miR-25靶向作用FBXO33在肾透明细胞癌凋亡及预后的相关实验研究

目的探索miR-25与FBXO33在肾透明细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)中的相关性,并分析其与肾癌细胞凋亡及预后的关系。方法从肿瘤基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中获取1998~2013年511例RCC芯片数据,Pearson检验分析miR-25和FBXO33表达的相关性;检测miR-25对构建的FBXO33 3'UTR野生型、突变型及空白对照荧光素酶报告基因中荧光素表达的影响;CCK8法检测瞬转miR-25 mimic,siRNA及对照序列对RCC细胞活力的影响;流式细胞术检测瞬转miR-25 mimic,siRNA及对照序列对RCC细胞凋亡的影响;TCGA数据库中筛选出miR-25与FBXO33表达负相关且具有随访的58例患者,分为miR-25低表达联合FBXO33高表达组(n=34)和miR-25高表达联合FBXO33低表达组(n=24)进行生存分析,采用Log-rank检验和Gehan-Breslow-Wilcoxon检验。结果 RCC组织中FBXO33与miR-25表达负相关(r=-0.161 1,Pearson检验)。与空白对照组相比,miR25可降低野生型组RLU至80.2%±2.6%,差异具有统计学意义(t=6.539,P=0.006);而突变序列组RLU为空白对照组的103.5%±8.4%,差异不具有统计学意义(t=0.041 3,P=0.968 4)。72 h细胞活力与空白对照组相比,miR-2 siRNA组提高32.7%±3.5%,差异具有统计学意义(P<0.05);而miR-25 mimic组降低23.3%±1.7%,差异具有统计学意义(P<0.05)。mimic-miR-25-3P与其对照组比较,早期凋亡率降低(8.83±0.09 vs 12.83±0.14),差异具有统计学意义(t=42.17,P=0.005);晚期凋亡率轻度升高(0.41±0.10 vs 0.33±0.15),差异无统计学意义(t=0.75,P=0.639);siRNA-miR-25-3p与其对照组比较,早期凋亡率升高(19.05±1.64 vs 13.68±0.78),差异具有统计学意义(t=5.12,P=0.006);晚期凋亡率轻度降低(0.56±0.10 vs 0.62±0.08),差异无统计学意义(t=0.83,P=0.376)。miR-25低表达同时FBXO33高表达患者(n=34)与miR-25高表达而FBXO33低表达者(n=24)相比生存率更高,差异具有统计学意义(采用Log-rank检验P=0.025 2,采用Gehan-Breslow-Wilcoxon检验P=0.004 9)。结论 miR-25可抑制肾癌FBXO33,提高细胞活性,抑制凋亡而降低患者预后。