山羊FATP2基因的克隆及对前体脂肪细胞脂质沉积的影响

旨在对山羊脂肪酸转运蛋白2(fatty acid transport protein 2,FATP2)基因进行克隆及生物信息学分析,检测FATP 2基因在山羊不同组织中的表达差异,并进一步揭示干扰FATP 2基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康简州大耳羊(n=12)为试验动物。采用RT-PCR法扩增并克隆山羊FATP 2基因,进行序列对比、系统发育树构建及生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR检测FATP 2基因在山羊不同组织中及在山羊肌内前体脂肪细胞不同分化时期的相对表达水平,合成SI-RNA干扰序列并转染至山羊肌内前体脂肪细胞;使用RT-qPCR检测FATP 2干扰效率及脂质代谢相关基因的表达情况;通过Bodipy染色法观察干扰FATP 2对脂滴形成的影响,利用GPO-Trinder酶学反应检测甘油三酯含量。结果显示,获得山羊FATP 2基因序列全长2335 bp,CDS区1863 bp,5′UTR 188 bp,3′UTR 284 bp;共编码621个氨基酸,山羊FATP 2基因在肝脏表达量最高;RT-qPCR检测结果显示,FATP 2表达在细胞中被显著干扰;Bodipy染色结果显示,干扰FATP 2基因后脂滴显著减少;甘油三酯测定结果显示,干扰FATP2基因山羊肌内前体脂肪细胞甘油三酯含量显著降低。本研究成功获得山羊FATP 2基因CDS区序列,干扰FATP 2后山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积显著减少并显著影响脂代谢相关基因的表达,这些结果为进一步阐明FATP 2对调控山羊肌内脂肪形成的作用机制提供了重要数据。