FBXO11基因对肺腺癌A549细胞迁移的影响

目的研究泛素连接酶复合体特异性亚基FBXO11的表达对肺腺癌A549细胞迁移的影响。方法将A549细胞株分为3组:Blank组、阴性对照RNA组和siRNA-FBXO11组,应用Lipofectamine 2000将阴性对照RNA、siRNAFBXO11分别转染至A549细胞中。RT-PCR法检测FBXO11的mRNA,Western blot法检测FBXO11和Snai1的蛋白表达,划痕修复实验检测细胞迁移能力。结果与Blank组和阴性对照RNA组比较,siRNA-FBXO11组FBXO11的mRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.05),而Blank组与阴性对照RNA组比较,FBXO11的mRNA水平和蛋白水平无显著性差异;与Blank组和阴性对照RNA组比较,siRNA-FBXO11组的Snail蛋白表达水平显著增加(P<0.05),而Blank组与阴性对照RNA组比较,Snail蛋白表达水平无显著性差异;划痕实验结果显示:与Blank和阴性对照RNA组比较,siRNAFBXO11组的细胞迁移距离显著增加(P<0.05),而Blank组与阴性对照RNA组比较,细胞迁移距离无显著性差异。结论 FBXO11抑制肺腺癌A549细胞的迁移能力,这可能与Snail调控有关。

环状RNA FBXO11靶向miR-376a-3p/SNRPB轴调控胃癌SNU-1细胞的增殖与凋亡

目的:探讨环状RNA FBXO11(circFBXO11)调控miR-376a-3p/小核糖核蛋白多肽B基因(SNRPB)轴对胃癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:选取2018年1月至2019年1月华北理工大学附属医院肿瘤外科30例手术切除的胃癌患者的癌和癌旁组织标本,免疫组化染色法检测胃癌组织中SNRPB蛋白阳性表达率,qPCR法检测胃癌组织、胃癌细胞系SNU-1、AGS及HS-746T和胃黏膜细胞GES1中circFBXO11、miR-376a-3p和SNRPB mRNA的表达水平。用双荧光素酶报告基因实验验证circFBXO11与miR-376a-3p、miR-376a-3p与SNRPB之间的靶向关系。将si-NC、si-circFBXO11、miR-NC、miR-376a-3p、si-SNRPB、si-circFBXO11+anti-miR-NC、si-circFBXO11+anti-miR-376a-3p、si-circFBXO11+pcDNA-NC、si-circFBXO11+pcDNA-SNRPB等分别转染进SNU-1细胞,用CCK-8法、流式细胞术以及WB法分别检测细胞的增殖活力、凋亡率以及SNRPB、cyclin D1和C-caspase-3蛋白的表达水平。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中circFBXO11表达水平显著升高、SNRPB蛋白阳性率升高、miR-376a-3p表达显著降低(均P<0.01);与GES1细胞比较,胃癌细胞中circFBXO11和SNRPB表达水平显著升高、miR-376a-3p表达水平显著降低(均P<0.01)。circFBXO11靶向负调控miR-376a-3p表达,miR-376a-3p靶向负调控SNRPB表达。抑制circFBXO11表达或过表达miR-376a-3p或抑制SNRPB表达后,SNU-1细胞的增殖活力降低、凋亡率升高(均P<0.01)。抑制miR-376a-3p表达可部分逆转抑制circFBXO11对SNU-1细胞增殖和凋亡的作用(均P<0.01)。过表达SNRPB可部分逆转抑制circFBXO11对SNU-1细胞增殖和凋亡的影响(均P<0.01)。结论:胃癌组织中circFBXO11呈高表达,抑制circFBXO11表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制与调控miR-376a-3p/SNRPB通路相关。

毛萼乙素联合FBXO11基因siRNA对胃癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨毛萼乙素(EriB)联合F-box蛋白11(FBXO11)基因siRNA对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:以人胃黏膜上皮细胞GES-1为对照,Western blotting法检测胃癌MGC-803、MKN-28及BGC-823细胞中FBXO11蛋白表达。将FBXO11小干扰RNA(si-FBXO11)转染至MGC-803细胞,Western blotting检测FBXO11蛋白表达验证转染效果。采用0,0.2,0.5,1.0μmol·L^(-1)EriB处理MGC-803细胞48 h,MTT法检测细胞活力。将MGC-803细胞分为空白组、EriB组、siFBXO11组和EriB+si-FBXO11组,MTT检测各组细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,Western blotting检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达。结果:与GES-1细胞比较,胃癌MGC-803、MKN-28及BGC-823细胞中FBXO11蛋白表达升高(P<0.05)。与0μmol·L^(-1)EriB组比较,0.2,0.5,1.0μmol·L^(-1)EriB组MGC-803细胞活力降低(P<0.05)。与空白组比较,EriB组和si-FBXO11组MGC-803细胞活力、侵袭数、迁移数及PCNA、Vimentin蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与EriB组或si-FBXO11组比较,EriB+si-FBXO11组MGC-803细胞活力、侵袭数、迁移数及PCNA、Vimentin蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:EriB毛萼乙素及抑制FBXO11表达均可降低胃癌MGC-803细胞活力、侵袭和迁移能力,且两者联合作用对胃癌细胞活力、侵袭和迁移能力的抑制作用更强,机制可能与调节PCNA、E-cadherin和Vimentin表达有关。

InnVit／FBXO11在白癜风中的表达及其对酪氨酸酶输出内质网的影响

目的通过检测InnVit（即FBXO11）在白癜风患者中的表达及其对内质网形态和酪氨酸酶输出内质网的影响，探讨InnVit基因对黑素细胞功能的影响。方法收集10例表皮片移植白癜风患者皮损区与正常供皮区组织，免疫组化检测InnVit蛋白的表达情况。化学合成InnVit基因特异性siRNA片段及构建过表达质粒载体P3XF-P120，npofectamine^TM 2000脂质体方法转染B10Br细胞，电镜观察不同处理组细胞的内质网形态变化；激光共聚焦显微镜观察酪氨酸酶蛋白及钙网蛋白在内质网中的共定位情况；Western印迹检测转染细胞中InnVit蛋白、酪氨酸酶及钙网蛋白的表达水平。结果10例白癜风患者皮损区InnVit蛋白表达明显低于正常供皮区。未处理组与质粒转染组的黑素细胞内质网形态正常，而siRNA转染组的细胞内质网有明显膨胀，且其相对膨胀率（1．97±0．48）与未处理组（1．28±0．09，P=0．001）和质粒转染组间（1．24±0．13，P=0．001）比较，差异均有统计学意义。未处理组与质粒转染组细胞中酪氨酸酶的表达范围部分地超出了钙网蛋白的标记范围，而siRNA转染组细胞中酪氨酸酶几乎与钙网蛋白共定位于内质网中。siRNA转染组InnVit蛋白的相对表达量（0．030±0．004）低于未处理组（0．320±0．020）和质粒转染组（0．710±0．040），质粒转染组高于未处理组（均P〈0．01）；钙网蛋白3组间差异无统计学意义（P〉0．05）；siRNA转染组酪氨酸酶（1．040±0．060）高于质粒转染组（0．720±0．030）和未处理组（0．350±0．030），质粒转染组高于未处理组（均P〈0．01）。结论白癜风患者皮损区InnVit蛋白表达下降；InnVit基因的表达影响了黑素细胞内质网的形态，并可以调控酪氨酸酶在内质网中的输出，进而影响黑素细胞的功能。

FBXO11蛋白在透明细胞性肾细胞癌中表达的意义

目的探讨FBXO11在透明细胞性肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,CCRCC)中表达的意义。方法采用免疫组织化学方法检测77例CCRCC患者肿瘤及35例癌旁组织FBXO11蛋白的表达,分析FBXO11蛋白表达与患者临床病理特征的关系。将CCRCC患者临床病理特征及FBXO11蛋白表达进行COX单因素分析。将单因素分析中有统计学意义的因素引入COX多因素模型,分析影响CCRCC患者总生存期(overall survival,OS)缩短的独立危险因素。结果FBXO11蛋白阳性表达率在CCRCC中为48.1%,明显高于癌旁组织的25.7%(P<0.05)。FBXO11蛋白阳性表达率在无静脉内癌栓组明显低于有静脉内癌栓组(P<0.05)。COX单因素分析显示高组织学分级、伴有远处转移和高表达FBXO11蛋白是CCRCC患者OS缩短的危险因素(P<0.05)。COX多因素分析显示高表达FBXO11蛋白是CCRCC患者OS缩短的独立预后因素。结论FBXO11蛋白的高表达可能与CCRCC进展快及患者生存时间短密切相关,检测FBXO11蛋白对CCRCC患者的预后判断有参考价值。

FBXO11基因突变致智力发育障碍伴畸形面容和行为异常1例

对2020年2月山东大学附属儿童医院神经内分泌科收治的1例智力发育障碍伴畸形面容和行为异常患儿的临床资料进行回顾性分析。患儿, 男, 3岁6个月, 因"惊厥发作1年余"就诊。体格检查发现面部畸形。Gesell发育量表提示适应性、大运动为重度发育迟缓, 精细动作、语言、个人-社交为中度发育迟缓;头颅磁共振成像示脑裂;脑电图示双侧前头区为主的广泛性放电, 监测到1次肌阵挛发作;基因检测:FBXO11基因存在杂合变异(c.2480484del), 为致病性变异。提示高通量测序技术增加了识别潜在遗传缺陷作为疾病原因的可能性, 对于反复癫痫发作、多发畸形、全面发育迟缓的患儿, 应该尽早行基因检测, 以明确诊断、指导产前诊断和遗传咨询。

白癜风相关基因-1的确认及其序列分析

目的探讨白癜风患者黑素细胞VIT-1基因转录水平的表达情况,分析该基因序列的差异性。方法用半定量RT-PCR法检测黑素细胞VIT-1基因表达水平,克隆VIT-1 ORF cDNA全长并测序, 序列差异由CLUSTAL W(1．83)软件分析。结果黑素细胞的VIT-1基因ORF含有81 bp的内含子,为 FBXO11的3’端的部分序列,白癜风患者黑素细胞VIT-1基因表达量下降。结论 VIT-1不是一个新基因,而是FBXO11,属于F-box蛋白家族成员。