Working with the FBI^1

The phone rings at FBI headquarters."Hello?""Hello, is this the FBI?""Yes. What do you want?""I'm calling to report my

沉默FBI-1基因对乳腺癌MCF-7细胞周期和凋亡的影响

目的研究沉默FBI-1基因表达对乳腺癌MCF-7细胞周期和凋亡的影响,并探讨可能的作用机制。方法采用shRNA干扰技术沉默MCF-7细胞中FBI-1基因的表达,qRT-PCR及Western blot鉴定FBI-1基因的沉默效率。流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,qRT-PCR及Western blot检测p53和p21表达。结果经sh RNA干扰后FBI-1 mRNA和蛋白水平显著降低;FBI-1基因沉默后,G0/G1期细胞数明显增加,S期和G2/M期细胞数显著下降,细胞凋亡率显著增高,p53和p21 mRNA及蛋白表达明显上调。结论沉默FBI-1基因表达可诱导细胞G1/G2期阻滞和细胞凋亡,其机制可能通过上调p53和p21 mRNA及蛋白表达有关。

FBI-1基因在前列腺癌中的研究进展

原癌基因FBI-1又称ZBTB7、LRF和Pokemon,其编码产物属于POK蛋白家族成员,具有转录抑制功能。过度表达的FBI-1可以通过其特殊的蛋白质结构组成抑制Rb基因及ARF基因的表达,并且其在肿瘤的发生、发展及转归上具有重要作用。近年来,有很多医学机构对FBI-1基因与前列腺肿瘤进行了研究。原癌基因FBI-1有望成为肿瘤预防、诊断、治疗、预后评价的新靶标。

秦皮甲素通过下调人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子1抑制三阴性乳腺癌细胞增殖

目的探讨秦皮甲素对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其分子机制。方法分别以28、56、112、225、450和900μmol/L的秦皮甲素处理三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞24、48和72 h,同时设空白对照组,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力。分别以225、450和900μmol/L的秦皮甲素处理MDA-MB-231细胞48 h,同时设空白对照组,采用倒置显微镜观察细胞的形态变化,采用克隆形成实验检测克隆形成能力,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞中人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子1(FBI-1)、p53和p21 mRNA的表达水平,采用Western blot法检测细胞中FBI-1、p53、p21和Ki67蛋白的表达水平。结果与空白对照组相比,经28、56、112、225、450和900μmol/L秦皮甲素处理后MDA-MB-231细胞活性均明显降低,并呈浓度依赖性和时间依赖性。225、450和900μmol/L秦皮甲素处理后,MDA-MB-231细胞皱缩变扁,贴壁差,并出现不完整细胞,脱落,细胞间距变大,其中900μmol/L秦皮甲素组细胞变化最明显;与空白对照组比较,225、450和900μmol/L秦皮甲素组细胞克隆形成率均降低[分别为(77.18±5.13)%、(65.94±4.98)%和(45.92±3.70)%,均P<0.01],FBI-1 mRNA及蛋白表达增高(均P<0.01),p53和p21 mRNA及蛋白表达降低(均P<0.01),Ki67蛋白表达降低(P<0.01),且均呈浓度依赖性。结论秦皮甲素可能通过FBI-1调控细胞周期相关的p53-p21通路,影响DNA复制,从而抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖。

沉默FBI-1基因对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响

本研究旨在观察短发夹状RNA (short hairpin RNA, shRNA)介导的人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子1 (FBI-1)基因沉默对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响。用qRT-PCR和Western blot分别检测FBI-1、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase3和Survivin的mRNA和/或蛋白的表达水平;采用shRNA干扰技术沉默MDA-MB-231细胞中FBI-1基因的表达;用CCK-8法以及克隆形成实验检测细胞增殖;用流式细胞术检测细胞凋亡;用裸鼠皮下成瘤实验检测细胞的成瘤能力。结果显示,MDA-MB-231细胞的FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于正常乳腺上皮细胞MCF-10A;经shRNA靶向沉默FBI-1基因表达后,细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率显著增高,伴随Bcl-2和Survivin蛋白表达明显下调、Bax蛋白表达显著上调和Caspase 3活化,MDA-MB-231细胞的裸鼠皮下成瘤能力受抑制。以上结果提示,靶向沉默FBI-1基因表达可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞凋亡并抑制细胞的裸鼠皮下成瘤能力。

FBI-1在乳腺癌新辅化疗前后表达的临床意义

目的探讨人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子1(FBI-1)在乳腺癌患者新辅化疗前后的表达情况与疗效的关系。方法收集广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科2010年1月-2014年12月50例行新辅助化疗后再接受手术治疗的女性乳腺癌病例(中位年龄44岁),用免疫组织化学染色法检测新辅助治疗前后乳腺癌组织中FBI-1的表达,比较化疗前后FBI-1的表达率,并分析其与一般临床特征、病理特征及临床病理疗效的关系。结果(1)新辅助化疗前,乳腺癌组织中FBI-1的高表达率为70%(35/50),FBI-1的表达与临床分期、淋巴结转移状态有关(P<0.05),而与患者年龄、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、Ki-67、人表皮生长因子受体(Her)-2状态无关(P>0.05);(2)无论从临床疗效评估(86.7%与51.4%,P=0.019)或是病理疗效评估(80.O%与28.6%,P=0.001),新辅助化疗前FBI-1低表达组化疗疗效均显著优于高表达组;(3)新辅助化疗显著降低FBI-1的高表达率(70.0%与38.0%,P=0.004),22例患者(62.9%)FBI-1由高表达转为低表达;(4)临床疗效显著组FBI-1表达下降较临床疗效非显著组明显(77.4%与26.3%,P=0.001),病理缓解显著组FBI-1表达下降较病理缓解非显著组明显(72.7%与39.3%,P=0.024),FBI-1表达是否下降与新辅助化疗的临床疗效(r=0.440,P<0.01)、病理疗效(r=0.491,P<0.05)有相关性。结论接受新辅助化疗的乳腺癌患者中,FBI-1高表达与临床分期、淋巴结转移具有相关性;新辅助化疗能够显著降低乳腺癌组织中FBI-1的表达水平;FBI-1的高表达可能预示对化疗药物的耐药性,并对乳腺癌患者新辅助化疗的疗效具有预测价值。

辣椒碱对乳腺癌MCF-7细胞增殖及p21和FBI-1表达的影响

目的：观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法：设立辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法（CCK-8）检测辣椒碱（50,100,150,200,250,300μmol·L-1）处理MCF-7细胞24,48,72 h后的细胞活性;克隆形成实验检测辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）处理MCF-7细胞18 h再更换为完全培养基继续培养14 d后的克隆形成能力;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）处理MCF-7细胞24 h后细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21（p21）和人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子-1（FBI-1）mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）处理MCF-7细胞24 h后细胞中p21和FBI-1蛋白的表达水平。结果：与空白组比较,辣椒碱（50,100,150,200,250,300μmol·L-1）在体外对MCF-7细胞活性具有明显的抑制作用（P〈0.05,P〈0.01）,并且这种抑制作用呈浓度和时间依赖效应;与空白组比较,辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）均能显著抑制MCF-7细胞的克隆形成能力（P〈0.01）;与空白组比较,辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）能显著上调MCF-7细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平（P〈0.01）,下调FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平（P〈0.01）。结论：辣椒碱干预在体外对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其上调细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平,下调细胞中FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平有关。

转录因子FBI-1的结构与功能

FBI-1是一个新近发现的和转录相关的胞内蛋白,属于POK蛋白家族成员。FBI-1通过直接结合DNA或者与其他蛋白形成复合物影响目的基因的转录水平,从而推动肿瘤的生长、促进细胞黏附拮抗凋亡、促进前体细胞分化。

秦皮甲素通过下调FBI-1表达抑制人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭

目的:探讨秦皮甲素对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响,并研究其具体的分子机制.方法:以人结直肠癌SW480细胞作为研究对象,采用细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,采用shRNA干扰技术使SW480细胞中人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子-1(factor that binds to indeucer of short transcripts-1,FBI-1)基因的沉默,利用Western blot法检测波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和FBI-1等蛋白的表达变化.结果:该药物秦皮甲素可使人结直肠癌SW480细胞愈合能力、迁移和侵袭能力均显著下降,同时下调Vimentin和FBI-1蛋白表达水平以及上调E-cadherin蛋白表达水平,上述作用具有浓度依赖性.但经shRNA沉默FBI-1基因表达后,该蛋白的表达水平显著下降;同时FBI-1干扰SW480细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著升高,Vimentin蛋白表达水平均显著下降,同时细胞迁移和侵袭能力也降低.结论:秦皮甲素具有浓度依赖性地抑制人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力,这可能与秦皮甲素抑制FBI-1蛋白表达,继而下调Vimentin蛋白表达和上调E-cadherin蛋白表达有关.