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一株鹅源禽腺病毒4型的分离及致病性
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作者 王艳 高亚东 +1 位作者 蒋成辉 曾巧英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4232-4240,共9页
2023年,昆明一朗德鹅场部分雏鹅出现软脖子症状,伴有零星死亡,病变疑似禽心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)。本研究旨在对本次雏鹅病因进行分子病毒学诊断和病原的致病性研究。采集肝病料接种鸡肝癌细胞(leghorn male hep... 2023年,昆明一朗德鹅场部分雏鹅出现软脖子症状,伴有零星死亡,病变疑似禽心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)。本研究旨在对本次雏鹅病因进行分子病毒学诊断和病原的致病性研究。采集肝病料接种鸡肝癌细胞(leghorn male hepatocellular cells,LMH):1)观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),取培养液负染、电镜观察病毒粒子形态;2)靶标4型禽腺病毒(serotype 4 fowl adenovirus,FAdV-4)的衣壳蛋白编码基因hexon基因进行PCR诊断,对扩增基因序列进行遗传演化分析;3)以5×10^(5.5)TCID_(50)/羽的剂量皮下注射感染10日龄健康泰州鹅,进行动物回归感染以确证其致病性。结果显示,将病料上清接种LMH细胞48~72 h后CPE明显,细胞圆缩、间隙变大、随后碎裂、逐渐脱落,电镜观察见二十面体无囊膜病毒粒子;PCR检测FAdV-4阳性,分离纯化病毒,命名为YNKM2023株;hexon基因的遗传演化分析显示,分离株与国内已有的鸡、鸭FAdV-4流行毒株相似性高达99.8%~99.9%,与印度分离株相似性为99.5%~99.6%。接种感染后,泰州鹅未出现典型的临床症状,但感染后3 d开始出现HPS的特征性病变,感染后6 d检测到中和抗体。综上,本研究成功分离到鹅源FAdV-4/YNKM2023株,该毒株与国内已有的鸡鸭流行毒株高度同源,尚未发生明显的基因漂移。分离株可以感染鹅,病毒可以在雏鹅体内复制引起组织器官病变并产生免疫应答,对鹅表现出一定的致病性,这有助于了解FAdV-4在鹅群的流行情况及其对雏鹅的致病性。 展开更多
关键词 鹅源 禽腺病毒4(fadv-4) 分离 致病性
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血清4型禽腺病毒感染LMH细胞后干扰素刺激基因在转录水平表达量的动态变化
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作者 万丽军 王盛 +12 位作者 谢芝勋 任红玉 谢丽基 范晴 罗思思 李孟 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 张民秀 谢志勤 李小凤 韦悠 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2081-2090,共10页
【目的】了解鸡肝癌细胞(LMH)感染血清4型禽腺病毒(FAdV-4)后干扰素(IFN)和干扰素刺激基因(ISGs)的表达量变化,为研究FAdV-4与ISGs的相互作用提供参考依据。【方法】试验将FAdV-4感染LMH细胞,观察不同时间点细胞病变,并收集感染0、12、2... 【目的】了解鸡肝癌细胞(LMH)感染血清4型禽腺病毒(FAdV-4)后干扰素(IFN)和干扰素刺激基因(ISGs)的表达量变化,为研究FAdV-4与ISGs的相互作用提供参考依据。【方法】试验将FAdV-4感染LMH细胞,观察不同时间点细胞病变,并收集感染0、12、24、36、48、60、72、84和96 h的细胞样品,通过实时荧光定量PCR技术检测感染病毒后不同时间点IFN-α和IFN-β及ISGs基因在转录水平上表达量的动态变化规律。【结果】LMH细胞感染FAdV-448 h时出现典型的细胞病变;在感染12 h后,FAdV-4快速增殖,60 h时达到峰值;感染病毒后各时间点,与对照组相比,IFN-α基因转录水平表达量均显著下调(P<0.05);与对照组相比,在感染后12和24 h,IFN-β基因表达量显著下调(P<0.05),在36 h时迅速上调表达至峰值(P<0.05),在48 h时仍维持在较高水平,之后时间点的表达量有所下降且趋于稳定,但仍显著高于对照组(P<0.05);ISG 12、IFIT 5及DDIT 4基因在感染前期变化不大,在感染后36 h时迅速上调,在感染后96 h达到峰值(P<0.05);ZFP 313、IFITM 3及Viperin基因在感染前期表达量变化不大,随后在36 h迅速上调表达至峰值(P<0.05),在48 h时仍维持在较高水平,之后时间点的表达量有所下降,但仍显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,CD 47、OAS和PKR基因均呈现下调表达。【结论】在FAdV-4感染LMH细胞后,IFN及多种ISGs在转录水平呈现规律性变化,与病毒在LMH细胞中复制存在一定的联系,表明这些天然免疫因子可能在抗FAdV-4反应中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 血清4禽腺病毒(fadv-4) LMH细胞 干扰素 干扰素刺激基因 转录
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7种血清4型禽腺病毒疫苗免疫效果比较
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作者 崔国林 秦晓丽 +4 位作者 薛晓阳 王雪芬 许金朋 王俊 周守长 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第8期99-103,共5页
旨在评估不同类型血清4型禽腺病毒(FAdV-4)疫苗对鸡免疫保护效果,为养殖场选择合适疫苗提供参考。选取5个厂家生产的组织毒细胞毒混合疫苗、细胞毒疫苗和重组蛋白疫苗3种FAdV-4组分的7种疫苗进行评价,采用胸肌注射法免疫,每种疫苗免疫8... 旨在评估不同类型血清4型禽腺病毒(FAdV-4)疫苗对鸡免疫保护效果,为养殖场选择合适疫苗提供参考。选取5个厂家生产的组织毒细胞毒混合疫苗、细胞毒疫苗和重组蛋白疫苗3种FAdV-4组分的7种疫苗进行评价,采用胸肌注射法免疫,每种疫苗免疫8只21日龄SPF鸡,并设攻毒对照组和空白对照组,在免疫后21 d采集血清测定中和抗体和Fiber-2抗体,同时用FAdV-4分离株进行攻毒,在攻毒后7 d采集肝脏、抗凝血和泄殖腔拭子检测FAdV-4,采集血清测定Fiber-2抗体。结果显示,在免疫后21 d,重组蛋白疫苗组产生的Fiber-2抗体水平显著高于其他组(P<0.05),但未产生中和抗体;组织毒细胞毒混合疫苗组和细胞毒疫苗组均产生不同水平中和抗体和Fiber-2抗体;细胞毒疫苗EV1组产生的中和抗体水平显著高于其他组(P<0.05),但同一厂家的细胞毒疫苗EV2组产生的Fiber-2抗体水平显著低于其他组(P<0.05);在攻毒后7 d,除重组蛋白疫苗BV组死亡1只外,其他各组均无死亡;重组蛋白疫苗组和细胞毒疫苗组出现少量排毒和心包积液;各组均产生高水平Fiber-2抗体。综上,不同抗原疫苗诱导产生中和抗体的能力不同,重组蛋白疫苗不能诱导产生中和抗体,其他2种抗原疫苗可诱导机体产生中和抗体,但相同工艺不同厂家疫苗(CV与BV、DV与EV1、EV2)、甚至相同工艺同一厂家的不同疫苗(EV1与EV2攻毒后的心包积液情况)免疫效果均存在差异。总体来看,疫苗免疫保护效果:组织毒细胞毒混合疫苗>重组蛋白疫苗>细胞毒疫苗,2种组织毒细胞毒混合疫苗AV1、AV2和重组蛋白疫苗CV均可有效预防FAdV-4感染。 展开更多
关键词 fadv-4型 禽腺病毒 疫苗 免疫效果
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鸡cGAS基因的克隆、表达特性分析及FAdV-4感染前后亚细胞定位变化
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作者 曹影丽 刘琪 +6 位作者 柴震震 杨侃侃 梁月巧 宋祥军 邵颖 涂健 祁克宗 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期453-460,共8页
cGAS作为一种新型的胞质DNA受体,在宿主抵抗DNA病毒而触发的天然免疫中起着至关重要的作用。血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是无囊膜的一种双链DNA病毒,可引起鸡肝炎-心包积液综合征。为明确鸡cGAS(chcGAS)基因功... cGAS作为一种新型的胞质DNA受体,在宿主抵抗DNA病毒而触发的天然免疫中起着至关重要的作用。血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是无囊膜的一种双链DNA病毒,可引起鸡肝炎-心包积液综合征。为明确鸡cGAS(chcGAS)基因功能,探究在鸡肝癌(LMH)细胞中过表达chcGAS以及FAdV-4感染前后细胞定位的变化情况。本研究针对chcGAS序列设计引物进行PCR扩增,并分析该基因序列与其他物种之间的同源性以及预测该基因的结构域,构建重组质粒pET-32a-chcGAS进行原核表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定,利用激光共聚焦观察FAdV-4感染LMH细胞前后chcGAS细胞定位变化。结果表明,本试验克隆得到大小为1317 bp的chcGAS基因,与其他物种同源性为50.5%~84.4%,SDS-PAGE分析结果显示,chcGAS蛋白主要以可溶性蛋白质的形式在上清液处表达,目的蛋白质相对分子质量为75000,与预期大小相符。亚细胞定位结果显示,FAdV-4感染可导致定位于细胞核膜上的chcGAS蛋白转移到细胞质中。本研究结果为进一步研究FAdV-4与cGAS-STING信号通路的关联调控机制提供了科学依据。 展开更多
关键词 cGAS 血清4禽腺病毒(fadv-4) 序列分析 原核表达 亚细胞定位
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绿原酸对FAdV-4的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响 被引量:5
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作者 崔淹鸽 李京帅 +1 位作者 李银聚 张春杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第12期4718-4724,共7页
试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4... 试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4感染组均经尿囊腔接种0.2 mL ELD_(50)为1.36×10^(7)拷贝的FAdV-4病毒,对照组注射等体积的生理盐水。用MTT法检测绿原酸的安全浓度(IC_(50)),计算每枚鸡胚接种绿原酸的含量;接种病毒后72 h后,剖检并无菌收集鸡胚肝脏进行病理观察,实时荧光定量PCR法检测病毒载量,ELISA法测定肝脏细胞因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及信号分子磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、核转录因子-κB(NF-κB)和NF-κBp65含量。MTT法测定结果表明,绿原酸对鸡胚成纤维细胞的IC_(50)为28.6μg/mL,每枚鸡胚接种0.2 mL的绿原酸含量分别为858、429、214.5(≈215)、107.25(≈107)和53.125(≈53)μg。FAdV-4病毒接种72 h后,FAdV-4感染组鸡胚肝脏边缘钝圆、肿大,变脆,呈土黄色或黄色,甚至出现坏死;随着绿原酸浓度增加,绿原酸组鸡胚肝脏肿胀渐不明显,坏死灶和出血瘀点减少;肝脏内病毒明显增殖,载量为7.8 log_(2)拷贝/mg,107μg绿原酸即可显著抑制FAdV-4在鸡胚肝脏中的增殖(P<0.05)。炎性细胞因子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加鸡胚肝脏中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量(P<0.01);53μg绿原酸组IL-1β和TNF-α含量极显著增加(P<0.01),107μg绿原酸组IL-6和TNF-α的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,107μg绿原酸组IL-1β和TNF-α的含量均极显著降低(P<0.01),215和429μg绿原酸组IL-6的含量显著降低(P<0.05),858μg绿原酸组IL-6的含量极显著降低(P<0.01)。细胞信号分子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量(P<0.01);53μg绿原酸组PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,53μg绿原酸PI3K和NF-κBp65的含量均显著降低(P<0.05);215μg绿原酸组NF-κB的含量显著降低(P<0.05),NF-κBp65的含量极显著降低(P<0.01);当绿原酸达429μg时,PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均极显著降低(P<0.01)。本试验结果表明,绿原酸能够抑制FAdV-4的增殖,且剂量依赖性地抑制炎性因子和信号分子的表达,说明绿原酸可用于鸡抗病毒和炎性相关疾病的防控。 展开更多
关键词 绿原酸 禽腺病毒血清4(fadv-4) 炎性因子 信号分子 鸡胚
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表达禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白的重组耐热新城疫病毒的构建及免疫效果评估 被引量:2
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作者 商雨 李林涛 +9 位作者 李丽 徐英英 冯贺龙 汪宏才 张蓉蓉 曾哲 王红琳 罗青平 邵华斌 温国元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期650-659,共10页
【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus sero... 【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的Fiber2基因插入到其基因组上,构建表达Fiber2蛋白的重组耐热NDV质粒pTS-HN-Fiber2。通过病毒拯救技术拯救重组NDV rTS-HN-Fiber2,并测定其生物学特性和作为疫苗候选株的免疫原性和攻毒保护性。【结果】rTS-HN-Fiber2的鸡胚平均致死时间>168 h,且脑内接种致病指数为0,属于弱毒的范畴;在细胞上的生长曲线结果表明,rTS-HN-Fiber2与亲本LaSota株有相似的生长曲线,但最终的生长滴度略低于LaSota株;rTS-HN-Fiber2在56℃处理15 min后,病毒滴度下降约10^(3) TCID_(50)/mL,而LaSota株56℃处理5 min几乎无感染性;间接免疫荧光试验结果表明,rTS-HN-Fiber2能表达Fiber2蛋白。免疫和攻毒试验结果显示,rTS-HN-Fiber2能产生NDV抗体,且能显著提高雏鸡在FAdV-4强毒下的存活率,减轻FAdV-4强毒引起的组织病变,降低组织中的病毒载量。【结论】本研究成功构建了表达FAdV-4 Fiber2蛋白的重组耐热NDV,该病毒保持了亲本LaSota株的弱毒生物学特性,但热稳定性有显著提升;重组NDV免疫雏鸡可产生针对NDV和FAdV-4强毒的保护,该重组NDV可作为开发针对FAdV-4和NDV二联基因工程疫苗的候选病毒株。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4(fadv-4) 新城疫病毒(NDV) Fiber2蛋白 重组病毒 耐热
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GPV·MDPV和FAdV-4三重PCR检测方法的建立
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作者 戴银 胡晓苗 +6 位作者 赵瑞宏 张丹俊 潘孝成 沈学怀 尹磊 周学利 侯宏艳 《安徽农业科学》 CAS 2021年第15期183-184,187,共3页
[目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法。[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核... [目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法。[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核酸为模板,进行PCR特异性、敏感性和重复性试验。[结果]采用所建立的方法能够扩增出GPV、MDPV和FAdV-4特异性片段,且不能检出鸭黄病毒(DFV)、鸭I型肝炎病毒(DVH-Ⅰ)和禽呼肠孤病毒(ARV);GPV、MDPV和FAdV-4核酸模板的最低检测量分别为20、2、2 pg;对8份阳性临床病料进行检测,可见MDPV、GPV和FAdV-4的检出率均为100%。[结论]建立的三重PCR检测方法能够对MDPV、GPV和FAdV-4这3种病毒进行快速、准确的诊断。 展开更多
关键词 鹅细小病毒(GPV) 番鸭细小病毒(MDPV) 禽腺病毒4(fadv-4) 三重PCR检测
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禽腺病毒血清4型贵州株全基因序列分析 被引量:7
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作者 尹德晶 张云丹 +5 位作者 岳筠 李乔斌 何玲 李涛 王开功 程振涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期44-54,共11页
为了解禽腺病毒血清4型(FAdV-4)地方流行毒株的分子进化情况,基于实验室分离的2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株,分别对2株FAdV-4毒株进行PCR分段扩增,扩增产物克隆至载体,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后筛选出重组质粒进行测序,将测序... 为了解禽腺病毒血清4型(FAdV-4)地方流行毒株的分子进化情况,基于实验室分离的2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株,分别对2株FAdV-4毒株进行PCR分段扩增,扩增产物克隆至载体,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后筛选出重组质粒进行测序,将测序结果依次拼接得到病毒的全基因组,获得FAdV-4贵州株的全基因序列,并对其进行序列和遗传进化分析。结果显示,通过PCR分段扩增成功获得了2株FAdV-4贵州株(GZ-BJ株和GZ-QL株)的全基因序列,长度分别为43352、43723 bp,FAdV-4 GZ-BJ株全基因序列长度比FAdV-4 GZ-QL株短371 bp,少6个ORF(22K、putative 9.1 ku、u-exon、ORF17、ORF28、ORF42),二者的氨基酸同源性为57.1%。2株FAdV-4贵州株同国内外不同地区FAdV-4毒株核苷酸同源性在88.7%~100%,与FAdV-4经典毒株ON1比对,2株FAdV-4贵州株和国内FAdV-4分离株均缺失ORF19、ORF27、ORF30。系统进化树分析显示,2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株仍属于Ⅰ群C种FAdV。研究结果表明,2株贵州株FAdV-4 GZ-BJ株和FAdV-4 GZ-QL株较国内外FAdV-4毒株均存在进化与突变,且FAdV-4 GZ-BJ株变化较大,但尚未改变其血清型,这为探索FAdV-4致病机理的分子机制研究提供依据。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4(fadv-4) 序列分析 变异分析
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血清4型禽腺病毒Fiber-2蛋白截短表达及单克隆抗体制备 被引量:6
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作者 韦悠 谢芝勋 +6 位作者 邓显文 李小凤 谢志勤 范晴 张艳芳 黄娇玲 王盛 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2341-2349,共9页
【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32... 【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32a(+)构建原核表达载体。将表达的重组蛋白进行纯化,并通过Western blotting验证其在大肠杆菌中的表达情况。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠后取脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性细胞株,再利用秋水仙素裂解法、间接ELISA法和间接免疫荧光法(IFA)对其进行鉴定。【结果】成功构建Fiber-2基因截短片段的原核表达系统,获得大小约为67 kD的Fiber-2截短蛋白,以包涵体的形式出现,经纯化后可获得单一的特异性条带,经Western blotting鉴定证明其可与FAdV-4阳性血清结合从而产生一条特异性条带。经过4次亚克隆后筛选到5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株(2C2、4F6、5A5、6G10和10B5),其抗体分泌稳定性、特异性好,诱生的细胞上清液抗体效价为1:1600~1:6400,腹水抗体效价为1:320000~1:1280000,秋水仙素裂解检测染色体数目为94~110条。2C2、4F6和10B5杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG2b亚型,轻链为Kappa链;5A5和6G10杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG1亚型,轻链为Kappa链。5株杂交瘤细胞株与感染FAdV-4的鸡肝癌上皮细胞系(LMH)进行IFA检测,结果均为阳性。【结论】制备的Fiber-2截短重组蛋白及单克隆抗体具有良好的反应原性和特异性,可用于FAdV-4病毒检测试剂盒研发。 展开更多
关键词 血清4禽腺病毒(fadv-4) Fiber-2 基因克隆 重组蛋白 单克隆抗体 Western blotting
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血清4型禽腺病毒广西分离株GX2019-010全基因组测序与分析 被引量:7
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作者 栾勇娇 谢芝勋 +9 位作者 王盛 罗思思 张蕾 谢丽基 谢志勤 邓显文 张民秀 张艳芳 曾婷婷 范晴 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第12期3793-3804,共12页
为了解广西地区血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的基因特征,本研究对实验室前期分离的一株FAdV-4(命名为GX2019-010)进行了全基因组测序,对所获核苷酸序列进行同源性比对和遗传进化分析,并进一步分析了主要结构蛋白Hexon、Penton和Fiber的氨基... 为了解广西地区血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的基因特征,本研究对实验室前期分离的一株FAdV-4(命名为GX2019-010)进行了全基因组测序,对所获核苷酸序列进行同源性比对和遗传进化分析,并进一步分析了主要结构蛋白Hexon、Penton和Fiber的氨基酸序列。结果显示,GX2019-010全长43719 bp,GC含量为54.9%,主要包括43个潜在蛋白质编码区域。核苷酸序列同源性比对发现,GX2019-010与致病株MX-SHP95的同源性为95.8%,与非致病株ON1和KR5同源性分别为95.0%和95.2%。遗传进化分析显示,GX2019-010与中国FAdV-4近几年的流行毒株在同一分支,而与国外FAdV-4毒株不在同一分支,说明FAdV-4存在遗传差异,主要的差异存在于基因组的右端,国内分离株均出现1966 bp的缺失,其中包括ORF19、ORF48和ORF27基因的缺失,说明中国流行的FAdV-4具有地域性。对主要结构蛋白Hexon、Penton和Fiber的氨基酸序列分析发现,3个主要结构蛋白均有氨基酸位点的突变,其中Fiber-2的突变位点最多。本研究丰富了广西地区FAdV-4的基因库,为今后心包积液-肝炎综合征(HHS)的防控及流行病学调查研究提供了参考依据。 展开更多
关键词 血清4禽腺病毒(fadv-4) 全基因组测序 进化分析
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禽腺病毒4型云南株分离鉴定及Hexon基因序列分析
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作者 薛晓岩 张振兴 +4 位作者 曾毅 季佳 代红炀 李素华 宋建领 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第10期3932-3942,共11页
【目的】分析云南省家禽及野鸟禽腺病毒4型(Fowl adenovirus-4,FAdV-4)流行情况、Hexon基因差异性及致病性,为研究FAdV-4流行及Hexon基因对病毒毒力的影响提供参考。【方法】2020年1月―2021年6月在云南省昆明市、曲靖市、楚雄州、大理... 【目的】分析云南省家禽及野鸟禽腺病毒4型(Fowl adenovirus-4,FAdV-4)流行情况、Hexon基因差异性及致病性,为研究FAdV-4流行及Hexon基因对病毒毒力的影响提供参考。【方法】2020年1月―2021年6月在云南省昆明市、曲靖市、楚雄州、大理州、红河州、玉溪市等家禽养殖密集区采集疑似感染FAdV-4家禽肝脏组织样品158份,候鸟迁徙地采集野鸟新鲜粪便310份,采用PCR技术检测FAdV-4核酸,对获得的代表性阳性样品进行病原分离鉴定,并对分离毒株进行致病性及Hexon基因序列分析。【结果】家禽肝脏组织样品中检出FAdV-4核酸阳性样品19份,阳性率为12.03%(19/158);黑颈鹤粪便样品中检出核酸阳性样品1份,阳性率为0.3%(1/310)。从FAdV-4核酸阳性样品中分离到7株FAdV-4,致病性研究结果显示,FAdV-4云南分离株均能致鸡胚发育不良,引起4周龄肉鸡发生心包积液-肝炎综合征,鸡胚半数致死量(ELD)为10~10/mL。7株分离株均聚类于FAdV-C亚群,Hexon蛋白与国内FAdV-4高致病性毒株具有相同的R、R、Q特征。分离株感染SPF鸡后,临床症状明显,具有高致病性且高致死率,肝细胞病变明显。【结论】研究初步掌握了云南FAdV-4的流行情况,首次在黑颈鹤粪便中检测到FAdV-4病原核酸,分离获得7株FAdV-4,部分毒株Hexon蛋白存在氨基酸突变。 展开更多
关键词 禽腺病毒4(fadv-4) Hexon基因 致病性 遗传进化
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LMH贴壁细胞悬浮驯化及病毒增殖研究
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作者 任培森 吕文静 +2 位作者 黄金海 刘海霞 蔡天宁 《现代畜牧兽医》 2024年第6期28-31,共4页
研究旨在实现LMH贴壁细胞悬浮培养、稳定传代、高密度生长,并应用于血清4型禽腺病毒(FAdV-4)悬浮培养。研究进行LMH贴壁细胞低含量血清适应驯化,并进行无血清悬浮培养筛选及FAdV-4 RP-4毒株接毒盲传试验。结果显示:LMH悬浮细胞可在无血... 研究旨在实现LMH贴壁细胞悬浮培养、稳定传代、高密度生长,并应用于血清4型禽腺病毒(FAdV-4)悬浮培养。研究进行LMH贴壁细胞低含量血清适应驯化,并进行无血清悬浮培养筛选及FAdV-4 RP-4毒株接毒盲传试验。结果显示:LMH悬浮细胞可在无血清培养基中传代第3代后,最终细胞密度达4.00×10^(6)cells/mL以上;FAdV-4连续培养至第4代,毒价可达10^(8.13)TCID_(50)/0.1 mL。研究表明,用特定培养基可使LMH贴壁细胞实现悬浮驯化,并可应用于FAdV-4稳定增殖。 展开更多
关键词 LMH贴壁细胞 驯化 悬浮培养 血清4禽腺病毒(fadv-4)
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FADV-4感染LMH细胞STING依赖的干扰素及细胞因子转录水平动态变化
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作者 李小凤 谢芝勋 +8 位作者 阮志华 范晴 谢志勤 武晓倩 韦悠 张民秀 李丹 万丽军 李孟 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期757-762,785,共7页
为了探讨干扰素刺激基因(STING)依赖的干扰素及细胞因子在血清4型禽腺病毒(FADV-4)感染鸡肝癌细胞(LMH)后的表达量情况。试验将FADV-4感染LMH细胞,观察病变,收集感染后24,48,72,96,120h的细胞样品,抽提RNA反转录成cDNA,通过实时荧光定量... 为了探讨干扰素刺激基因(STING)依赖的干扰素及细胞因子在血清4型禽腺病毒(FADV-4)感染鸡肝癌细胞(LMH)后的表达量情况。试验将FADV-4感染LMH细胞,观察病变,收集感染后24,48,72,96,120h的细胞样品,抽提RNA反转录成cDNA,通过实时荧光定量PCR技术监测FADV-4病毒复制情况及STING、TANK连接酶(TBK1)、干扰素调节因子7(IRF7)、干扰素α(INF-α)、干扰素β(INF-β)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、白介素1β(IL-1β)基因表达量动态变化。结果表明:FADV-4感染LMH细胞24h后,细胞开始出现病变迹象,随着感染时间延长,细胞出现变圆变亮、脱落、死亡等典型病变。病毒在24~48h快速增殖,72h出现增殖高峰(9.13×10^(10)copies/μL),96~120h呈现下降趋势。与对照组相比,STING和IRF7的表达量在感染72h后显著上调(P<0.05),96~120h极显著上调(P<0.01);其中TBK1表达量在24~72h上调,96~120h下调;INF-α、INF-β、IL-6和IL-8在感染后期表达量与对照组的相比极显著上调(P<0.01),分别上调44.30,63.85,89.23,75.34倍;炎症因子IL-1β表达量在感染后先降低后有升高趋势。说明FADV-4感染LMH细胞后,STING介导的信号通路识别受体被激活,诱导INF-α、INF-β、IL-6和IL-8表达水平上调表达抑制病毒复制,IL-1β表达水平下调表达降低病毒对宿主的损伤。 展开更多
关键词 血清4腺病毒(fadv-4) LMH细胞 STING基因 干扰素 细胞因子
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禽腺病毒血清4型Y17215-1株对SPF鸡胚及SPF鸡的致病性研究 被引量:1
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作者 王利丽 田向学 +6 位作者 路超 李秀丽 李富强 任卫科 李程 张莉 鄢明华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第7期19-24,126,127,共8页
为了探究一株禽腺病毒血清4型(FAdV-4)天津分离株Y17215-1对SPF鸡胚及SPF鸡的致病力,试验将Y17215-1株(病毒效价为1×10^(6.5) TCID_(50)/0.1 mL)经卵黄囊和尿囊膜两种接种途径分别接种6,10日龄SPF鸡胚,经滴鼻点眼和肌肉注射两种途... 为了探究一株禽腺病毒血清4型(FAdV-4)天津分离株Y17215-1对SPF鸡胚及SPF鸡的致病力,试验将Y17215-1株(病毒效价为1×10^(6.5) TCID_(50)/0.1 mL)经卵黄囊和尿囊膜两种接种途径分别接种6,10日龄SPF鸡胚,经滴鼻点眼和肌肉注射两种途径分别接种7,14,21日龄的SPF鸡,观察SPF鸡胚死亡情况和病理变化情况,统计SPF鸡发病死亡情况,检测试验鸡不同组织及不同采集时间的泄殖腔中的病原,观察试验鸡的临床病变和组织病理学变化。结果表明:两种接种途径均可致鸡胚死亡,经卵黄囊途径接种致死的鸡胚可见胚体全身出血,经尿囊膜途径接种致死的鸡胚尿囊膜明显增厚;两种接种途径均可引起不同日龄SPF鸡发病和死亡,且肌肉注射组试验鸡较滴鼻点眼组试验鸡发病快、病程短,致死率高,发病鸡临床表现为精神沉郁、采食量明显下降、排黄绿色粪便。心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃等器官病原检测结果均为阳性,各试验组的泄殖腔拭子样品在感染后第2天即可检测到FAdV-4。剖检可见典型的心包积水、肝脏肿大、肾脏肿大等病变,肝细胞内有嗜酸性包涵体。说明FAdV-4天津分离株Y17215-1对鸡胚及鸡具有较高致病性。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4(fadv-4) SPF鸡胚 SPF鸡 不同途径 致病性试验
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心包积水综合征流行原因分析 被引量:9
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作者 张誉文 焦鹏涛 +1 位作者 陈果 韦平 《中国家禽》 北大核心 2017年第9期63-66,共4页
心包积水综合征又称安卡拉病、心包积液-肝炎综合征,是一种由血清4型禽腺病毒(FAdV-4)感染引起的的病毒性传染病,主要危害3~6周龄肉鸡,偶见于蛋鸡和后备母鸡。近年来我国各地鸡群暴发该病的范围、品种、数量和规模明显增多,极大影响了... 心包积水综合征又称安卡拉病、心包积液-肝炎综合征,是一种由血清4型禽腺病毒(FAdV-4)感染引起的的病毒性传染病,主要危害3~6周龄肉鸡,偶见于蛋鸡和后备母鸡。近年来我国各地鸡群暴发该病的范围、品种、数量和规模明显增多,极大影响了养殖业的健康发展。文章对心包积水综合征的病原、流行特点、剖检变化、近年大面积暴发的可能原因及防控措施等进行了分析。 展开更多
关键词 心包积水综合征 安卡拉病 心包积液-肝炎综合征 血清4禽腺病毒(fadv-4)
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Pathogenicity of an FAdV-4 isolate to chickens and its genomic analysis 被引量:11
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作者 Kai-kun MO Chen-fei LYU +6 位作者 Shang-shang CAO Xia LI Gang XING Yan YAN Xiao-juan ZHENG Min LIAO Ji-yong ZHOU 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2019年第9期740-755,共16页
Fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4)strain SD1511 was isolated from chickens with severe inclusion body hepatitis and hydropericardium syndrome in Shandong Province,China.The isolate was cultured in primary chicken embr... Fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4)strain SD1511 was isolated from chickens with severe inclusion body hepatitis and hydropericardium syndrome in Shandong Province,China.The isolate was cultured in primary chicken embryo kidney cells.A study of pathogenicity indicated that SD1511 readily infected 7–35-d-old chickens by intramuscular injection and intranasal and oral routes,causing 50%–100%mortality.The 35-d-old chickens suffered more severe infection than 7-and 21-d-old chickens with mortality highest in the intramuscular injection group.The serum from surviving chickens showed potent viral neutralizing capability.The complete genome of SD1511 was sequenced and analyzed.The strain was found to belong to the FAdV-4 cluster with more than 99%identity with the virulent FAdV-4 strains isolated in China in recent years except for some distinct variations,including deletions of open reading frame 27(ORF27),ORF48,and part of ORF19.Our findings suggest that SD1511 might be used as a prototype strain for the study of pathogenesis and vaccine development. 展开更多
关键词 Fowl adenovirus serotype 4(fadv-4) PATHOGENICITY Infection way Virus neutralization activity Genome analysis
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血清4型禽腺病毒感染LMH细胞中Toll样受体mRNA转录水平的动态变化 被引量:4
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作者 石勇丽 谢芝勋 +7 位作者 罗思思 韦悠 王盛 任红玉 谢丽基 万丽军 李孟 黄娇玲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期85-92,共8页
为了解血清4型禽腺病毒(FAdV-4)感染宿主后对Toll样受体(TLRs)转录水平的影响,本研究用FAdV-4感染鸡肝癌细胞(LMH),收集感染后第12、24、36、48、60、72、84、96、108、120小时的细胞样品,利用荧光定量PCR技术监测FAdV-4的复制情况和10... 为了解血清4型禽腺病毒(FAdV-4)感染宿主后对Toll样受体(TLRs)转录水平的影响,本研究用FAdV-4感染鸡肝癌细胞(LMH),收集感染后第12、24、36、48、60、72、84、96、108、120小时的细胞样品,利用荧光定量PCR技术监测FAdV-4的复制情况和10种TLRs(TLR1a、TLR1b、TLR2a、TLR2b、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15、TLR21)的m RNA转录水平动态变化。结果显示,FAdV-4感染LMH细胞后,细胞出现变亮、变圆和脱落等典型病变,病毒在12~48 h快速增殖,随后缓慢增殖至120 h,10种TLRs均出现不同程度上调,感染后期(72~120 h)上调尤为剧烈(P<0.05或P<0.01),其中TLR1a、TLR1b、TLR4、TLR7和TLR21上调幅度较大,分别上调26.06倍、24.37倍、38.56倍、17.97倍、56.71倍。表明TLRs在宿主抵抗FAdV-4感染过程中起关键作用,该结果为今后深入探究FAdV-4的致病机理提供了参考依据。 展开更多
关键词 血清4禽腺病毒(fadv-4) LMH细胞 TOLL样受体 实时荧光定量PCR
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