肿瘤相关成纤维细胞上调hsa-miR-18b-5p靶向FBXL3促进前列腺癌的增殖及转移

目的探讨受肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)调控的hsa-miR-18b-5p在前列腺癌(PCa)中的表达水平及作用,并研究对其在PCa发生发展过程中的分子机制。方法利用生物信息学技术分析在PCa中高表达的miRNA,构建肿瘤相关成纤维细胞并与PCa细胞系共培养,验证CAFs对PCa细胞增殖和迁移的影响及对hsa-miR-18b-5p的调控作用;RT-qPCR验证20例患者癌组织及癌旁正常组织、前列腺正常上皮增生细胞及PCa各细胞系中hsa-miR-18b-5p的表达水平;通过脂质体法将阴性对照及hsamiR-18b-5p抑制物分别转染入PCa细胞C4-2、LNCAP中,分为NC inhibitor组和hsa-miR-18b-5p inhibitor组;采用细胞集落形成、CCK-8实验、划痕愈合、Transwell、IC_(50)实验、流式细胞术分别检测C4-2、LNCAP细胞增殖、迁移、侵袭、耐药能力、凋亡和周期;建立PCa裸鼠移植瘤模型,定期测量移植瘤的质量和体积,Kaplan-Meier生存曲线分析裸鼠生存情况;利用靶基因预测分析网站(Targetscan、Mirtarbase、miRDB、miRDIP)预测has-miR-18b-5p的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析验证hsa-miR-18b-5p与靶基因的靶向关系,RT-qPCR、Western blotting检测各组细胞靶基因的表达水平。结果生物信息学分析结果显示,在PCa中高表达的miRNA有17个,结合差异表达程度以及相关文献筛选出拟研究的基因:miR-148a、miR-17、miR-18b-5p、miR-770、miR-297-3p。CAFs与PCa细胞系共培养后hsa-miR-18b-5p的表达水平升高(P<0.01),且促进PCa细胞的增殖与迁移(P<0.01),敲除has-miR-18b-5p可抵消CAFs对PCa细胞增殖及迁移的影响,确定has-miR-18b-5p为研究基因。与正常前列腺上皮细胞或肿瘤旁组织相比,PCa细胞或肿瘤组织中hsa-miR-18b-5p的表达升高(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制C4-2、LNCAP细胞的增殖、迁移、侵袭以及耐药(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制裸鼠移植瘤质量和体积的增长,增加裸鼠的生存时间(P<0.05)。靶基因预测分析网站显示,FBXL3是hsa-miR-18b-5p的一个潜在作用靶点,双荧光素酶报告基因证实has-miR-18b-5p与FBXL3基因间存在结合位点,且敲除hsa-miR-18b-5p可增加C4-2、LNCAP细胞中FBXL3的蛋白表达(P<0.05)。结论CAFs上调前列腺癌细胞hsa-miR-18b-5p的表达水平,后者可能通过靶向调控FBXL3基因的表达促进PCa细胞的增殖和转移。

FBXL3和FBXL21基因表达与苏尼特羊季节性发情关系初探

为探究下丘脑中FBXL3和FBXL21基因的表达水平与绵羊季节性发情之间的关系,本研究以季节性发情的苏尼特羊为实验动物,通过实时荧光定量PCR(qPCR)研究苏尼特羊由短光照(发情期,SP)转长光照(非发情期,LP)这个过程中下丘脑FBXL3和FBXL21基因表达情况,以及短光照转长光照不同时间点(SP21、LP3、LP15、LP21、LP42和LP49)对FBXL3和FBXL21基因表达的影响。结果表明:由短光照转长光照过程后,苏尼特羊下丘脑中FBXL3基因的表达量显著升高;且由短光照SP21转长光照LP21时,FBXL3基因表达量从LP3、LP15、LP21依次显著增高,LP21时达到峰值,LP21到LP49时又显著降低。而在短光照转长光照过程中,FBXL21基因的表达量显著降低,由短光照SP21转到长光照LP3、LP15时,表达量显著降低,LP15表达量相对最低,在LP21时FBXL21基因表达量达到最高,在LP42时又显著降低,LP49又升高。综上,FBXL3基因的表达量与由短光照和长光照季节性发情调控关键分子(EYA3和TSHb等)和催乳素的表达趋势相似,推测FBXL3基因可能通过调控下丘脑核心生物钟从而在绵羊季节性发情调控通路上游发挥重要作用,FBXL21基因在这个调控过程中也发挥着重要作用。

昼夜节律生理机制最新国际研究动态

分析总结了国内外关于昼夜节律生理机制的最新研究动态。以昼夜节律生理机制为切入点,针对影响昼夜节律的不同因素进行了综合论述。特别在昼夜节律与光照刺激的相互关系方面,分别对光照刺激强度、时刻、非视觉通路的作用光谱与昼夜节律相位的关系进行了深入阐述。此外,还探讨了自然光季节变动以及极地地区季节变动与昼夜节律之间的关系。最后,通过介绍泛素化修饰酶FBXL21在细胞昼夜节律中的作用,总结了关于分子层面昼夜节律研究的国际最新动态。

FBXL家族在哺乳动物生物节律中调控作用的研究进展

F-box富含亮氨酸重复蛋白3基因(F-box and leucine rich repeat protein 3,FBXL3)能编码含F-box结构域的蛋白,属于F-box蛋白家族成员,在细胞核中发挥功能。F-box富含亮氨酸重复蛋白21基因(F-box and leucine rich repeat protein 21,FBXL21)位于细胞质中,其功能与FBXL3基因功能存在拮抗作用。FBXL3与FBXL21蛋白在哺乳动物体内产生分子昼夜节律的负反馈循环中均都起重要作用。FBXL3通过形成SCF(SKP1-CUL1-F-box)复合物行使E3泛素连接酶功能,并通过泛素化促进隐花色素(Cryptochrome,CRY)蛋白的降解参与生物钟调控,FBXL21通过泛素化使CRY蛋白积累参与生物钟调控,两者对于CRY蛋白的拮抗作用能够稳定哺乳动物生物钟。本文首先介绍了生物节律以及生物钟分子的组成,然后综述了FBXL家族基因在昼夜节律循环中的调控作用及其突变后对季节性发情性状的影响,有助于后续探索FBXL家族基因突变后影响绵羊季节性发情性状的具体分子机制,为利用现代生物技术改变绵羊发情的季节性提供新思路。