恶性疟原虫FCC1/HN株LDH基因的克隆及序列分析

目的 克隆并测定恶性疟原虫海南（ＦＣＣ１／ＨＮ）株ＬＤＮ基因序列，比较ＦＣＣ１／ＨＮ株与国外分离株ＬＤＨ基因序列的差异。方法 根据 ＬＤＨ基困已知序列设计合成一对引物，应用 ＰＣＲ技术从ＦＣＣ１／ＨＮ株基因组 ＤＮＡ中扩增ＬＤＨ基因，并将其克隆入ｐＭＤ１８－Ｔ载体。用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定，并用分子生物学软伴进行不同分离株ＬＤＨ基因序列的同源性比较。结果ＰＣＲ扩增得到特异的ＦＣＣ１／ＨＮ株ＬＤＨ基因片段并构建了ｐＴ－ＬＤＨ重组质粒。恶性疟原虫 ＦＣＣ１／ＨＮ株 ＬＤＨ基因全长 ９５１ｂｐ，编码３１６个氨基酸。序列分析表明，我国恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ株与国外的３Ｄ７、Ｈｏｎｄｕｒａｓ１株ＬＤＨ基因编码氨基酸序列完全一致。结论 成功克隆恶性疟原虫 ＦＣＣ１／ＨＮ株ＬＤＨ基因。序列测定及同源性分析表明，ＦＣＣ１／ＨＮ株与其它分离株的ＬＤＨ基因序列高度保守。

Sequence determination of exp-1 Gene of Plasmodium Falciparum Isolate FCC1 /HN

目的 测定恶性疟原虫FCCl／HN株exp-1基因序列。方法 根据exp-1基因已知序列设计合成1对引物，用PCR技术从FCCl／HN株基因组DNA中扩增exp-1基因；将exp-1基因克隆入pMD-18T载体，转化大肠杆菌JMl09感受态细胞，铺x—gal LB平板；挑取阳性菌落，用酶切，PCR扩增进行鉴定。以正确的重组质粒为模板，用双脱氧链末端终止法测定exp-1基因序列。结果 从恶性疟原虫FCCl／HN株基因组DNA中获取exp-1基因，成功克隆入pMD-18T载体；测序表明FCCl／HN株exp-1基因全长937bp，编码162个氨基酸。结论 克隆了恶性疟原虫FCCl／HN株exp-1基因，并测定了其核苷酸序列，为进-步研究其功能奠定基础。

恶性疟原虫FCCl／HN株MSAl全基因编码区的体外扩增

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSA1)是抗疟疫苗的候选抗原之一。据已知的MSAl基因序列，自行设计合成了四对引物。应用PCR技术，分四段从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组DNA中扩增出垒基因编码区序列。扩增产物经1．2％琼脂塘凝腔电泳鉴定．表明获得了正确的MSA1基因扩增片段。