抗人P185^(erbB2) scFv-Fc-IL-2调变肿瘤细胞表面分子和激活免疫效应细胞

目的将抗人P185erbB2scFv-Fc-IL-2融合蛋白(HFI)作用于人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和人外周血单个核细胞(PBMC),通过体外实验阐明HFI调变肿瘤细胞表面分子和激活免疫效应细胞的抗肿瘤机制,为HFI临床应用提供实验依据。方法MTT法检测细胞增殖、杀伤活性;流式细胞术观察细胞表面分子的表达水平;生物活性法检测细胞膜相关TNF杀伤活性;RT-PCR检测细胞穿孔素表达水平。结果HFI处理后,未观察到对SKOV3细胞增殖活性的直接抑制作用;SKOV3细胞表面杀伤相关分子ICAM-1、Fas表达率分别由24.85%、0.53%增高到85.36%、59.19%(P<0.01);人PBMC的增殖活性增强,CD3+CD8+T细胞和CD3-CD16+CD56+NK细胞分别由24.37%、6.90%提高到38.80%、13.45%(P<0.01);CD25、LFA-1、FasL表达水平分别由3·99%、86.52%、5.02%提高到12.96%、99.06%16.19%(P<0.01);穿孔素基因、膜相关TNF均表达增强,LAK样、NK样杀伤活性在各效靶比时均明显增高(P<0.01)。结论HFI提高SKOV3细胞杀伤相关分子ICAM-1、Fas表达水平,并且对人PBMC有明显的增殖活化作用,通过激活LFA-1/ICAM-1、Fas/FasL途径提高杀伤介质穿孔素和膜相关TNF的释放,增强LAK样、NK样杀伤活性。

IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达

目的 :构建含人IL 2cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3.1IL 2 /Fc ,并在真核细胞中表达 ,以期用于乙型肝炎病毒 (HBV)DNA疫苗的研究。 方法 :应用重叠延伸剪切技术 (SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL 2 /Fc,回收后克隆到中间 pGEM TEasyTA克隆载体 ,得到合适的酶切位点后 ,用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA 3.1中 ,得到真核重组载体 pcDNA 3.1IL 2 /Fc。然后用脂质体法转染SP2 / 0细胞。 结果 :对重组载体进行限制性酶切鉴定及测序分析 ,证明连接正确 ;经ELISA检测证实 ,该重组载体能够在真核细胞中外分泌表达插入的外源性基因编码的融合蛋白。 结论 :成功构建了真核表达载体 pcDNA 3.1IL 2 /Fc ,并在SP2 / 0细胞中有效表达。

DDR2/Fc融合基因真核表达载体的构建及表达

目的:构建DDR2/Fc真核表达载体,使其在HEK293细胞中进行表达.方法:采用PCR技术,分别从大鼠脑组织、含人IgG1Fc全长互补DNA(cDNA)的质粒中扩增出盘状结构域受体2(DDR2)的DS区域、Fc段,以定向克隆的方法将其串联至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,获得重组表达载体DDR2/Fc-pcDNA3.1(-);采用脂质体转染技术转染HEK293细胞;RT-PCR、免疫印迹检测融和蛋白的表达.结果:DNA测序和限制型酶切鉴定证明两段基因正确克隆至pcDNA3.1(-)的多克隆位点,细胞裂解物中检测到融合蛋白的表达,其分子质量与预期大小一致,该融合蛋白能正确表达于HEK293细胞中.结论:成功构建了DDR2/Fc融和表达载体,表达了融合蛋白.

紫外-可见光谱法研究Fc(COOH)_2和BSA相互作用（英文）

采用紫外-可见光谱法(UV-Vis)研究Fc(COOH)_2(λ_(max)=255 nm)与BSA(λ_(max)=277. 5)的相互作用。实验结果表明:Fc (COOH)2在10～190μmol·L^(-1)范围内吸光度与浓度呈良好的线性关系(r=0. 998 4),BSA在100～1 900 mg·L^(-1)范围内,吸光度与浓度呈良好的线性关系(r=0. 999 2),BSA与Fc(COOH)_2反应后,最大吸收波长移至275 nm。当固定Fc(COOH)_2或BSA的浓度时,Fc(COOH)_2或BSA的吸光度随着BSA或Fc(COOH)_2浓度的增加而增大,说明Fc(COOH)_2与BSA存在分子间的相互作用,主要是由于Fc(COOH)_2和BSA能形成氢键,分子链增长,吸收的能量增加,导致吸光度增大。同时考察Fc(COOH)_2和BSA的吸光度随时间的变化,70μmol·L^(-1)的Fc(COOH)_2与1 900 mg·L^(-1)的BSA反应0. 1,24和96 h后,在λ_(max)=275 nm处的吸光度由1. 062分别变为1. 045和0. 986;当700 mg·L^(-1)的BSA与190μmol·L^(-1)的Fc(COOH)_2反应0. 1,24和96 h后,在λ_(max)=275 nm处的吸光度由0. 813分别变为0. 794和0. 750。

猪圆环病毒2型感染对猪肺泡巨噬细胞生物学活性的影响

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康仔猪,在接种后不同时间宰杀,收集猪肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照。用FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测PAM凋亡现象,通过EA花环试验测定Fc受体数目,通过吞噬鸡红细胞试验测定吞噬功能,分析PCV2感染对PAM生物学活性的影响。结果显示,在整个试验期内2种方法均没有检测到PAM凋亡,表明PCV2感染不会诱发PAM凋亡。PAM的Fc受体数和吞噬鸡红细胞数的变化规律一致,与对照组相比,两者数量在接种后第3 d明显下降,第7 d有所回升,之后基本恢复,表明PCV2感染后PAM吞噬和清除病原的功能出现短暂下降。

PCV2感染对猪肺泡巨噬细胞Fc受体数量和吞噬功能的影响

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康普通仔猪,在接种后不同时间宰杀,收集肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照组。用EA花环试验测定Fc受体数目,用吞噬鸡红细胞试验测定吞噬功能,来分析PCV2感染对PAM某些生物学活性的影响。结果显示,PAM表面Fc受体数和吞噬鸡红细胞数的变化规律一致,与对照组相比,两者数量在接种后3 d时下降至最低,之后回升,14 d时基本恢复正常。本研究表明,PCV2感染可引起PAM吞噬和清除病原的能力出现短暂下降。

禽流感病毒M2e基因与鸡IgG Fc基因在巴斯德毕赤酵母中的融合表达

【目的】得到融合蛋白M2e-Fc,并检测其免疫学特性,为研制禽流感通用疫苗奠定基础。【方法】根据禽流感病毒H5N1的M2e蛋白氨基酸序列设计2条长互补引物,通过重叠区互补扩增基因法扩增出目的基因M2e,然后与鸡IgGFc片段基因一起克隆入毕赤酵母表达质粒中,构建酵母表达载体。将阳性质粒线性化后电转化入感受态毕赤酵母X-33中,再经甲醇诱导后,通过Tricine-SDS-PAGE电泳及Western-blotting鉴定融合蛋白。之后用其免疫非免疫鸡,检验其免疫原性。【结果】成功构建了表达M2e和Fc融合蛋白的酵母表达载体pPICZαA-M2-Fc,并通过Zeocin筛选及PCR鉴定出了阳性重组子;阳性重组子经甲醇诱导后得到融合蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳及Western-blotting鉴定证实,融合蛋白得到正确表达,并且可以与M2e阳性血清反应。动物免疫试验证实,该融合蛋白可以诱导鸡产生抗M2e抗体,具有良好的免疫原性。【结论】融合蛋白M2e-Fc在巴斯德毕赤酵母表达系统中得到了成功表达,该融合蛋白具有较好的免疫原性,为后期进行其他免疫试验奠定了基础。

SLC-Her-2/neu-p53-Fc融合基因重组腺病毒真核表达载体对荷黑色素瘤小鼠的免疫治疗效果

目的扩增纯化携带融合基因SLC-Her-2/neu-p53-Fc(SLC-HP-Fc)的重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc真核表达载体,研究其对荷黑色素瘤小鼠的免疫治疗效果。方法将重组腺病毒真核表达载体AdEasyTM-SLC-HP-Fc在人胚肾293细胞中扩增、纯化;向小鼠皮下注射表达Her-2/neu-p53融合基因的B16F10-psig-Her-2/neu-p53细胞(B16-HP细胞)建立荷黑色素瘤小鼠模型;将小鼠随机分成对照组、肌肉注射组和皮下注射组,用重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc真核表达载体进行治疗,观察肿瘤生长情况,测定细胞毒性活性、血清p53抗体。结果纯化后重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc真核表达载体滴度8×108pfu/mL。目的基因SLC-HP在小鼠体内成功表达。重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc真核表达载体高剂量肌肉注射能有效抑制小鼠肿瘤的生长,瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P=0.005),抑瘤率达到98.8%,细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的特异性杀伤力有明显提高。结论重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc真核表达载体高剂量肌肉注射能延长出瘤时间,抑制肿瘤的生长。

PCP-2胞外区/Fc融合蛋白的真核表达、纯化及其生物学活性鉴定(英文)

目的:构建PCP 2胞外区(PCP 2EC)与人免疫球蛋白IgG Fc融合蛋白表达载体,在哺乳动物细胞中表达并纯化PCP 2EC/Fc蛋白,研究其在神经细胞黏附中发挥的作用。方法:以PBLIISK PCP 2为模板扩增PCP 2EC片段,定向插入真核表达载体pIGplus;重组质粒分别转染COS 7细胞和293细胞,可溶性表达PCP 2EC/Fc融合蛋白,并通过金葡菌蛋白A特异性纯化;以此融合蛋白作为基质,观察原代培养神经元的黏附情况。结果: 成功构建PCP 2EC/Fc融合蛋白表达载体,表达载体的构建与预期设计相符;进一步在哺乳动物细胞中表达并纯化PCP 2EC/Fc蛋白;PCP 2EC/Fc蛋白可以促进原代培养神经元的黏附作用。结论:本研究成功地构建了PCP 2EC/Fc融合蛋白真核表达载体,获得有活性的PCP 2 胞外区可溶性分子,初步研究发现其在神经细胞黏附中发挥促进作用,为后续神经及其他领域中的功能研究奠定基础。

ADRB2和FCER1B基因多态性与壮族咳嗽变异性哮喘患儿治疗效果及肺功能改善情况的相关性

目的探讨肾上腺素能受体β2(ADRB2)和Ⅰ型Fcε受体β(FCER1B)基因多态性与壮族咳嗽变异性哮喘(CVA)患儿治疗效果及肺功能改善情况的相关性。方法纳入88例壮族CVA患儿,检测其ADRB2基因rs1042713位点、FCER1B基因rs569108位点的基因型。随访患儿使用吸入性糖皮质激素治疗3个月后的疗效及肺功能改善情况。分析上述两个基因位点多态性与患儿治疗效果及治疗后肺功能改善情况的相关性。结果88例CVA患儿中,治疗好转67例(好转组)、无效21例(无效组),肺功能正常52例(肺功能正常组)、肺功能异常36例(肺功能异常组)。好转组与无效组之间、肺功能正常组与肺功能异常组之间ADRB2基因rs1042713位点基因型分布的差异均有统计学意义(均P<0.05),携带GG基因型患儿治疗后出现无效、肺功能异常的风险分别是携带AA/AG基因型患儿的4.833倍、7.636倍(均P<0.05)。好转组与无效组之间、肺功能正常组与肺功能异常组之间FCER1B基因rs569108位点基因型分布的差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论壮族CVA患儿的吸入性糖皮质激素治疗效果及治疗后肺功能改善情况可能与ADRB2基因rs1042713位点多态性密切相关,而与FCER1B基因rs569108位点多态性可能无关。

数据采集卡光纤高速收发模块的设计

设计了一种基于光纤通道协议的数据持续传输方案。在光纤通道帧和信令协议的基础上,利用St r at i x I V GX系列FPGA实现了成帧、8B/10B编码等功能,设计了光纤通道协议的FC-1和FC-2层。利用FPGA内部的高速收发器IP core完成了并行数据向高速串行数据的转换。最终实现了数据的高速持续传输,并对整个系统的逻辑功能进行了验证。

细胞玻片离心仪和显微诊断仪在脑脊液细胞学检测中的应用

目的 探讨玻片离心仪及多功能显微诊断仪(MDI)联合应用所进行的CSF细胞学检查对颅内感染性疾病诊断的重要意义。方法 应用玻片离心仪及MDI对100例各型脑膜炎患者CSF标本进行了细胞学检查。结果 本法可提高颅内感染性疾病的检出率，其临床诊断符合率达96%。结论 本法可为临床医生提供直观、准确的诊断依据，对颅内感染性疾病的诊断、治疗具有重要价值。

绿豆下胚轴质膜微囊的提取和H^+-ATPase活性研究

以两相法提取纯化绿豆下胚轴质膜微囊,材料与两相体系重量之比为32∶8时,一次洗膜就可以得到纯度较高的质膜微囊。提取缓冲液中牛血清白蛋白的浓度对质膜H+-ATPase的潜在活性有影响。质膜H+-ATPase水解活性依赖于Mg2+,Ca2+对酶活性有明显的促进作用。壳梭孢素(fusicoccin, FC)对酶有明显的刺激作用,活体条件最大刺激达到72%,而离体条件下刺激为30%。

4种根管消毒药物对离体人牙根管内致病菌抗菌活性的研究

目的:对比氢氧化钙糊剂、碘仿糊剂、FC、Vitapex4种根管消毒药物对离体牙根管内优势致病菌的抗菌活性。方法:选取50个新鲜拔除的人单根管牙,在釉牙骨质界处切除牙冠。将所有牙根随机分为5组,每组10个。清理根管后将细菌混合悬液接种培养,10d后取样做细菌计数后进行根管预备,取样进行细菌计数,将氢氧化钙糊剂、碘仿糊剂、FC、Vitapex和无菌纸捻分别封入5组根管内,7d后再取样做细菌记数。结果:统计学分析发现:根管预备前后各组牙根根管内细菌数量存在显著性差异(P<0.05);对比封药前后根管内细菌数量发现4种药物均有抗菌作用,但4种药物的抗菌活性无显著统计学差异(P>0.05)。结论:完善的根管预备能够去除根管内的大部分致病菌,4种根管消毒药物抗菌活性无显著差异。

糖尿病合并冠心病患者血小板表面受体FcγRⅡA和CD40配体的表达水平

目的:探讨2型糖尿病(2-DM)合并冠心病(CHD)病人血小板表面受体FcγRⅡA(CD32)和CD40配体(CD40L)的表达水平及二者的相关性。方法:选择单纯CHD患者36例(Ⅰ组)、单纯2-DM患者35例(Ⅱ组)、2-DM合并CHD患者33例(Ⅲ组)及正常对照者30名(正常对照组),采用流式细胞术分别检测其血小板表面FcγRⅡA和CD40L的表达水平,并将二者作相关分析。结果:Ⅲ组血小板FcγRⅡA和CD40L水平较对照组、Ⅰ组及Ⅱ组均显著升高(P<0.05～<0.01),血小板表面FcγRⅡA和CD40L的表达水平呈正相关(r=0.374,P<0.05)。结论:2-DM合并CHD患者的血小板表面FcγRⅡA和CD40L表达水平明显升高,二者呈明显正相关。血小板表面FcγRⅡA和CD40L的表达水平可能是反映糖尿病患者合并冠状动脉粥样硬化的有用指标。

太极拳锻炼对中老年人免疫系统的影响

为了探讨太极拳运动对中老年人免疫系统的影响,对陕西师范大学部分退休教师进行了6个月的系统太极拳锻炼,分别测定血清中IgM、IgG、IgA含量,白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)和血清皮质醇(FC)含量,结果显示:经过6个月的太极拳训练,锻炼后与锻炼前相比,IgG、IgM、IgA、WBC、IL-2、IL-6及血清皮质醇均有显著性差异,说明太极拳锻炼可以很好地提高老年人免疫系统的功能,同时也为太极拳锻炼在大众健身方面的开展提供了科学依据。

大型视频存储网络系统的构建

九运会国际广播电视中心节目共享与管理网络系统是媒体资产管理系统在国家级大型运动会电视转播中的超大规模应用 ;所采用的设计思路、技术手段和安装、调试过程中所取得的经验等 。

不同肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白N-糖基化修饰糖链的初步分析

目的建立基于LC-MS的N-糖基化修饰糖链的分析方法,并比较不同肿瘤坏死因子受体(TNFR)-Fc融合蛋白N-糖基化修饰差异。方法用肽-N-糖苷酶F释放糖蛋白中的修饰糖链,有机溶剂沉淀蛋白后,利用还原胺化反应将2-氨基苯甲酰胺标记至糖链上,并通过亲水作用萃取柱除去过量标记试剂,所得糖链采用ZIC-HILIC亲水作用色谱柱结合离子阱质谱进行分析。以市售TNFR-Fc融合蛋白为标准品,优化影响标记效率的各种因素后,对A和B两种TNFR-Fc融合蛋白制品的N-糖基化修饰糖链进行了分析和比较。结果 TNFR-Fc融合蛋白A和B中的修饰糖链主要含有岩藻糖、末端唾液酸、末端半乳糖、末端N-乙酰葡糖胺等糖型,且末端唾液酸含量相近,但融合蛋白A的岩藻糖和末端N-乙酰基葡萄糖的含量显著高于融合蛋白B,而融合蛋白B末端半乳糖含量高于融合蛋白A。结论成功建立了基于LC-MS的N-糖基化修饰糖链的分析方法,该方法可有效分析糖蛋白中的修饰糖链类型和含量比例,对于详细表征糖蛋白药物结构及性质具有参考价值,并为进一步研究糖基化对糖蛋白药物药理活性以及药代动力学研究奠定了良好基础。

融合蛋白ABD-Fc-IL-2的真核表达及其生物学活性鉴定

目的 真核表达融合蛋白ABD-Fc-IL-2,并检测其生物学活性。方法 通过直接PCR及重叠延伸PCR法扩增目的基因SP-ABD-Fc-IL-2,连接至载体pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1/SP-ABD-Fc-IL-2。将重组质粒转染CHO-S细胞表达融合蛋白ABD-Fc-IL-2,并进行Protein A beads亲和层析纯化。Western blot法检测纯化融合蛋白的特异性,CTLL-2/MTT细胞增殖比色法测定其生物学活性,pull down/Western blot法检测融合蛋白中链球菌蛋白G的白蛋白结合结构域(albumin-binding domain,ABD)与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的相互作用。结果重组质粒pcDNA3.1/SP-ABD-Fc-IL-2经双酶切及测序鉴定,证明构建正确。纯化融合蛋白ABD-Fc-IL-2纯度达90%,可与鼠抗IL-2单克隆抗体发生特异性结合,生物学活性为3.29×108IU/mL,融合蛋白中ABD与HSA可相互结合。结论 真核表达的融合蛋白ABD-Fc-IL-2具有较高的生物学活性,可促进CTLL-2细胞增殖,且保持了ABD片段与HSA结合的能力。