微RNA-454-3p、FERM结构域蛋白6在乳腺癌组织中的表达水平及临床意义

目的探讨微RNA(miR)-454-3p、FERM结构域蛋白6(FRMD6)在乳腺癌组织中的表达水平以及临床意义。方法选取唐山市人民医院2016年12月至2018年12月住院手术的150例乳腺癌病人术中切除的乳腺癌组织标本及癌旁组织标本;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-454-3p、FRMD6在组织中的水平;采用Kaplan-Meier法分析miR-454-3p、FRMD6水平与乳腺癌病人预后的关系,并用log-rank法进行检验;Cox回归分析影响乳腺癌病人预后的因素。结果乳腺癌组织miR-454-3p水平(1.25±0.24)高于癌旁组织(0.99±0.22),FRMD6水平(0.79±0.19)低于癌旁组织(1.01±0.24),差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中miR-454-3p、FRMD6水平与淋巴结转移、组织分化以及TNM分期有关(P<0.05);miR-454-3p高表达组和FRMD6低表达组病人3年累积生存率分别低于miR-454-3p低表达组和FRMD6高表达组病人(均P<0.05);miR-454-3p高表达、FRMD6低表达、TNM分期为Ⅲ/Ⅳ期、淋巴结转移是影响乳腺癌病人预后的危险因素(P<0.05)。结论miR-454-3p在乳腺癌组织中表达上调,FRMD6在乳腺癌组织中表达降低,二者与乳腺癌病人预后密切相关,有望成为临床上预测乳腺癌病人预后的生物性标志物。

下调miR-3613-5p通过靶向FRMD6调控肾癌细胞增殖和细胞周期

目的探讨下调miR-3613-5p通过靶向含FERM结构域蛋白6(FRMD6)调控肾癌细胞增殖和细胞周期的分子机制。方法以OncoLnc预后分析数据库分析miR-3613-5p表达水平与肾癌患者预后的关系。用qPCR检测肾癌细胞株(A498、Caki-1、OS-RC-2、ACHN)和正常肾小管上皮细胞HK-2中miR-3613-5p的表达水平。分别将miR-3613-5p抑制物和阴性对照质粒(si-miRCon)转染至Caki-1细胞,分为si-miR-3613-5p组和si-miR-Con组。用CCK-8法和PI染色流式细胞术分别检测miR-3613-5p抑制物对Caki-1细胞增殖和细胞周期的影响。qPCR和Western blotting检测Caki-1细胞中FRMD6 mRNA和蛋白的表达。Western blotting检测AKT/MAPK信号通路蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-3613-5p和FRMD6的靶向关系。结果与miR-3613-5p表达较高的肾癌患者相比,miR-3613-5p低表达肾癌患者的生存率较高(P<0.01)。与HK-2细胞相比,miR-3613-5p在肾癌细胞株中高表达(均P<0.05),Caki-1细胞中miR-3613-5p表达最高(P<0.01)。与si-miR-Con组相比,si-miR-3613-5p组Caki-1细胞增殖能力显著被抑制(P<0.05),细胞周期进展被明显抑制(P<0.01),FRMD6基因表达明显增加(P<0.01),AKT/MAPK信号通路蛋白p-AKT1、p-MAPK3、CCND1表达明显降低。双荧光素酶报告基因实验证实FRMD6是miR-3613-5p的靶基因。结论下调miR-3613-5p表达能够明显促进FRMD6基因表达,进而抑制肾癌细胞增殖和细胞周期进展。

差异凝胶电泳筛选人骨肉瘤细胞多药耐药相关蛋白

目的:应用差异凝胶电泳分析骨肉瘤多药耐药细胞株与亲本细胞株蛋白质表达的差别,筛查骨肉瘤细胞多药耐药相关蛋白。方法:以小剂量多柔比星(doxorubicin,DXR)诱导人骨肉瘤细胞株MG-63,建立骨肉瘤多药耐药细胞株MG-63/DXR100。以差异凝胶电泳分离两组细胞中的全部蛋白质,应用图像扫描和DeCyder软件分析差异(表达增加或减少>30%)表达的蛋白质点,对其进行质谱鉴定,并在Mascot数据库中检索。结果:共检测到明显差异表达的蛋白质点30个,选择其中18个点进行质谱鉴定,有5个蛋白质点鉴定成功,它们分别是与肿瘤细胞转移相关的基质金属蛋白酶1(matrix metalloprotein-ases1,MMP1)、具有解毒功能的乙醇脱氢酶6(alcohol dehydrogenase6,ADH6)、属于抑癌基因的FERM域结合蛋白3(FERM domain containing protein3,FRMD3),以及两个分别由128和300个氨基酸残基构成的未知蛋白。MMP1、ADH6和2种未知蛋白在耐药细胞表达显著高于非耐药细胞组,而FRMD3表达显著显著低于非耐药细胞。结论:通过差异凝胶电泳筛查到,MMP1、ADH6、FRMD3及2种未知蛋白质在骨肉瘤细胞的多药耐药细胞和非耐药细胞中差异表达,它们可能参与骨肉瘤细胞的多药耐药机制。