不同治法方药对脂肪肝大鼠肝组织NF-κBp65及Kupffer细胞p38MAPK蛋白表达的影响

【目的】探讨中医不同治法方药对脂肪肝大鼠肝组织核因子-κB(NF-κBp65)及Kupffer细胞p38MAPK蛋白活性的影响。【方法】选用SD大鼠98只,随机分为正常组、模型组、疏肝组(灌服3.2 g.kg-1.d-1剂量的柴胡疏肝散)、健脾组(灌服10.0 g.kg-1.d-1剂量的参苓白术散)、祛湿组(灌服3.5 g.kg-1.d-1剂量的平胃散)、活血组(灌服7.1 g.kg-1.d-1剂量的膈下逐瘀汤)、综合组(灌服11.9 g.kg-1.d-1剂量的自拟方);采用高脂饲料喂养、白酒灌胃法复制大鼠脂肪肝实验动物模型,给药12周后处死动物取肝组织,应用免疫组织化学法检测NF-κBp65在各组中的活性及组织病理学变化。同时每组取3只大鼠分离Kupffer细胞,应用W estern b lot法检测不同组别大鼠Kupffer细胞p38MAPK蛋白的表达及其磷酸化水平的变化。【结果】模型组大鼠肝组织NF-κBp65蛋白表达较正常组显著增加(P<0.05),疏肝组、健脾组NF-κBp65阳性表达最低、肝组织脂肪变最轻,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.05),且脂肪肝大鼠肝组织NF-κBp65表达强度与其病理学的改变呈正相关(P<0.01)。模型组大鼠Kupffer细胞p38MAPK蛋白表达和磷酸化p38MAPK蛋白表达较正常组显著增加(P<0.01),各给药组p38MAPK蛋白表达和磷酸化p38MAPK蛋白表达均较模型组显著降低(P<0.01),其中以健脾组、疏肝组下降最为明显。【结论】抑制NF-κBp65和p38MAPK蛋白及磷酸化p38MAPK蛋白表达可能是上述不同治法方药抗脂肪肝作用的机制之一。

白花蛇舌草对小鼠活体腹水H22肝癌细胞及T细胞的影响

【目的】观察白花蛇舌草对小鼠腹水H22肝癌细胞形态学及腹水CD4+、CD8+T细胞表达的影响。【方法】将SPF级昆明种小鼠随机分成4组,每组10只,分别为模型组、白花蛇舌草组(剂量为25 g/kg)、党参对照组(25 g/kg)、热休克处理组;均采用活体腹水H22肝癌细胞腹腔移植法复制模型;采用涂片、瑞氏—姬姆萨染色及免疫组织化学标记方法观察各组荷瘤小鼠腹水H22肝癌细胞形态学变化及腹水CD4+、CD8+T细胞的表达。【结果】白花蛇舌草组及热休克处理组小鼠活体腹水H22肝癌细胞变形较为严重,胞膜不完整、发泡;部分细胞核见偏移或固缩。白花蛇舌草组腹水CD4+及CD8+T细胞表达均呈增高趋势,党参对照组及热休克处理组分别以CD4+和CD8+T细胞表达为主。【结论】白花蛇舌草能一定程度抑杀小鼠活体腹水H 22肝癌细胞,其机理可能与提高荷瘤小鼠的T细胞免疫功能及具有一定的细胞毒作用有关。

山奈酚对大鼠肝癌细胞CBRH7919的增殖抑制及诱导凋亡作用

【目的】观察山奈酚对大鼠肝癌细胞CBRH7919增殖抑制、诱导凋亡和细胞周期的影响。【方法】选用CBRH7919肝癌细胞株,传代培养24 h后,加入不同浓度山奈酚处理,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,4,′6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞凋亡形态,彗星电泳技术和流式细胞术检测药物对细胞DNA的作用。【结果】山奈酚体外能抑制大鼠肝癌细胞CBRH7919的增殖,以6.25、12.5、25、50、100μmol/L浓度的山奈酚处理细胞72 h,对CBRH7919细胞的增殖抑制率显著升高,呈明显的剂量效应关系。用50、100μmol/L浓度的山奈酚作用于细胞24、48、72、96 h,对细胞的增殖抑制作用显著增强,呈明显的时间效应关系,即药物作用时间越长,抑制作用越强。DAPI染色显示不同浓度山奈酚组的细胞均有明显的细胞凋亡特征。彗星电泳显示30、60、120μmol/L浓度的山奈酚作用于细胞72 h后,细胞后面均呈现长度不等的拖尾,平均光密度值较空白对照组显著降低(P<0.01),彗星尾距较空白对照组显著增加(P<0.01),且两者改变与药物浓度相关。流式细胞仪检测结果显示30、60、120μmol/L浓度的山奈酚作用于细胞72 h出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期被阻滞于S期,不同浓度山奈酚组凋亡率较空白对照组均明显增高。【结论】山奈酚可能通过抑制大鼠肝癌细胞CBRH7919的增殖及诱导其凋亡而产生抗肿瘤作用。

加味甘露消毒丹方对原发性肝癌介入治疗后毒副反应34例

经肝动脉灌注化疗栓塞(TACE)已成为中晚期原发性肝癌的最有效的姑息性治疗方法,但TACE后常产生发热、上腹胀痛、恶心呕吐等毒副反应。目前临床上均以西药对症处理。本科自1998-12/1999-07,对34例中晚期原发性肝癌行TACE的患者发生的毒副反应采用了中药加味甘露消毒丹方治疗,现报道如下。 1 材料和方法 1.1 材料 1998-12/1999-07经TACE治疗的34例原发性肝癌患者,年龄在38岁～73岁,治疗组及对照组各17例,每组男女均分别为15例和2例,其中10例病理组织学诊断为肝细胞性肝癌,3例为胆管细胞癌,其余均为临床诊断,符合中国抗癌协会1989年制定的《中国常见恶性肿瘤诊治规范》中的原发性肝癌诊断标准。根据1986年国际防抗癌联盟(UICC)制定的肝癌TNM分期,均属Ⅲ～Ⅳ期患者,KPS计分均在60分以上,采用常规TACE治疗,化疗药物选用5-Fu,ADM,MMC,两组患者进行TACE后均采用预防感染、补液常规处理。

肝衰竭中医证候研究概述及扶阳疗法初探

概述了历代医家对肝衰竭的中医病因、病机、病位、辨证论治等内容的认识,研究结果显示当代学者与古代医家对肝衰竭的认识基本一致,并且当代学者在前贤的基础上,对肝衰竭的病因、病机、病位、辨证论治等内容作了一定的补充和完善。另外,还从扶阳疗法角度探讨了慢性肝衰竭的治疗,为慢性肝衰竭的治疗提供了新的思路和新的方法。

白花蛇舌草对H22肝癌细胞热休克蛋白70表达的影响

【目的】观察H22肝癌细胞热休克蛋白70(HSP70)表达及清热解毒中药白花蛇舌草对其表达的影响。【方法】以培养的H22肝癌细胞腹腔接种于小鼠使小鼠致瘤,然后将荷瘤小鼠分为模型组、白花蛇舌草组(剂量为25 g/kg)、党参对照组(剂量为25 g/kg)及热休克处理组共4组。采用免疫组化标记法检测各组活体腹水H22肝癌细胞HSP70的表达情况。【结果】白花蛇舌草组及热休克处理组H22肝癌细胞HSP70的表达显著性高于模型组(P<0.05或P<0.01);党参对照组H22肝癌细胞的HSP70表达与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。【结论】白花蛇舌草可能通过诱导H22肝癌细胞HSP70表达,增强其免疫原性而发挥抗肿瘤作用。

六味地黄丸对小鼠移植性肝癌自杀基因治疗的增效作用

【目的】观察六味地黄丸对小鼠皮下移植性肝细胞癌自杀基因治疗的增效作用,探讨建立中西医结合肿瘤自杀基因联合治疗方案的可行性。【方法】培养病毒包装细胞PT67/tk,病毒上清感染肝细胞癌细胞株H22后用G418筛选2周,获得抗性细胞克隆,命名为H22/tk并进行体外丙氧鸟苷(GCV)杀伤试验;证明杀伤活性后,将H22/tk与野生型H22按1∶4的比例混合后接种于昆明种小鼠皮下组织内造模,分为模型对照组、自杀基因治疗组、六味地黄丸治疗组和联合治疗组(N=20),并设正常对照组(N=10);六味地黄丸治疗从接种第2天起共15 d,GCV治疗从接种第6天起共11 d,观察疗效。【结果】体外实验中GCV对H22/tk肿瘤细胞具有明显的杀伤效应,表明体外病毒感染肝癌细胞成功,病毒携带的外源性自杀基因已表达且具有生物学活性。体内实验中于接种肿瘤细胞后第6天各组能触摸到肿瘤,成瘤率100%。自杀基因联合六味地黄丸治疗对小鼠移植性肝细胞癌生长速度具有明显抑制作用,以瘤块质量计算,其抑瘤率为63.0%(P<0.05);而单纯六味地黄丸治疗和单纯自杀基因治疗抑瘤率分别为46.3%和37.4%,但两者与模型组比较差异均无显著性意义。病理检查:各治疗组肉眼可见肿瘤体积均较模型对照组肿瘤体积小,以联合治疗组更明显。镜下可见各治疗组肿瘤细胞密度相对较低,肿瘤周围有较多纤维结缔组织增生及炎症细胞浸润,联合治疗组更明显,各组间差别以炎症细胞浸润最突出。【结论】六味地黄丸对小鼠移植性肝癌自杀基因治疗具有一定的增效作用,其疗效优于单纯自杀基因疗法或单纯六味地黄丸治疗。

银杏外种皮多糖抑制小鼠肝癌及诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的：研究银杏外种皮多糖（Ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ ｅｎｏｃａｒｐ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＧＢＥＰ）对小鼠肝癌的抑制作用及作用机制。方法：建立小鼠肝癌（Ｈｅｐｓ）实体瘤及腹水癌模型，观察抑瘤率和小鼠的生命延长率，并用流式细胞术（ＦＣＭ）检测小鼠肝病实体瘤的细胞周期及癌细胞凋亡率。结果：ＧＢＥＰ在５０，１００和 ２００ｍｇ·ｋｇ～（－１）剂量下，对小鼠肝癌的抑瘤率皆大于３０％，能延长荷腹水型肝癌小鼠的生存期；随ＧＢＥＰ剂量增大，Ｇ０－Ｇ１期和Ｓ期细胞（％）不断减少，而Ｇ２—Ｍ期细胞及凋亡细胞（％）则不断增加。结论：ＧＢＥＰ可抑制小鼠肝癌（Ｈｅｐｓ）．其作用机制可能与阻止Ｇ２—Ｍ期细胞转换而影响癌细胞在细胞周期中的进程和干扰Ｓ期细胞ＤＮＡ合成以及诱导小鼠肝癌细胞凋亡有关。

脂肝清颗粒对脂肪肝模型大鼠的影响

目的 观察脂肝清颗粒对不同脂肪肝模型大鼠的影响。方法 用乙硫氨酸脂肪肝、酒精脂肪肝模型,观察不同剂量的脂肝清颗粒对大鼠血脂代谢、肝内脂代谢、肝组织改变、肝功能和肝内脂肪变细胞百分比等的影响。结果与结论 脂肝清颗粒可使乙硫氨酸大鼠血总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)显著升高,肝内(TG)、糖原(Gn)显著降低,肝脏脂肪变性和颗粒变性显著改善。可使酒精性脂肪肝大鼠血CHO、TG、低密度脂蛋白(LDL)降低,高密度脂蛋白(HDL)升高,降低肝内TG、Gn含量,对酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂肪变性、颗粒变性、纤维组织增生有明显的改善作用。图象分析可见:脂肝清颗粒有降低脂肪变细胞面积百分比、提高正常肝细胞面积百分比的作用;对脂肪变细胞/肝细胞面积百分比比值有减少作用。其高、中、低剂量组的药效作用强度有一定的量效关系。

肝纤维化的中医中药治疗

近年来广泛开展了中药抗肝纤维化的实验与临床研究,为临床治疗提供了许多宝贵经验,显示出特有的优越性.中医中药治疗肝纤维化,当从慢性肝炎及肝硬变的整体入手,以病机为基础,辨证施治.中医并无纤维化一词.据研究,中医所描述的'血瘀'或'症积痞块'与纤维组织增生性疾病密切相关.慢性肝病系因肝病既久,乘脾犯胃及肾,致肝、脾、肾俱损,气、血、水搏结,其关键在于气滞血瘀.因此治则要以活血化瘀为基础,辨证滋补肝肾或温补脾肾.

甲肿方治疗良性非毒性甲状腺肿的疗效观察

[目的]探讨功能健脾疏肝、软坚化痰的甲肿方治疗良性非毒性甲状腺肿的临床疗效。[方法]选择良性非毒性甲状腺肿患者分为观察组(28例)和对照组(16例),分别给予甲肿方和左旋甲状腺素片(L-T4)治疗,疗程2～6个月。[结果]观察组痊愈12例(42.86％)、显效9例(32.14％)、有效4例(14.28％),对照组痊愈5例(31.25％)、显效3例(18.75％)、有效2例(12.50％),两组比较,均无显著性差异(P>0.05);观察组总有效率89.29％,对照组62.50％,两组相比,差异有显著性(P<0.05)。[结论]甲肿方是治疗良性非毒性甲状腺肿的有效方剂。

疏肝活血法对下肢缺血模型大鼠血管内皮祖细胞的影响

【目的】观察疏肝活血法对下肢缺血模型大鼠外周血管内皮祖细胞(EPC)的影响。【方法】将50只SD大鼠随机分为3组:中药组20只,模型组20只,假手术组10只。中药组和模型组均采用右下肢股动脉结扎及分支剔除术复制大鼠下肢缺血模型,假手术组仅暴露股动脉但不结扎股动脉及其分支。中药组术后按0.5 g.kg-1.d-1剂量灌服柴胡疏肝散合大黄虫丸煎剂,连续7 d。检测各组术前1 d、术后第1、3、7天4个时间点大鼠外周血酶学指标肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)水平变化及双荧光阳性细胞[CD34+、血管内皮生长因子受体(VEGFR2+)]比例。【结果】术后模型组外周血酶学指标AST、CK、LDH、HBDH水平较假手术组均显著上升,术后第3、7天中药组各项酶学指标水平较模型组及术后第1天均显著下降(P<0.05)。术后中药组和模型组反映EPC变化的CD34+、VEGFR2+双荧光阳性细胞比例较假手术组均显著升高(P<0.05),且中药组升高较模型组更为显著(P<0.05或P<0.01)。【结论】疏肝活血法可有效地改善下肢缺血状态,其作用可能与其能增加外周血EPC数量有关。

软肝颗粒抗免疫性肝纤维化作用机制研究

[目的]探讨软肝颗粒抗肝纤维化、肝硬化形成的作用机理。[方法]以秋水仙碱为阳性对照组,观察软肝颗粒高、低剂量组对免疫性肝纤维化大鼠血清转化生长因子β1(TGF β1),羟脯氨酶(Hyp),Ⅰ、Ⅲ型胶原,肝功能及肝脏病理变化的影响。[结果]软肝颗粒和秋水仙碱均能降低牛血清白蛋白(BAS)肝纤维化大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)水平,提高血清总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)水平,与模型组比较有非常显著性差异(P<0.01),其中高剂量组降ALT能力优于秋水仙碱组(P<0.05);软肝颗粒和秋水仙碱能降低血清Ⅰ、Ⅲ型胶原,TGF β1水平和肝组织羟脯氨酸含量,与模型组比较有非常显著性差异(均P<0.01),其中高剂量组作用分别优于低剂量组和秋水仙碱组(P<0.05或P<0.01),低剂量组与秋水仙碱组比较无显著性差异(P>0.05);肝组织病理改善高剂量组优于秋水仙碱组。[结论]软肝颗粒能改善肝组织病理变化,恢复肝功能,降低血清TGF β1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平及Hyp含量,抑制肝纤维化、肝硬化的形成。

复方肝毒清对免疫性肝损伤模型小鼠的保护作用

[目的]观察复方肝毒清对刀豆蛋白A(ConA)所致小鼠肝损伤的保护作用。[方法]昆明种小鼠60只,随机分为空白对照组,模型对照组,肝毒清高、中、低剂量组(20、10、5g/kg),联苯双酯组(150mg/kg);除空白对照组外,所有小鼠2次尾静脉注射ConA(20mg/kg)复制肝损伤模型,各组均按设计剂量灌胃给药,空白对照组和模型对照组给予等容积生理盐水,共给药3次;取血清检测谷丙转氨酶(ALT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),取肝组织检测TNF-αmRNA表达,并进行肝组织病理学检查。[结果]肝毒清高、中、低剂量组均能降低血清ALT、TNF-α水平,抑制肝组织TNF-αmRNA表达,与模型对照组比较具有显著性差异(均P<0.01),并能一定程度改善肝组织病理变化。[结论]复方肝毒清对ConA所致小鼠肝损伤具有一定的保护作用。

健脾补肾方加味调节调节性T淋巴细胞/辅助性T淋巴细胞平衡的抗肝纤维化作用机制

目的观察健脾补肾方加味对大鼠肝纤维化的治疗效果及对调节性T淋巴细胞(Treg)和辅助性T淋巴细胞(Th)17的影响。方法 32只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、健脾补肾方组和健脾补肾方加味组,四氯化碳溶液皮下注射造模。用药组在第4周开始分别给予健脾补肾方和健脾补肾方加味,第8周末处死。测定大鼠血清肝功能,观察肝组织炎症及纤维化情况、Foxp3和白细胞介素(IL)17蛋白与基因表达及血清IL-4和IL-17表达情况。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验,等级资料比较采用Ridit检验。结果与正常组相比,模型组大鼠血清总胆汁酸(TBA)、ALP、TBil、ALT和AST均明显升高(P值均<0.05),肝脏胶原沉积明显、α平滑肌肌动蛋白(αSMA)表达增多(P值均<0.05)。与模型组相比,健脾补肾组血清ALP、TBA、TBil和ALT均明显降低(P值均<0.05);健脾补肾方加味组血清ALP、TBA、TBil、ALT和AST均明显降低(P值均<0.05);各用药组肝脏胶原沉积和αSMA表达明显减少(P值均<0.05)。与健脾补肾方组相比,健脾补肾方加味组TBA、ALT和AST均明显降低(P值均<0.05)。与正常组相比,模型组肝组织IL-17蛋白及基因表达显著增高且IL-17和Foxp3基因表达比值显著增高(P值均<0.05),血清IL-17水平明显增高且IL-4和IL-17水平比值明显降低(P值均<0.05)。与模型组相比,用药组肝组织IL-17蛋白及基因表达明显降低且IL-17和Foxp3基因表达比值明显降低(P值均<0.05),血清IL-17水平明显降低且IL-4和IL-17水平比值明显增高(P值均<0.05)。结论健脾补肾方加味可以提高抗肝纤维化的治疗效果,其作用机制可能与调节Treg/Th17失衡有关。

原发性肝癌中医药诊疗原则及方案构建

原发性肝癌治疗方案主要以手术切除、肝移植、局部治疗、全身治疗为主,但仍存在易转移、易复发、预后差等问题。多数患者确诊已为中晚期,丧失手术机会,需要多学科联合治疗,中医药治疗原发性肝癌有独特优势,能够与西医不同治疗方法结合协同增效。笔者依据原发性肝癌的不同临床分期,构建相应的中医药治疗方案:早期肝癌手术切除,扶助正气防复发;中期肝癌微创治疗,祛除癌毒增疗效;晚期肝癌对症治疗,减少疾苦保生存。

平肝潜阳法对高血压模型大鼠下丘脑蛋白质表达的影响

【目的】观察平肝潜阳法对高血压肝阳上亢证模型大鼠下丘脑蛋白质表达差异的影响,从蛋白质组学水平探讨其降血压和改善肝阳上亢证症状的分子机制。【方法】选用自发性高血压大鼠(SHR)灌服附子汤法复制高血压肝阳上亢证大鼠模型,以SD大鼠作正常对照,治疗组给予天麻钩藤饮加减方灌胃给药(0.1g/mL);采用二维凝胶电泳(2-DE)分离大鼠下丘脑蛋白质,获得差异表达蛋白质;利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库分析鉴定差异表达蛋白质。【结果】高血压肝阳上亢证大鼠模型复制成功,其易激惹程度、饮水量、收缩压等与正常组比较,差异均有显著性意义(P<0.01);治疗组给予中药天麻钩藤饮加减方治疗后,易激惹程度好转,饮水量减少,收缩压下降,与模型组比较差异均有显著性意义(P<0.01)。肝阳上亢模型组蛋白质图谱中有5个蛋白质斑点,与正常组比较表达上升2倍及以上,且同一点在平肝潜阳法治疗组中表达下降2倍及以上;有10个蛋白质斑点表达下降2倍及以上,且同一点在平肝潜阳法治疗组中表达上升2倍及以上。【结论】平肝潜阳法治疗高血压肝阳上亢证的作用可能与下丘脑某些蛋白质的改变有关。

中医药治疗原发性肝癌的方法学研究

随着中医对原发性肝癌病因病机、病变脏腑、传变规律等不断深入研究,中医药治疗原发性肝癌取得了一些临床与实验成果,包括辨证论治和辨病论治,中药复方治疗和中药单体治疗,药物内服和针灸外敷,未病先防和病后防复等,都体现了丰富的中医方法学内涵,为建构肝癌中西医结合双诊双治的诊疗新模式奠定了基础。

化浊去瘀方治疗非酒精性脂肪肝临床研究

【目的】探讨化浊去瘀方治疗非酒精性脂肪肝病的临床疗效。【方法】选择113例非酒精性脂肪肝患者,按就诊顺序随机分为中药组61例和对照组52例。中药组给予化浊去瘀方治疗,每次口服100 mL,2次/d;对照组给予熊去氧胆酸(UDCA)口服,150 mg/次,3次/d。疗程均为2个月。【结果】中药组总有效率为85.2%,优于对照组的51.9%(P<0.05);中药组患者B超影像改善,其复常率为31.1%,优于对照组的9.6%(P<0.05);两组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)治疗后均有所降低,与治疗前比较差异有显著性意义(P<0.01),说明两组治疗方案均能有效改善肝功能;中药组在改善血中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDC-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平方面优于对照组(P<0.01)。【结论】化浊去瘀方可有效治疗非酒精性脂肪肝。

疏肝益精健脾为主中药治疗屈光不正性弱视的临床研究

【目的】观察疏肝益精健脾为主的中药对屈光不正性弱视患儿视功能的影响。【方法】将57例符合屈光不正性弱视诊断的患儿随机分为2组,治疗组29例52眼,对照组28例46眼。治疗组采用具有疏肝健脾、益精明目作用的西明汤(主要由郁金、太子参、西洋参、枳实、藿香、密蒙花、蕤仁肉、谷芽、麦芽、山楂、神曲等组成)治疗,对照组采用左旋多巴治疗,两组病例还同时进行验光配镜及传统的电脑闪烁增视仪治疗。两组均以7 d为1个疗程,共8个疗程。比较两组治疗前后患儿矫正视力的变化。【结果】治疗组52眼,基本痊愈33眼,进步13眼,无效6眼,总有效率为88.46%;对照组46眼,基本痊愈12眼,进步10眼,无效24眼,总有效率为47.83%。两组疗效比较,治疗组优于对照组(P<0.05)。【结论】疏肝健脾、益精明目为主的中药能有效改善屈光不正性弱视患儿的视功能。