Ⅰ群禽腺病毒血清11型的分离鉴定及致病性试验

【目的】了解江苏地区禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的基因遗传演化情况及致病性,为FAdV的流行病学研究和疫病防控提供参考。【方法】通过SPF鸡胚盲传、PCR鉴定、电镜观察、全基因组测序、序列比对与相似性分析判定病毒血清分型,并将分离株以5×105.33 EID50剂量胸肌注射的方式感染10日龄SPF雏鸡进行动物回归试验。【结果】PCR结果显示,该分离株为Ⅰ群FAdV阳性,在透射电镜下可见球型、无囊膜、具有腺病毒典型的二十面体结构,通过全基因组和Hexon基因进行序列分析表明该分离毒株为FAdV D种血清11型毒株,命名为JSNT-1株。将该毒株感染SPF雏鸡,死亡率为10%(1/10),病死鸡剖检可见肝脏褪色变黄,出血肿胀,边缘钝圆;肾脏肿大出血,苍白等病变。通过实时荧光定量PCR试验可从口腔及泄殖腔中检测到排毒,且病毒在鸡体内多个组织器官均有分布。病理组织学结果显示,死亡鸡的肝细胞变性坏死,出现嗜碱性核内包涵体;肾小球上皮细胞变性坏死;心肌可见大量炎性细胞浸润。【结论】分离株为FAdV血清11型,感染SPF鸡后临床发病不明显,致死率低,病死鸡能产生特征性的包涵体肝炎病变,且病毒可在鸡体内外进行复制。

2022年湖北Ⅰ群禽腺病毒流行病学调查及分离鉴定

禽腺病毒是全球家禽常见的传染病病原之一,目前对禽腺病毒进行流行病学调查,已给全球家禽业造成了巨大的经济损失。为了调查禽腺病毒在湖北地区的流行情况,在2021~2022年从湖北市场收集了224份鸡肝样本,为FAdV疫苗研制提供参考。基因测序结果显示:其中14株携带FAdV,Hexon L1环基因序列系统发育,12株为C型,2株为D型。在鸡肝癌细胞株(LMH)中培养并分离得到FAdV-11 HB200株,对分离物的Hexon基因进行了扩增和测序。遗传进化分析表明:FAdV-11 HB200与多个FAdV-11毒株处于同一分支。FAdV-C的流行率仍然占主导地位,相关部门应采取预防FAdV感染的措施。

血清11型禽腺病毒Fiber蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

为获得血清11型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 11,FAdV-11)纤突(Fiber)蛋白的多克隆抗体,并研究其对不同血清型FAdV Fiber蛋白的交叉反应特性,本研究利用同源重组技术将FAdV-11Fiber蛋白的编码基因克隆至原核表达载体pET-32a上,转化至BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达后,将纯化的重组蛋白作为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体,并通过Western blot和IFA鉴定该多克隆抗体与不同血清型FAdV Fiber蛋白的交叉反应性。结果表明,His-FAdV-11-Fiber重组蛋白主要以包涵体形式表达且表达良好,Western blot和IFA结果均显示,制备的多克隆抗体能与FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11的Fiber蛋白反应,而不能与FAdV-4的2个Fiber(Fiber 1和Fiber 2)蛋白反应。综上所述,本研究成功制备兔抗FAdV-11Fiber的多克隆抗体,并验证其能特异性识别FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11的Fiber蛋白,为进一步建立FAdV-11的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。

一例肉鸡包涵体肝炎病例的诊治

从东北某疑似感染FAdV-Ⅰ病毒AA+肉鸡养殖公司采集病料送至瑞普生物诊断中心,采用PCR方法禽腺病毒Ⅰ群核酸(FAdV-Ⅰ)核酸检测,结果成阳性。回收琼脂糖凝胶中的目标核酸送至测序公司测序,利用MegAlign软件和MEGA6.06软件分别做腺病毒分离株与禽腺病毒Ⅰ型hexon基因的同源性分析和基因进化分析,结果发现该分离株与FADV-11型参考株同源性为99.9%,基因型属于D亚型,血清型属于11型。对发病鸡群采用注射腺病毒卵黄抗体和干扰素,同时使用保肝护肾中药肝肾宝和放继发感染抗生素头孢噻呋钠,控制住了病情。