猪IgGⅡ类Fc受体基因的真核表达及其在组织中的分布状况

利用已克隆的猪IgGⅡ类Fc受体cDNA(swFcγRⅡ)基因序列(DQ026064)设计的引物S29和S20,通过RT-PCR技术从猪外周血白细胞cDNA中扩增了完整的960bp swFcγRⅡ ORF序列。利用基因重组技术将swFcγRⅡ ORF基因成功亚克隆到真核表达载体pcDNA3中。然后用脂质体法转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验鉴定了swFcγRⅡ受体的亲和特性。半定量PCR检测表明,swFcγRⅡmRNA在外周血白细胞、肝、肺和肠系膜淋巴结有较高表达。

Fc受体γ链基因3′端非翻译区3804位点T/G多态现象与系统性红斑狼疮发病无关

目的 :探讨Fc受体γ链基因 3′端非翻译区 (3′ -UTR) 380 4位点T/G多态现象在中国南方汉族人群中的分布及与系统性红斑狼疮 (SLE)的关系。方法 :采用PCR -RFLP方法分析Fc受体γ链基因 3′ -UTR 380 4位点T/G单碱基替换的多态现象。结果 :在 16 8例SLE患者和 12 0例正常人中只发现 1例SLE患者存在该位点的T/G杂合现象 ,该杂合现象经基因测序证实 ,其余均位TT型。结论 :Fc受体γ链基因 3′ -UTR 380 4位点T/G单碱基替换的多态性现象在中国南方汉族人群中少见 ,该位点的基因多态现象与SLE发病无关。

FCGR2A、FCGR3A基因多态性与Guillain-Barre综合征患者易感性的关联研究

目的探讨FCGR2A[编码Fcγ受体(FcγR)a或FcγRIIa基因]、FCGR3A(编码FcγR a或FcγRIIIa基因)多态性与Guillain-Barre综合征(GBS)易感性的相关性。方法采用序列特异性引物多聚酶链反应(PCR-SSP),对64例GBS患者及69例健康对照者的FCGR2A-131和FCGR3A-158基因多态性进行检测,比较各组间等位基因型分布及等位基因频率的差异。结果经比较FCGR2A、FCGR3A的基因型分布、等位基因频率在GBS和正常对照中均无显著性差异(P>0.05)。结论FCGR2A-131、FCGR3A-158基因多态性与GBS易感性无相关性。

FCGR2A,FCGR3A基因多态性与吉兰-巴林综合征患者易感性及严重程度的关联研究

目的探讨FCGR2A(编码Fcγ受体Ⅱa或Fcγ受体Ⅱa基因),FCGR3A(编码Fcγ受体Ⅲa或Fcγ受体Ⅲa基因)多态性与Guillain-Barre(GBS)易感性及严重程度的相关性。方法采用序列特异性引物多聚酶链反应(PCR-SSP),对64例GBS患者(包括轻型26例,非轻型38例)及69例健康对照者的FCGR2A-131和FCGF3A-158基因多态性进行检测,比较各组间基因分布及等位基因频率的差异。结果经比较FCGR2A,FCGR3A的基因型分布,等位基因频率在患者组和非患者组以及在轻型,非轻型GBS和正常对照中均无显著性差异(P>0.05)。结论FCGF2A-131,FCGR3A-158基因多态性与GBS易感性及严重程度无相关性。

Fcγ受体IIA基因多态性与慢性牙周炎易感性的相关性研究

目的 探讨Fcγ受体ⅡA基因多态性和慢性牙周炎的易感性相关关系。方法 采用序列特异性引物多聚酶链反应 (PCR_SSP) ,对 6 3例重度慢性牙周炎患者、10 3例轻中度慢性牙周炎患者及 80名健康对照者的Fcγ受体ⅡA基因多态性进行检测 ,比较各组间基因型分布及等位基因频率的差异。结果 FcγRⅡA_R R131基因型在重度慢性牙周炎与健康对照组之间的分布差异有显著性 (P <0 0 12 5 ) ,而在轻中度慢性牙周炎组与健康对照组、重度慢性牙周炎组与轻中度慢性牙周炎组之间的分布差异无显著性 (P >0 0 12 5 )。结论 FcγRⅡA_R R131基因型与慢性牙周炎的严重程度相关 ,提示其可能与汉族人群慢性牙周炎的易感性有关。

人VEGF受体II基因3区的克隆、表达研究

用RT PCR法从人胎儿脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF受体II基因 3区 ,将其重组到 pAYZ表达载体中 ,构建成人VEGF受体II基因 3区表达载体。将该载体转化大肠杆菌 16C9,获得稳定表达 ,表达产物以可溶性状态存在 ;SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,其分子量约为 14kD。以纯化的表达产物免疫Balb/c小鼠 ,眼球采血制备抗血清 ,抗血清效价在 10 3以上 ,并具有抑制VEGF诱导内皮细胞增殖的作用 ,在抑制肿瘤血管新生中具有潜在的应用前景。

牛IgG Fc受体Ⅱ胞外区在大肠杆菌中的表达及特性鉴定

从牛肺巨噬细胞cDNA文库中扩增编码牛IgGFc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)胞外区基因,PCR产物经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,插入原核表达载体pET28a的T7启动子下游,构建重组表达质粒pETboRⅡ。以pETboRⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析诱导表达菌体可见分子量约为27kDa的蛋白条带,该表达蛋白在细胞质中主要以不溶性包涵体形式存在。Westernblotting和Dotblot检测表明,boFcγRⅡ重组蛋白在变性条件下可与牛IgG特异结合,提示牛FcγRⅡ胞外区可能存在IgG线性结合表位。

山东省汉族人β_3肾上腺能受体基因多态性分析

应用多聚酶链反应 -限制性片段长度多态性 (PCR- RFL P)技术对 2 12例山东省汉族人 (非糖尿病 80例 ,2型糖尿病 132例 )进行 β3 肾上腺能受体 (β3 AR)基因 Trp6 4 Arg突变分析。结果表明 ,山东汉人β3 AR Trp6 4 Arg等位基因变异频率为 15% ,2型糖尿病组与非糖尿病组β3 AR Trp6 4 Arg基因型和等位基因分布频率无显著差异 (P>0 .0 5)。提示山东省汉族人存在 β3 AR基因变异 。

Fcγ受体3A在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的分析Fcγ受体3A(FCGR3A)在脑胶质瘤中的表达特点及其临床意义。方法选取中国脑胶质瘤基因组图谱数据库中1018例脑胶质瘤患者的转录组数据及临床资料,同时选用癌症基因组图谱数据库中668例脑胶质瘤患者的数据进行验证,分析FCGR3A在脑胶质瘤中的表达特征。采用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归分析FCGR3A相对表达量对脑胶质瘤患者生存时间的影响。通过基因本体(GO)功能富集分析FCGR3A及其相关基因的生物学功能;对患者的转录组数据进行免疫浸润评分,探究FCGR3A相对表达量与肿瘤免疫浸润程度的关系。结果FCGR3A相对表达量随脑胶质瘤恶性程度上升而增加,在高恶性程度的胶质母细胞瘤、异柠檬酸脱氢酶野生型胶质瘤和间质型胶质瘤均高表达。FCGR3A高表达患者总生存期显著低于低表达组,单因素及多因素Cox回归显示FCGR3A高表达是胶质瘤患者总生存期的独立危险因素。GO分析显示FCGR3A参与免疫细胞激活等多种免疫过程,免疫浸润分析显示FCGR3A相对表达量与胶质瘤内免疫细胞浸润程度正相关。结论FCGR3A表达与脑胶质瘤恶性程度正相关,可作为胶质瘤患者预后的预测指标及潜在的治疗靶点。

急性髓系白血病患者化疗后感染FcγRⅡA基因多态性及血清CD64和HNL与PDW的预测价值

目的探讨急性髓系白血病(AML)患者化疗后感染Fcγ受体ⅡA(FcγRⅡA)基因多态性及血清CD64、中性粒细胞载脂蛋白(HNL)、血小板分布宽度(PDW)的预测价值。方法选取2020年10月-2023年10月青岛市中医院收治的AML化疗患者161例,根据化疗后感染情况分为感染组(62例)和未感染组(99例);统计AML患者化疗后感染的病原菌;检测血清CD64、HNL、PDW水平;比较两组血清CD64、HNL、PDW水平及其对AML患者化疗后感染的诊断价值;采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测两组患者FcγRⅡA基因多态性。结果AML化疗后感染患者共培养分离病原菌71株,其中革兰阴性菌44株,革兰阳性菌21株,真菌6株,以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和表皮葡萄球菌为主;感染组血清CD64、HNL和PDW分别为(80.65±26.22)%、(90.52±30.16)ng/ml和(12.39±4.10)%高于未感染组(P<0.05);CD64、HNL、PDW及其联合检测诊断AML患者化疗后感染的曲线下面积(AUC)分别为0.770、0.733、0.773和0.935;联合诊断的AUC高于各项单独检测(P<0.05);感染组FcγRⅡA基因R131位点GG基因型、G等位基因频率分别为41.94%、62.10%高于未感染组,AA基因型和A等位基因频率分别为17.74%、37.90%低于未感染组(P<0.05)。结论AML患者化疗后感染多为革兰阴性菌,且化疗后感染发生后CD64、HNL、PDW呈高表达,联合检测CD64、HNL、PDW有助于诊断AML患者化疗后感染;FcRIⅡIA基因多态性可能参与AML患者化疗后感染。

IgE低亲合力受体基因外显子9G/A多态性与支气管哮喘易感性

目的探讨IgE低亲和力受体基因(FcεRⅡ)外显子9是否存在G→A突变并研究其与哮喘易感性的关系。方法正常组和哮喘组各100例,抽取外周血2ml,分离血细胞并提取DNA,用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)分析检测外显子9上的G→A碱基突变,如存在G→A突变,则用χ2检验比较哮喘组与正常组之间基因型频率与等位基因频率。结果本实验未能发现基因外显子9上存在G→A突变,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测不到RFLP。结论所研究人群中到FcεRⅡ基因不存在(G→A)点多态性。

CYP3A5、CYP2C9、AGTR1基因多态性对单药治疗原发性高血压疗效的影响研究

目的探讨CYP3A5、CYP2C9和AGTR1基因多态性对原发性高血压患者钙离子拮抗剂(CCB)和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)类药物疗效的影响。方法将2020年9月至2021年6月在湖北省中医院就诊的使用CCB或ARB类降压药单药治疗的106原发性高血压患者纳入研究,其中72例口服CCB类降压药,46例口服ARB类降压药。收集纳入研究者基本资料和服药前后血压,每周随访。按照血压降低幅度,分为显效组、有效组、无效组。观察4周后,采用PCR熔解曲线法检测CYP3A5、CYP2C9和AGTR1基因型。对各基因的多态性及基因型对疗效的影响进行统计学分析。结果72例口服CCB类单药的原发性高血压患者中,显效34例、有效17例、无效21例。46例口服ARB类单药的原发性高血压患者中,显效22例、有效13例、无效11例。单用CCB或ARB类药物的疗效与患者性别、年龄、身高、体重、体质量指数无关(P>0.05)。对于单用CCB类或ARB类降压药的患者,CYP3A5的基因多态性为疗效的影响因素(P<0.05),而CYP2C9和AGTR1的基因多态性不是疗效的影响因素(P>0.05)。对于单用CCB类药物的原发性高血压患者,CYP3A5*1/*3基因型比*1/*1基因型提高疗效8.973倍(P<0.05);对于单用ARB类药物的原发性高血压患者,CYP3A5*3/*3基因型的临床疗效是*1/*1基因的6.09倍(P<0.05),*1/*3基因型比*1/*1基因型提高疗效7.025倍(P<0.05)。结论CYP3A5的基因多态性及基因型会影响CCB类和ARB类降压药物的疗效。

儿童急性白血病化疗医院感染病原菌及其与FcγRⅡA基因多态性的关联

目的 研究急性白血病化疗医院感染患儿病原菌、Fcγ受体ⅡA(FcγRⅡA)基因多态性分布及其影响因素。方法 回顾性收集2019年1月-2022年8月济宁医学院附属医院收治的109例急性白血病化疗患儿临床资料,根据患儿是否发生医院感染将其分为感染组(46例)和未感染组(63例),统计急性白血病化疗患儿医院感染病原菌分布情况,比较两组一般资料、血清生化指标、FcγRⅡA基因多态性,采用多因素Logistic回归分析急性白血病化疗患儿医院感染的影响因素。结果 109例急性白血病化疗患儿发生医院感染共46例,检出病原菌57株,其中革兰阴性菌38株,占比66.67%;革兰阳性菌15株,占比26.32%;真菌4株,占比7.02%;感染组FcγRⅡA基因多态性H型占比低于未感染组,R型占比高于未感染组(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,年龄<5岁、化疗阶段为诱导化疗期、抗菌药物使用时间≥5 d、住院时间≥30 d、外周血中性粒细胞(N)、血清白蛋白(ALB)水平较低、FcγRⅡA基因多态性为R型均为急性白血病化疗患儿医院感染的独立影响因素(P<0.05)。结论 急性白血病化疗患儿主要感染病原菌种类为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、链球菌及光滑假丝酵母、白假丝酵母,FcγRⅡA基因多态性分布存在较大差异,其影响因素较多,临床可据此对有相关特征的患儿进行针对性治疗或干预,降低急性白血病化疗患儿医院感染发生的风险。

中国南方人群Fc受体γ链基因3′端非翻译区基因多态性与系统性红斑狼疮的关系

目的 探讨Fc受体γ链基因3’端非翻译区(3’-UTR)基因多态性现象在中国南方人群中的分布及与系统性红斑狼疮(SLE)易感性和临床表现的关系。方法 采用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)方法检测180例SLE患者和140例正常对照组Fc受体γ链基因3’-UTR 3847及3804位点基因型。结果 SLE患者Fc受体γ链基因3’-UTR 3847位点CC基因型频率(8.9％)及C等位基因频率(32.7％)较对照组(2.9％及23.6％)明显升高(P<0.025);而TT基因型频率(43.3％)及T等位基因频率(67.3％)较对照组(55.7％及76.4％)明显降低(P<0.025)。SLE伴狼疮肾炎(LN)患者CC基因型频率及C等位基因频率较不伴LN的患者明显升高(P<0.05及P<0.025)。对Fc受体γ链基因3’-UTR 3804位点基因型的研究显示,在全部病例和对照组中仅1例SLE患者为TG型,其余均为TT型。结论 SLE患者Fc受体γ链基因3’-UTR 3847位点C等位基因与SLE发病及LN的发生有关。3804位点基因多态性现象在中国南方人群中少见,该位点的多态性与SLE发病无关。

降钙素基因相关肽通过降低炎性小体活性抑制巨噬细胞功能

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)抑制巨噬细胞炎性反应的机制。方法使用不同浓度CGRP处理LPS活化/未活化的小鼠巨噬细胞(RAW264.7),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测巨噬细胞内促炎细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和还原型辅酶Ⅱ氧化酶-活性氧簇-NOD样受体蛋白3(NLRP3)mRNA表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测细胞上清分泌型IL-1β和TNF-α蛋白表达量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内NLRP3蛋白表达水平。结果 CGRP显著降低LPS活化/未活化RAW264.7细胞内炎性因子IL-1β、TNF-α、NLRP3 m RNA水平与蛋白水平,同时,NLRP3下游调节分子Caspase-1的蛋白水平被显著下调。在mRNA水平,NLRP3随CGRP剂量变化而变化的趋势与IL-1β、TNF-α非常相似。结论CGRP抑制巨噬细胞炎性激活,其机制可能与CGRP抑制NLRP3表达与活性有关。

基因沉默技术研究丹参酮ⅡA抗雌激素受体阴性乳腺癌细胞增殖的GPER途径

目的：利用经典核雌激素受体（ER）阴性、膜G蛋白偶联雌激素受体（GPER）阳性乳腺癌SKBR3细胞探索丹参酮ⅡA（TanshinoneⅡA）对肿瘤细胞增殖活性的影响及其GPER介导功能。方法：应用GPER Si RNA转染构建GPER基因沉默的SKBR3细胞,并用Western Blot方法检测基因沉默效果;利用MTT细胞增殖速率、PI细胞周期测定方法观察丹参酮ⅡA对SKBR3细胞增殖速率、细胞增殖指数的影响及GPER的介导作用。利用Western Blot方法检测丹参酮ⅡA对SKBR3细胞周期蛋白Cyclin D表达的影响及GPER的介导功能。结果：（1×10^-5～1×10^-8）mol/L丹参酮ⅡA能够显著降低SKBR3细胞增殖速率,（1×10^-5～1×10^-6）mol/L丹参酮ⅡA能够显著下调细胞增殖指数,且上述抑制作用可因GPER基因沉默而明显减弱。Western Blot测定结果表明,（1×10^-5～1×10^-6）mol/L丹参酮ⅡA可使SKBR3细胞Cyclin D蛋白表达显著降低,且该效应可被GPER基因沉默所拮抗。结论：丹参酮ⅡA具有抑制乳腺癌SKBR3细胞增殖的作用,该抑制作用是经GPER途径介导的。

2型糖尿病患者β_3-肾上腺素能受体基因突变与肥胖的关系

目的 研究 2型糖尿病患者 β3 肾上腺素能受体基因突变与肥胖的关系。方法 采用聚合酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性 (PCR RFLP)技术检测了 15 4例 2型糖尿病患者 β3 肾上腺素能受体基因Trp6 4Arg错义突变 ;同时检查体质指数、腰臀比值、血压及测定血脂等指标。结果 糖尿病伴有肥胖者Trp6 4Arg基因型的频率为 42 5 % ,Arg6 4等位基因的频率为 2 2 6 % ;突变频率在糖尿病伴有肥胖者与糖尿病体重正常者之间差异有显著性。突变与体质指数、收缩压、舒张压及HDL C相比有统计学意义。结论 糖尿病患者 β3 肾上腺素能受体基因突变与肥胖可能有关。

小鼠FGFR1/MIP3a-Fc融合基因真核表达载体的构建及表达

目的构建小鼠成纤维细胞生长因子受体1/巨噬细胞炎性蛋白3a-Fc融合基因(FGFR1/MIP3a-Fc)的真核表达质粒,并在293T细胞中的表达。方法设计合成FGFR1/MIP3a融合基因引物,用PCR方法扩增获得FGFR1/MIP3a基因片段,用内切酶消化后插入pc DNA3.1(+)/Fc(Mouse Ig G2a)质粒中,构建FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒;经PCR鉴定、酶切鉴定以及测序鉴定后,将该融合基因表达质粒瞬时转染293T细胞,用ELISA法检测其在293T细胞的表达。结果经PCR、酶切鉴定以及测序证实,FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒构建成功;ELISA检测FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒能够在293T细胞中表达。结论 FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒构建成功,该质粒能够在293T细胞中表达。

FcRL3基因单核苷酸多态性与中国汉族强直性脊柱炎相关性研究

目的 探讨Fc受体样基因3（FcRL3）部分单核苷酸多态性（SNP）在中国汉族强直性脊柱炎（AS）发病中的作用.方法 选取AS患者160例,健康对照组170例.用Mass-ArrayTM SNP检测仪对FcRL3基因上的SNP位点：FcRL3-1（rs0158440）、FcRL3-2（rs2225828）、FcRL3-3（rs7528684）、FcRL3-4（rs11284799）、FcRL3-5（rs945635）、FcRL3-6（rs3761959）、FcRL3-7（rs2210913）、FcRL3-8（rs2282284）、FcRL3-9（rs2282283）SNP进行检测.单倍型构建采用PHASEv2.1软件完成.结果 在AS组中FcRL3-1-1651C、FcRL3-3-169C、FcRL3-6 Intron3A、FcRL3-7 Intron3A等位基因频率病例组高于对照组 FcRL3-2-641C、FcRI3-4-110A、FcRL3-9 Intron15A等位基因频率病例组低于对照组 FcRL3-6、FcRL3-5和FcRL3-8SNP等位基因两组比较差异无统计学意义.AS组中单倍型FcRL3-1→9 CTCGCAAAA、CCCGGGGAA、CCCGCAAAC、CTCGCAAAC频率明显高于对照组 FcRL3-1→9 CCTGGGGAA和TCCACAAGA频率明显低于对照组.结论 FcRL3基因与中国汉族AS的易感性相关.

SuppreMol公司致力于研发用于治疗自身免疫疾病的生物制品

德国SuppreMol公司最近募集了1．55亿欧元巨资，主要用于其治疗特发性血小板减少性紫癜（ITP）和系统性红斑狼疮（SLE）的先导候选药物——可溶性重组人Fcγ受体IIb产品SM101的GMP生产和进一步的临床开发，