
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作者 陈志军 《对外经贸财会》 2002年第11期32-33,共2页
面对电子商务带来的挑战和吸引力,许多大型企业纷纷投入巨额资金和人力兴建自己的网络财务系统.但对于众多的中小企业而言,构建网络财务系统不仅缺少必要的资金,更重要的是缺乏IT建设的专门人才和维护经验.
关键词 中小企业 网络财务 fasp 财务应用服务供应商
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肿瘤相关基因MIP在HeLa细胞中的亚细胞定位及其变化
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作者 叶晓霞 霍克克 陈东 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期175-179,共5页
目的探讨肿瘤相关基因MIP的亚细胞定位情况,以及MIP与其相互作用蛋白FASP1、MafF共转染HeLa细胞后亚细胞定位的变化和共定位情况。方法利用在线蛋白质结构和亚细胞定位分析软件,对MIP可能的蛋白结构和亚细胞定位进行分析预测;结合分析结... 目的探讨肿瘤相关基因MIP的亚细胞定位情况,以及MIP与其相互作用蛋白FASP1、MafF共转染HeLa细胞后亚细胞定位的变化和共定位情况。方法利用在线蛋白质结构和亚细胞定位分析软件,对MIP可能的蛋白结构和亚细胞定位进行分析预测;结合分析结果,采用荧光蛋白融合表达和激光扫描共焦显微技术,观察比较MIP融合于绿色荧光蛋白(GFP)的N端或C端时在HeLa细胞中的亚细胞定位情况。pDsRed-FASP1、pDsRed-MafF分别单独转染,或者与MIP-GFP共同转染HeLa细胞,观察红色、绿色荧光蛋白的分布,分析比较各蛋白的亚细胞定位、变化及共定位情况。结果单独转染时,MIP主要呈不均匀点状分布于细胞质;GFP融合于MIP蛋白的N端或者C端,其亚细胞定位略有变化,MIP-GFP的不均匀分布更加典型,在胞质中呈点状聚集。DsRed-FASP1单独转染时弥散分布于细胞质;与MIP-GFP共同转染后,MIP与FASP1在细胞内的分布没有大的改变,两者能够共定位于细胞质。DsRed-MafF单独转染时弥散分布于细胞核;而与MafF-GFP共同转染时,两者的亚细胞定位均发生显著改变,此时两者能够共定位于细胞核内核仁区。结论 MIP能够与FASP1、MafF在细胞内不同部位相互作用。MIP在细胞质和细胞核中的定位变化,提示MIP可能作为一个重要的信号分子,在细胞质和细胞核中发挥多重作用。 展开更多
关键词 MIP基因 fasp1 MaW 亚细胞定位 荧光融合蛋白 激光扫描共焦显微镜
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基于超滤膜辅助的糖蛋白全O-连接糖链的富集和MALDI-TOF/TOF质谱结构解析 被引量:2
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作者 武艳丽 杨刚龙 +1 位作者 缪明永 关锋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2017年第1期70-79,共10页
哺乳动物中约有50%以上的蛋白质都发生了糖基化修饰.连接在丝氨酸或苏氨酸上的O-连接糖链是常见的蛋白质糖基化修饰方式之一,其主要功能是维持与其连接的蛋白质部分的空间构象,保护其免受蛋白酶水解及覆盖某些抗原决定簇.糖链结构的解... 哺乳动物中约有50%以上的蛋白质都发生了糖基化修饰.连接在丝氨酸或苏氨酸上的O-连接糖链是常见的蛋白质糖基化修饰方式之一,其主要功能是维持与其连接的蛋白质部分的空间构象,保护其免受蛋白酶水解及覆盖某些抗原决定簇.糖链结构的解析有助于更清楚地认识糖蛋白及其功能.本研究建立了一种基于超滤膜辅助(FASP)富集细胞、血清和尿液中糖蛋白全O-连接糖链的方法,根据糖蛋白与其糖链结构之间的分子质量差异,利用10 KD超滤膜富集蛋白质样品中由β消除反应释放的全O-连接糖链,将糖链甲基化修饰后再使用MALDI-TOF/TOF-MS进行解析,同时利用二级质谱进行结构确认.通过上述方法可从标准糖蛋白mucin、细胞、血清和尿液样本中分别鉴定到83、29、33和85种O-连接糖链结构,利用该方法可以从复杂样品中富集和解析糖蛋白全O-连接糖链,实现快速、高效、高通量地解析糖蛋白O-连接糖链的目的. 展开更多
关键词 O-连接糖链 糖组学 超滤膜辅助(fasp) MALDI—TOF/TOF—MS
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利用亲水富集策略分析人血浆中N-糖基化蛋白及N-糖类型 被引量:5
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作者 马成 潘一廷 +3 位作者 张琪 王继峰 钱小红 应万涛 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1057-1063,共7页
蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白。针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物。然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不... 蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白。针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物。然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不均一性,影响了血浆中糖蛋白的鉴定效率。本文利用亲水材料ZIC-HILIC制备亲水富集柱分别对人血浆中的N-糖链和N-糖肽进行富集,并结合碱性反相色谱进行肽段的预分离和高准确度质谱分析,最终在健康人的血浆中鉴定到了299个糖基化蛋白、637个糖基化位点,并识别出31种不同的糖型。在这些鉴定到的糖基化位点中,新发现有107个N-糖基化位点(占总位点数的16.8%)。本方法操作简单,可以有效富集N-糖肽和N-糖,为在血浆中寻找糖蛋白和糖链生物标志物提供了可靠的手段。 展开更多
关键词 超滤辅助样品制备 亲水相互作用色谱 反相色谱 N-糖基化蛋白 N-糖
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人HEK293T细胞外泌体的蛋白质组学分析 被引量:3
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作者 殷爱红 胡家 +1 位作者 任晓曦 杨颖 《继续医学教育》 2018年第10期138-140,共3页
目的建立一套完整的外泌体样品提取,液质联用蛋白质组学检测方法。方法采用超速离心法提取细胞培养液外泌体,经过FASP酶切,收集酶解肽段,通过Easy-Nano LC液相色谱仪和Triple TOF6600质谱仪(美国Sciex公司)液质联用检测外泌体全酶解产物... 目的建立一套完整的外泌体样品提取,液质联用蛋白质组学检测方法。方法采用超速离心法提取细胞培养液外泌体,经过FASP酶切,收集酶解肽段,通过Easy-Nano LC液相色谱仪和Triple TOF6600质谱仪(美国Sciex公司)液质联用检测外泌体全酶解产物,并通过ProteinPilot软件(Sciex)处理数据,检索Uniprot的相应数据库,从而鉴定外泌体蛋白质。结果通过超速离心法,成功提取到细胞培养液外泌体。并通过LC-MS-MS方法,软件分析和数据库检索到833个匹配蛋白。结论此方法可有效获取外泌体,并鉴定外泌体蛋白质。 展开更多
关键词 外泌体 超速离心 fasp酶解 LC/MS/MS
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舌癌临床样本N-连接糖链的表达分析
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作者 郭辉 张健 +2 位作者 杨刚龙 黄如今 郭佳 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第6期7-14,共8页
从糖组学角度分析健康志愿者和舌癌患者血清中差异表达的N-连接糖链,找出与舌癌密切相关的N-连接糖链结构,为舌癌早期诊断、治疗及预后提供参考依据。以临床血清样品为研究材料,采用滤膜分离全糖蛋白N-连接糖链法(N-glycan-FASP-T)对健... 从糖组学角度分析健康志愿者和舌癌患者血清中差异表达的N-连接糖链,找出与舌癌密切相关的N-连接糖链结构,为舌癌早期诊断、治疗及预后提供参考依据。以临床血清样品为研究材料,采用滤膜分离全糖蛋白N-连接糖链法(N-glycan-FASP-T)对健康志愿者和舌癌患者血清中全糖蛋白N-连接糖链分别进行比较分析,并利用MALDI-TOF/TOF串联质谱解析糖链结构,通过一级、二级质谱方法分析糖链结构和种类,并通过对糖链丰度数据的ROC曲线分析等统计学方法分析确定其表达水平对舌癌的影响。结果表明,与健康志愿者相比,舌癌患者血清糖链特征主要有:杂合型糖链比例升高;在复合型糖链中,三天线比例升高,而二天线及四天线的比例降低;末端Neu5Gc增加;平分型糖链比例升高。统计学分析发现其中有10个糖链结构在疾病发生过程中显著上调(AUC值大于0.50,其中m/z=1256.510/1418.573的两个糖链的AUC值达到了0.75),可以作为潜在的生物标志物并可以进行深入探究,为舌癌早期诊断提供临床参考依据。 展开更多
关键词 舌癌 MALDI-TOF/TOF-MS N-glycan-fasp-T N-连接糖链 糖组学
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Analysis of Fast and Secure Protocol Based on Continuous-Time Markov Chain
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作者 周从华 曹美玲 《China Communications》 SCIE CSCD 2013年第8期137-149,共13页
To provide an optimal alternative to traditional Transmission Control Protocol(TCP)-based transport technologies,Aspera's Fast and Secure Protocol(FASP)is proposed as an innovative bulky data transport technology.... To provide an optimal alternative to traditional Transmission Control Protocol(TCP)-based transport technologies,Aspera's Fast and Secure Protocol(FASP)is proposed as an innovative bulky data transport technology.To accurately analyse the reliability and rapidness of FASP,an automated formal technique - probabilistic model checking - is used for formally analysing FASP in this paper.First,FASP's transmission process is decomposed into three modules:the Sender,the Receiver and the transmission Channel.Each module is then modelled as a Continuous-Time Markov Chain(CTMC).Second,the reward structure for CTMC is introduced so that the reliability and rapidness can be specified with the Continuous-time Stochastic Logic(CSL).Finally,the probabilistic model checker,PRISM is used for analysing the impact of different parameters on the reliability and rapidness of FASP.The probability that the Sender finishes sending data and the Receiver successfully receives data is always 1,which indicates that FASP can transport data reliably.The result that FASP takes approximately 10 s to complete transferring the file of 1 G irrespective of the network configuration shows that FASP can transport data very quickly.Further,by the comparison of throughput between FASP and TCP under various latency and packet loss conditions,FASP's throughput is shown to be perfectly independent of network delays and robust to extreme packet loss. 展开更多
关键词 fasp probabilistic model checking CTMC PRISM
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nanoLC-MS/MS检测未成熟树突状细胞与其外泌体蛋白组分差异的初步研究
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作者 林箐 李炎 +3 位作者 屈梦珂 刘兴 张志荣 张凌 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期81-86,共6页
目的采用一种相对快速、样品需求量少的纳升级液相色谱串联质谱(nanoLC-MS/MS)法初步探究未成熟树突状细胞DC2.4及其来源的外泌体(DC-Exo)蛋白组分差异。方法收集DC2.4细胞培养基上清,采用梯度离心法分离DC-Exo,使用蔗糖密度梯度超速离... 目的采用一种相对快速、样品需求量少的纳升级液相色谱串联质谱(nanoLC-MS/MS)法初步探究未成熟树突状细胞DC2.4及其来源的外泌体(DC-Exo)蛋白组分差异。方法收集DC2.4细胞培养基上清,采用梯度离心法分离DC-Exo,使用蔗糖密度梯度超速离心进一步纯化而获得DC-Exo测定样品。采用Bradford法测定其蛋白总量,使用动态光散射法和透射电镜分别对DC-Exo粒度分布和形态进行考察。采用FASP酶解法制备DC2.4细胞和DC-Exo待测蛋白样品。nanoLC-MS/MS检测待测样品:采用μLPickUp上样模式,上样量仅1μg,Transport liquid及Micro A相均为0.05%三氟乙酸-2%乙腈(V/V)aq.;nanoLC使用Acclaim?PepMap RSLC分析柱,流动相为(A)0.1%甲酸水溶液(V/V)和(B)0.08%甲酸-80%乙腈(V/V),采用梯度洗脱,流速为0.3μL/min;MS/MS采用LTQ Obitrap双重质谱,使用APCI nanospray离子源,"一拖十"数据采集模式。得到结果以Uniport Mouse (Fasta文件)为蛋白数据库,采用SQUEST对DC2.4细胞及DC-Exo蛋白质谱信息进行搜索和匹配,并整理分析。结果得到产量较高、粒径为40~200 nm的DC-Exo。用FASP酶解法处理得到的DC2.4细胞和DC-Exo冻干蛋白样品复溶后可直接上样,且上样量仅需1μg。搜库结果显示,DC2.4细胞含蛋白998种,其中高表达227种,特有蛋白535种;DC-Exo仅含蛋白348种,其中特有高表达18种;两者共有蛋白为306种,共有高表达蛋白7种。结论本实验采用的nanoLC-MS/MS法所需进样量少,可相对快速地初步检测DC2.4细胞及其外泌体的蛋白组分差异。 展开更多
关键词 nanoLC-MS/MS 树突状细胞 外泌体 蛋白组分 fasp酶解法 SQUEST
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